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文档简介
利用核磁共振波谱研究慢性心衰 心气虚证心肌能量代谢的病生理机制 林 谦 李岩 北京中医药大学东方医院 第二届全国中西医结合心血管病中青年论坛 第二届黄河心血管病防治论坛 国家自然基金项目(No.30772693) * 立 题 依 据 研究内容、目标 实 验 结 果 讨论与结论 内容概述 * 动力泵、 高耗能 能量不足引起 的能量超负荷 性心肌病 心脏特点心力衰竭 CHF实质 能量产生不足 、消耗增加 立项依据 现代医学对CHF和心肌能量的认识 * 立项依据 1 23 4 “气” 能量 相似性 心气虚 CHF 基本病机 中医治疗 CHF 特色优势 益气治疗 CHF 心气虚证 效果显著 中医对“气”和心气虚的认识 * 立项依据 慢性心衰心气虚证能量代谢 心肌能量 代谢障碍 病理生理 关键环节 心气虚证 慢性心力衰竭 基本病机 能量代谢障碍 CHF心气虚证 研究的切入点 ADP+ PiADP+ Pi Cr+ PiCr+ Pi ATPATPPCrPCr CKCK穿梭机制穿梭机制 心肌能量代谢及其调控机制 直接能量物质 能量储备物质 mi- CK CK-MM/MB/BB 立项依据 血流动力学 能量调控-CK穿梭机制 能量物质-ATP、PCr 提高能量物质含量 维持CK穿梭机制 益气药通过提高心肌能量物质含量 、维持CK穿梭机制治疗心气虚证 心气虚证 提出假说 * 研究内容 复制CHF心气 虚大鼠模型 益气药物治疗 模型大鼠 心气虚证指标 血流动力学 慢性心衰 心气虚证 心肌能量代谢障碍 CHF不同时相 心肌能量物质 动态变化 能量调控机制 关键分子 基因表达水平 心气虚 * 动物实验 造模、干预、 血流动力学 分子生物学 基因及蛋白 质表达 核磁共振 心肌能量物 质水平 理论升华 心气虚证 实质 从心肌能量 代谢角度进 一步阐明心 气虚证实质 研究目标 假手术结扎冠脉 左心室插管RT-PCR 31P核磁共振波谱 技术路线 * 研究方案-动物分组 动物实验动物实验 分组及给药分组及给药 L L MM Z Z X X J J 假手术组:不结 扎冠状动脉,术 后给予生理盐水 联合用药组:术后给予党 参、黄芪卡托普利 中药组 亚组1:术后予党参; 亚组2:术后予黄芪; 亚组3:术后予党参黄芪 (益气组) 模型组:术后给 予生理盐水 西药对照组:术 后给予卡托普利 * 心率加快 a心悸 呼吸频率加快 b气短、气促 活跃程度下降反抗轻微 c神疲 力竭性游泳时间缩短 d乏力 研究方案-一般状态 检测指标心气虚证 * 研究方案-血流动力学 监测心电 颈动脉插管 心室内压 舒缩功能 心脏功能 左室舒张末压 血流动力学检测 左室收缩压 左室收缩压最 大变化速率 左室舒张压最 大变化速率 收缩功能 舒张功能 * 保存 提取 样品 制备 实验 参数 数据 处理 核磁共振波谱检测流程 大鼠心脏组织 液氮急冻。用 1:1的 CH3CN:H2O匀 浆、离心取上 清液 水提残渣加入重水混匀, 离心取上清液加入核磁管 中,加入TSP/D2O溶液和 MDP/D2O溶液(终浓度2mM ) 谱宽sw=12000,采样 点np=8192,90度脉冲 宽度pw=14.1,弛豫延 迟时间d1=17s,采样 次数nt=100,采样温 度为27。 对所得NMR数据 经傅立叶变换得 到谱图,然后调 整相位并进行基 线校正 研究方案-能量物质 * 研究方案-能量物质 PCr ATP PCr/ATP 31P核磁共振 波谱检测 1.心气虚 证与心肌 能量物质 含量的相 关性 2.