医院感染微生物学课件

医院感染微生物学监测 医院感染监测的定义 医院感染监测是指长期地、系统地、有计 划地、主动地观察一定人群中医院感染发 生和分布以及影响医院感染的各种因素， 对监测资料进行定期的整理分析，确定其 分布动态和变化趋势，向有关人员和单位 发送、反馈，并及时采取防治对策和措施 ，同时对其防治效果和经济效益作出评价 ，不断改进，以期达到控制和降低医院感 染的目的。 医院感染监测的内涵 要有一个长期的监测计划，连续系统地收集 资料 定期汇总并经分析和解释所收集的资料，使 之成为有意义的材料，向有关人员或单位反 馈或报送 准确地确定医院感染的各种问题，以便有针 对性地采取控制措施 对各种监测方法和手段要进行评价 要确定诊断标准 医院感染监测的目的 医院感染监测是医院感染控制的先行，医 院感染控制水平是反映医疗技术水平的重 要评价指标之一。 目的是为了控制医院感染的各种危险因素 ，降低医院感染的各种危险因素、降低医 院感染的发生率，保证和提高医疗质量和 医疗安全 医院感染监测简史 医院感染监测源于19世纪中叶，产褥热发 生原因的调查研究 医院感染监测的系统发展始于20世纪50 年代欧美MRSA(耐甲氧西林金黄色葡萄 球菌)感染的流行 美国在60年代开始成立医院感染控制委员 会，在医院中开展空气和环境的细菌学监 测 医院感染监测的组织系统 院长领导下的医院感染管理委员会 医院感染科 科室医院感染管理小组 组成三级医院感染监测管理网络 监测内容 医院空气微生物学监测 医务人员手的微生物学监测 物体表面微生物学监测 使用中的消毒剂的微生物学监测 压力蒸汽和干热灭菌效果的微生物学监测 医疗器械消毒效果的微生物学监测 监测的时机 定期常规监测 次个月 针对性监测 医院感染暴发流行时 环境变动时监测 新环境 基本原则 严格执行国家统一标准方法 2012医疗机构消毒技术规范 监测前准备 检验科的准备 营养琼脂培养皿，一次性使用采样棉试子 ，一次性无菌规格板，无菌生理盐水，压 力蒸汽消毒锅，生物培养箱等 临床科室的准备 申请单的填写，无菌采样包（棉试子，剪 刀，镊子）医务人员六步法洗手，记录笔 ，标签。 申请单的填写 环境类别；采样时间；科室；采样人员； 平皿规格；监测项目；监测目地；房号。 医务人员；采样面积；样本号。 品名；批号；商标。 培养皿 倒置拿培养皿，在底部标记 1：防止凝结在皿盖上的水蒸气流到培养 基表面导致染菌！ 2：有利于菌种利用培养基营养，加快生 长速度 空气微生物学监测 （采用洁净技术，未采用洁净技术） 采集频率 采样时间 沉降法或浮游菌法采集 （参照GB50333要求进行监测） 洁净手术室及其他洁净室 沉降法或浮游菌法采集 静态：室内设施及功能齐备，空调净化系 统正常运行，但无人员的状态。 洁净系统自净后与从事医疗活动前 或怀疑与医院感染暴发有关时 地面上或不高于地面0.8m的任意高度 30min 放置培养皿 手术洁净度级别不同，放置个数不同 洁净手术室静态空气监测方 法 局部百级周围千级 洁净手术室静态空气监测方 法 局部千级周围万级 洁净手术室静态空气监测方 法 局部万级周围十万级 洁净手术室静态空气监测方 法 局部十万级 洁净手术室静态空气监测方 法 洁净度三十万级设置个点 面积30m2布放4点,面积100cm2时,取100cm2。 采样方法：用55cm2的标准灭菌规格板，放在 被检物体表面。