如何看抗体检测结果及检测应用ppt课件

以人为本 以正兴邦 如何看抗体检测结果及抗体检测应用 隋海亮 2014年7月5日 文档密级：内部公开 以人为本 以正兴邦 2 一、猪瘟 ELISA原理 阻断（竞争）ELISA 抗 体 抗原 加 入 样 品 洗 涤 + 酶 标 记 物 洗 涤 + 底 物 蓝 色 淡 蓝 色 终 止 读 数 阻 断（竞争）ELISA 原理 例如：CSFV-Ab、PRV-gI、PRV-gB 以人为本 以正兴邦 3 猪瘟疫苗的免疫评估关注两点 p 阳性率： 猪瘟抗体（阻断率（Blocking）40%，判为阳性结果；30% Blocking40%，判为可疑结果；Blocking30%，判为阴性结 果）； 免疫合格率：阻断率（Blocking）50%的，即为免疫合格。免 疫合格的比例即为免疫合格率。 以人为本 以正兴邦 4 p 变异系数： Coefficient of Variation (CV) 变异系数计算的是平均个体的变化，以平均滴度的背离的百分数来表 示 公式如下 标准偏差（STDEV） CV= X 100% 平均阻断率 CV40%,显示了群内猪只有一个均衡的、相似反应 CV60%,显示了群内猪只滴度反应变化高于正常估计值 以人为本 以正兴邦 5 猪瘟检测的应用 p 免疫评估： 商品猪：猪瘟二免后4-6周 ，要求：阳性率 80%,CV40% 种猪群（公猪和母猪）：猪瘟免疫后4-6周，要求 ：免 疫合格率80%（严格一点，要90%）,CV40% 后备猪（全群检测）：进入隔离舍后1-2周、进入配种 舍前1个月（6-6.5月龄），要求： Blocking 40%， 阴性猪补打疫苗，3周后复检，不合格淘汰。 以人为本 以正兴邦 6 猪瘟检测的应用 p 仔猪首免日龄的确定： 选30-60头仔猪，日龄和体重相近，每窝1-2头，确认 没有野毒感染的风险，不接种猪瘟疫苗 连续采血：出生后7天、14天、21天、28天、35天、 42天检测抗体水平 要求：CSFAb Block30%仔猪占20%-40%时为首免 日龄(依据感染压力和平均阻断率而定)。 以人为本 以正兴邦 7 以人为本 以正兴邦 8 以人为本 以正兴邦 9 应用 p 公猪 季度性监测全部公猪 ，一年4次 要求： S/P2.5公猪暂停使用(1-2个月)或PCR确认感染状态 p 母猪 季度性监测母猪 要求：S/P应主要在2.5 S/P 0.4(90%母猪抗体在免疫后转阳) p 后备母猪和后备公猪 在引进种群前1个月，全群监测 要求：S/P2.5和S/P0.4暂停引入繁殖群 以人为本 以正兴邦 10 应用 p 动态检测 4周龄、10周龄猪群，每次20-30样本 主要是：分析蓝耳感染状态，判断猪群是否稳定，(对于不稳定群体,延迟 转群或免疫等)，如果S/P2.5的比例超过5%，则判断该场蓝耳不稳定， 有感染；没有则稳定。 以人为本 以正兴邦 11 三、伪狂犬 p 伪狂犬gE：结果成立条件：阴性对照平均值-阳性对照平 均值必须大于或等于0.3；否则试验无效。 p 判定结果：如果S/N值低于或等于0.60，样品应判定为阳 性；如果S/N值大于0.70，样品应判为阴性；处于0.60.7 的样品判定为可疑，间隔两周时间可重新检测。 伪狂犬病毒 gE片段 gB片段 疫苗病毒片段 以人为本 以正兴邦 12 猪群PRV感染状况的普查 p 采样要求 公猪群：全部采样 生产母猪群：随机采样30个样本 15周龄后的生长猪（母源抗体消失）：随机采样20-30个样本 p 检测方法 IDEXX PRV gI ELISA S/N0.6 阳性，S/N0.7阴性0.6S/N0.7 隔离2 周后重复检测 p 普查结果分析： 低感染群：种猪阳性率10%以下，可做净化 高感染群：种猪阳性率10%以上，低于30%，可做净化；高于 30%，通过疫苗控制，来稳定猪群 以人为本 以正兴邦 13 伪狂犬疫苗的免疫评估针对阴性场 p 商品猪群 免疫疫苗后4-6周，随机采样20-30份 要求：gE抗体检测全部为阴性； gB抗体检测阳性率95% 以人为本 以正兴邦 14 p 伪狂犬的评级标准： 伪狂犬gE抗体全阴性，则为阴性场 伪狂犬gE抗体阳性，但检测15周龄猪，gE抗体转阴，则为阳性稳 定场 伪狂犬gE抗体阳性，但检测15周龄猪，gE抗体阳性率达到20%以 上，则为阳性不稳定稳定场 以人为本 以正兴邦 15 应用净化 p 母猪群,公猪群(全部) 过去6-12个月没有使用全病毒灭活苗或非gE基因缺失弱毒疫苗 若S/N0.6 则淘汰（对于怀孕母猪:可以先隔离,产后2周淘汰）; 若0.6S/N0.7 淘汰或隔离2周后重复检测,阳性者淘汰; 间隔6,12个月重复检测全群,若前后两次检测全部为阴性，则后续 检测不需要全群采样,可以按季度检测:每群随机采样15-20份; 若季度检测时出现阳性猪只,其所在猪舍则需要全部检测,阳性淘