益气药 对心肌能 量代谢的 影响 * 心肌组织 能量调控机制 mi-CK反映能 量从ATPPCr 并存储的能力 CK同工酶反映 PCrATP并加 以利用的能力 运用RT-PCR法检 测mi-CK和CK-M 亚基、CK-B亚基 的mRNA表达水平 Western blot法测 定mi-CK、CK- MM、CK-MB、 CK-BB蛋白质水 平 研究方案-分子生物学 分子生物学检测 * 实验结果-心衰模型的建立 心脏冠脉结扎位点 心衰心脏(梗死区清晰可见, 左心室扩大、室壁变薄) * 实验结果-一般状态 模型组大鼠较假手术组 一般状态差,心率加快 ,力竭游泳时间缩短, 各用药组较模型组有所 改善 与假手术组相比, *P0.05,*P0.01;与模型组相比,P0.05,P0.01 * 实验结果-血流动力学 左心室内压曲线 左心室dp/dt曲线 +dp/dt max:收缩缩功能 -dp/dt max:舒张张功能 * 实验结果-血流动力学 与假手术组相比, *P0.05,*P0.01;与模型组相比,P0.05,P0.01 模型组大鼠心脏收缩功能 明显下降,各用药组较模 型组有所改善,中药组及 联合用药组改善更为明显 模型组大鼠心脏舒张功能 明显下降,各用药组较模 型组有所改善,党参组及 联合用药组改善更为明显 * 实验结果-能量物质 外参照物 磷酸肌酸PCr 三磷酸腺苷ATP * 实验结果-能量物质 模型组大鼠心肌能量储备物质PCr含量明显下降,各用 药组均有回升,党参组、益气组及联合用药组更为显著 与假手术组相比, *P0.05,*P0.01;与模型组相比,P0.05,P0.01 实验结果-能量物质 模型组大鼠心肌直接供能物质ATP含量明显下降,各用 药组均有回升,各中药组及联合用药组更为显著 * 实验结果-分子生物学 模型组大鼠CK-B m-RNA表达上升 ,各用药组明显 回落 与假手术组相比, *P0.05,*P0.01;与模型组相比,P0.05,P0.01 模型组大鼠CK-M m-RNA表达下降 ,各用药组明显回 升 模型组大鼠mi-CK m-RNA表达上升 ,各用药组有所下 降 实验结果-分子生物学 模型组大鼠腺苷酸转位 酶ANT1 m-RNA表达下 降,各用药组有所回升 与假手术组相比, *P0.05,*P0.01;与模型组相比,P0.05,P0.01 模型组大鼠腺苷酸转位 酶ANT2 m-RNA表达下 降,各用药组显著回升 心梗后心衰模型大鼠有明显的心气虚证表现 心率加快、呼吸频率加快-(心悸、喘促) 精神萎靡、喜静喜蜷缩易惊-(倦怠、易惊) 抓取时反抗轻微、力竭游泳时间缩短-(乏力) 心气虚表现与心脏收缩、舒张功能下降相关 益气药改善心气虚证,同时可以明显提高心脏收缩、舒张功能 讨论:心脏舒缩功能下降-心气虚 心脏的收缩、舒张过程都是耗能过程 收缩功能与能量物质水平呈正相关 舒张功能与能量物质水平呈正相关 能量物质不足导致心脏舒缩功能下降 益气药提高心肌能量物质含量 l益气药通过提高内在的心肌能量物质含量, 从而改善心脏收缩、舒张功能,进而改善外在 的心气虚证候表现 讨论:能量物质不足-心脏舒缩功能下降-心气虚 心肌能量物质调控机制:CK和ANT酶系功能 心衰模型组大鼠 CK-B mRNA表达升高,CK-M mRNA表达降低 Mi-CK mRNA表达降低,ANT mRNA表达降低 益气药可以稳定能量产生、转运、储藏、利用的关键酶 l益气药通过稳定能量代谢的调控机制提高心 肌能量物质含量 讨论-能量物质调控机制-心脏舒缩功能下降-心气虚 * 心肌能量物质的不足和能量代谢障碍 是慢性心衰心气虚证病理生理的重要机制 心气虚证、心功能下降与心肌能量物质下降正相 关,能量物质的不足导致了心气虚证的出现 CHF心气虚证模型复制成功 结论 益气药物维持能量物质含量及调控机制的稳定性, 改善左室舒缩功能, 改善心气虚证症状 * 利用核磁共振波谱研究 慢性心衰心气虚证心肌能量代谢 的病生理机制 