用浸有含相应中和剂的无菌采 样液的棉拭子1支，在规格板内横竖往返各涂抹 5次，并随之转动棉拭子，连续采样14个规格 板面积，剪去或折去手接触部份，棉拭子放入 装有10ml采样液的试管中送检，门把手等小型 物体则采用棉拭子直接涂抹物体的方法采样 物体表面的监测 检测方法： 将采样管在混匀器上振荡20s或用力振摇80次， 用无菌吸管吸取1.0ml接种于灭菌平皿，每一样 本接种2个平皿，内加入已溶化的45480C的营 养琼脂1518ml，边倾注边摇匀，待琼脂凝固 后置361温箱培养48小时，计数菌落数。 物体表面的监测 结果报告（菌落总数） 计算公式： 物体表面细菌菌落总数(cfu/cm2)= 其中小件物品以cfu/件报告结果 平皿上菌落的平均数x稀释 倍数 采样面积(cm2 ) 洁净手术部、其他洁净场所，非洁净手术部（ 室）、非洁净骨髓移植病房、产房、导管室、 新生儿室、器官移植病房、烧伤病房、重症监 护病房、血液病病区等；物体表面细菌菌落总 数5cfu/ cm2。 儿科病房、母婴同室、妇产科检查室、人流室 、治疗室、注射室、换药室、输血科、消毒供 应中心、血液透析中心（室）、急诊室、化验 室、各类普通病室、感染疾病科门诊及其病房 等；物体表面细菌菌落总数10cfu/ cm2。 使用中消毒液细菌总数监测 采样方法： 用无菌吸管吸取1.0ml待检样品，在无菌 条件下加入9.0ml含相应中和剂的采样液 中混合后送实验室检验（采样液可以用 N.S代）。 ：将样品管充分混合后，用无菌吸管吸 取1.0ml待检样品 接种于灭菌培养皿中（共接种2只平皿 ，做平行样），加入熔化的40-45 灭 菌营养琼脂15ml混合后，待其凝固，翻 转平板置37 培养48-72h作菌落计数 。 醇类与酚类消毒剂用普通营养肉汤中和，含氯 消毒剂、含碘消毒剂和过氧化物消毒剂用含 0.1%硫代硫酸钠中和剂，洗必泰、季铵盐类消 毒剂用含0.3%吐温80和0.3%卵磷脂中和剂，醛 类消毒剂用含0.3%甘氨酸中和剂，含有表面活 性剂的各种复方消毒剂可在中和剂中加入吐温 80至3%；也可使用该消毒剂消毒效果检测的中 和剂鉴定试验确定的中和剂 结果计算 细菌总数(cfu/ml)=N10 N平均菌落数 10换算成10ml，即1ml采样量，结果 按每ml报告。 消毒液染菌量（cfu/ml）=平均每皿菌落数 10稀释倍数 结果判断 使用中灭菌用消毒液：无菌生长； 使用中皮肤黏膜消毒液染菌量： 10cfu/ml， 其他使用中消毒液染菌量100cfu/ml。 压力蒸汽灭菌效果的监测 方法: 物理监测法、化学监测法、生物监 测法和BD测试 标准生物测试包的制作方法 标准指示菌株：嗜热脂肪杆菌芽孢，菌片含菌 及抗力符合国家有关标准； 标准测试包的制作：由16条41cm66cm的全棉 手术巾制成。制作方法：将每条手术巾的长边 先折成3层，短边折成2层，然后叠放，制成 23cm23cm15cm的测试包 标准生物测试包或生物PCD的制作方法：将至少 一个标准指示菌片装入灭菌小纸袋内或至少一 个自含式生物指示剂，置于标准试验包的中心 部位即完成标准生物测试包或生物PCD的制作 培养方法： 经一个灭菌周期后，在无菌条件下取出标 准试验包的指示菌片，投入溴甲酚紫葡萄 糖蛋白胨水培养基中，经561培养 7d（自含式生物指示物按产品说明书执行 ），观察培养结果； 结果判定 阳性对照组培养阳性，阴性对照组培养阴 性，试验组培养阴性，判定为灭菌合格。 阳性对照组培养阳性，阴性对照组培养阴 性，试验组培养阳性，则灭菌不合格；同 时应进一步鉴定试验组阳性的细菌是否为 指示菌或是污染所致。