基因表达载体构建ppt课件

二 基因表达载体的构建 思考与讨论： 1 基因载体必须具备的基本条件是什么？ 2 基因工程可做载体的结构有那些？最 常 使 用 的载体是什么？ 3 请图示大肠杆菌质粒结构。 4 从苏云金芽孢杆菌细胞DNA分子中提取得到 Bt毒蛋白基因能否直接进入普通棉细胞中？ 如果把目的基因人工注射到普通棉细胞中， 那么该基因在棉细胞中会稳定存在，复制和表 达吗？ 5 假如你是一个基因工程操作者，若使目的基因 进入棉细胞，并能在棉细胞中遗传和表达，你 应当采取什么办法？你能说出其中的理由吗 ？ （一 ）基因表达载体的构建 2 请你定义：基因表达载体构建之含义？ 1 基因工程操作中，构建基因表达载体之目的 是什么？ 将目的基因、启动子和终止子科学按装 在经修饰和改造完备的载体之上。 确保目的基因在受体细胞中稳定存在、 复制、遗传和表达，使其发挥作用。 3 基因表达载体之基本组成是什么？ （1）结构基因即提取的目的基因核苷酸序列，负责 编码目标蛋白质。 （2）启动子位于编码蛋白质结构基因之首一段殊结 构的DNA片段，RNA聚合酶的识别部位和结合部位 。 （3）终止子位于编码蛋白质结构基因末端一段特殊 结构的DNA片段，具有终止基因转录过程的作用。 （4）复制原点能够自我复制保证目的基因在受体细 胞中复制遗传和表达。 （5）遗传标记基因检测受体细胞中是否含有目的基 因，从而将含有目的基因的细胞筛选出来。 请你以质粒作载体构建基因表达载体之模式图 基因表达载体 基因表达载体 启动子 复制原点 终止子 插入目的基因 遗传标记基因 三 将目的基因导入受体细胞 基因导入受体细胞的标志是什么？ 1目的基因与载体在受体细胞共同复制、遗 传和表达。或目的基因插入细胞染色体上DNA分 子之中，随同受体细胞DNA分子复制、遗传和表 达。 2 实际上外源目的基因变成了受体细胞的一部 分，这种现象叫做转化。 2 目的基因导入受体细胞遵循的基本原理是什么？ 通常借鉴细菌或病毒侵染细胞和寄生之途径。 （一）将目的基因导入植物细胞 农杆菌是一种在土壤中生活的微生物，在 自然条件下易感染双子叶植物和裸子植物，而 对大多数单子叶植物没有感染力 。 2 感染原理： 当植物体受到损伤时，伤口处细胞分泌大 量的酚类化合物，吸引农杆菌移向这些细胞， 这时农杆菌中的Ti质粒上的TDNA分子可转 移至受体细胞，并且整合到受体细胞染色DNA 分子之上。 1 农杆菌转化法 目 标 农杆菌转化法示意图 农杆菌 目标细胞 Ti质粒 TDNA 核DNA EcoRI酶 DNA 重组 农杆菌 转基因植物 侵染 转化 （二） 将目的基因导入动物细胞 2 实例 1 基因工程培育转基因动物最常用、最有效的 2 方法显微注射技术 （1）将含有目的基因的表达载体提纯； （2）从雌性动物体内取出受精卵细胞。 （3）用显微注射仪把目的基因注射到受精卵细胞； （4）把含有目的基因的受精卵移植到雌性动物子 宫或输卵管发育成具备新性状的动物。 世界上第一例体型比普通小鼠大1.8 倍的转 基因“超级小鼠”就是用显微注射技术获得成功 。 （三） 将目的基因导入微生物细胞 目的基因导入大肠杆菌最常用的转化方法是： 1 用Ca2+ 处理大肠杆菌细胞，使细胞处于能 够 吸收环境中DNA分子的生理状态，这种细胞称 为感受态细胞。 2 用大肠杆菌质粒与目的基因进行重