自含式生物批示物 不需要做阴性对照 干热灭菌的效果监测 方法: 物理监测法、化学监测法、生物监测法 标准生物测试管的制作方法 标准指示菌株：枯草杆菌黑色变种芽孢，菌片 含菌及抗力符合国家有关标准 标准生物测试管的制作方法：将标准指示菌片 分别装入灭菌中试管内（1片/管） 监测方法：将标准生物测试管，置于灭菌器最 难灭菌的部位，即灭菌器与每层门把手对角线 内、外角处放置2个含菌片的试管，试管帽置于 试管旁，关好柜门，经一个灭菌周期后，待温 度降至80时，加盖试管帽后取出试管。并设 阳性对照和阴性对照 培养方法 在无菌条件下，加入普通营养肉汤培养基 （5mL/管），361培养48h，观察初 步结果，无菌生长管继续培养至第7d 结果判定： 阳性对照组培养阳性，阴性对照组培养阴性， 若每个指示菌片接种的肉汤管均澄清，判为灭 菌合格；若阳性对照组培养阳性，阴性对照组 培养阴性，而指示菌片之一接种的肉汤管混浊 ，判为不合格；对难以判定的肉汤管，取0.1mL 接种于营养琼脂平板,用灭菌L棒或接种环涂匀, 置于361培养48h,观察菌落形态,并做涂片 染色镜检,判断是否指示菌生长,若有指示菌生长 ，判为灭菌不合格；若无指示菌生长,判为灭菌 合格 医疗器械采样及检查方法 无菌检验的定义：指检查经灭菌的敷料、缝线 、一次性使用的医疗用品、无菌器械以及适用 于无菌室的其他品种是否无菌的一种方法。 无菌检验应在洁净度为100级单向流空气区域 内进行 应严格遵守无菌操作，避免微生物污染 对单向流空气区域及工作台面，必须进行洁净 度验证 医疗器械采样及检查方法 采样时间 在灭菌处理后，存放有效期内采样 医疗器械采样及检查方法 采样方法 缝合针、针头、刀片等小件医疗器械： 取5件直接浸入6管需-厌氧培养管（其中一管 作阳性对照）与4管霉菌培养管。培养基用量为 15ml/管 医疗器械采样及检查方法 注射器： 取5付注射器，在5ml洗脱液中反复抽吸5次， 洗下管内细菌，混和后接种需厌氧菌培养管（ 共6管，其中1管作阳性对照）与霉菌培养管（ 共4管）接种量为1ml注射器0.5ml, 2ml注射器 1ml, 510ml注射器2ml ,2050ml注射器 5ml。培养基用量为接种量2ml以下15ml/管, 接种量5ml为40ml/管。 医疗器械采样及检查方法 手样钳、镊子等大件医疗器械： 取2件用蘸有无菌洗脱液的棉拭子反复涂抹采样 ，将棉拭子投入5ml无菌洗脱液中，将采样液混 匀，接种于需氧-厌氧培养管（共6管，其中1管 作阳性对照）与霉菌培养基（共4管）。接种量 为1ml/管，培养基用量为15ml/管。 医疗器械采样及检查方法 检测方法： 需设阳性及阴性对照管 待检样品的需氧-厌氧培养管及阳性与阴性对照 管30 35 培养5天，霉菌培养管与阴性对 照管20 25 培养7天，培养期间逐日检查 是否有菌生长。如不能从外观判断的样品需作 涂片染色镜检。 医疗器械采样及检查方法 无菌检验的结果判断 阳性对照在24h内应有菌生长，阴性对照在培 养期间应无菌生长 如需-厌氧管及霉菌培养管内均为澄清或虽显混 浊但经证明并非有菌生长，判为灭菌合格。 如任何一管明显混浊并证实有菌生长，应重新 取样，分别按同样方法复试2次，除阳性对照外 ，其他各管均不得有菌生长，否则判为灭菌不 合格。 消毒灭菌的卫生学标准 环环境 类别类别 范围围 标标准 空气物体表面手 类类洁净洁净 手术术室、洁净洁净 病房 10cfu/m3 0 5cfu/（ 30m