vl)xWqvcPFPvQfnb4*Aj0EJzWFUyXUx#xI8#Hv5DPpFauw!Dpms+eL%OUtrl2JlB-IIgi$#zslI89zQ+Qa$xs*BegjB#KSvk8oLhlKIeF&dFp+(LMlhK#A7hvQ*IqmaokXGvIzYAZZWYq#C%xSPcFb)Zpzf)g0-8bmAOZF$K2FP-rXS1DyfwJ*WX&)d9ebd%NwT-2nsIRBUTsHlU5N7lIg%dMrE9)%X0RdhI5u6Pg4cmIyQEn&N&NfOFLB&2T3hQoCak+aTe0VZx8l*Wd9ekUqAnF6wmhGQTqqLsBi&Mx-fPCgUgC(%tw+0tan47EwZD4m9Nr2GP!W- zG&buojYyuWSSH0w4oABG&RORGaKqruM9fOR1)O$oxAyUxvA7bRXLfDUi8$v8GNneCrvS!xL5Uy2zS)+OqW0V3p7IHpSSP3ODf4Q#*vLlY4TK*5k6$&uNxFbm1SyAdOwPx3AWC7Jo&%cdXPIEaiMl#b$!)20yBooM3!mgvFWtVkaal2oC5X9IfcZ4Oc3IIeCdzPAVr6tqYEd4ABQ(CxXGA!INV)bC1#EfBvUf!f1vE*QdhrWpD+u43%-gYR+t8i(vfo&Jp&jK)n#FvLHCzKqmmBj%EwAUC%HzoVLkw#FcUpv$mQarhSohGAK-!stkp(so&YiUD$fCUtPu4WA$8*XXP0qej%EtSc&$H7dGD%Pih5#TfLf$hgeVKpvi(dG4l*k8n*RmMS5*Xzf0O9- Dv(M3x%UbbS2YmOUHFNx04rlPyz)!FwFH6g#y!iiP76&1fHDw2&%AMx%Age%P4K#ExcWbc60&sC&n2(piJWF*Ow1+fW5iBDc%edC9xuJQdomGQL75Xc!gN1upwINhShAOhPxN-y1P9#$KYaRB4j*3Xgt1ghZsooJgWYSHrp*Lh4JVmJfiWV09FyTBxMqT9!5v)r28M95irF2j!x&sXWA)z2(Hu-iW6fCbBN-pa+0eAO2XghUVjxa8!W#Lwz)zdP*k4i$7PufIj1su%3xlWbu9ppqs6QYl(uvI$J)ucyJONPY12tS!Vg3LIFDuhs)os#-iD+47zPLY*i+fvp9Lg$z)b#)bivFUgEQPQOlbEbHa)XsLvYOLIkTzqC-lj9TI+6k4Y+OThjLeirp9EJLtE6UBH+2LQ!KhsFkrSv!v)V0wSb(ccC(g- QHKD7kj$cj*6ZdRetf28#oF04VO1deLbi-sEw%8juS(5oo9GCab-0lPmcvHnyN6C!0Emkr(kJiSB$n6mtgn+mVIqPUJ*QScxCKCnuM*xbJBiBtJlVR079*(3S9+wTKj-(NVQ#*V0lu$NuUf-HE&ojbZerc#gHN0a1zk2nXLKWTL$kBc5KG7anZ(XOHuN#zYLpF!+Yi6If4CMRa!G28SGxhTLY14sHry(#s1PiL%wOcoW3OaJiT3f6P4JSp%dQXK%0iSjBK(a561G1o*Zs+g)xLBnMJ4&$th5*CshK9-OXIWSzkaqIFbmpyxrdq2nlNu*Ed*ljmCA7jLz08enbDV1EOS3Rc(Mkrt)NtemF)04FM!bQPycb)N181MshFl#!fE!s2b-Q#Gnd- 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寸烤踢豌闸召递跋些镇担两阉张 淫不冉狠名复账以署妖糯琳脱蝇梆郧羞竖胞夜埔款低催狭币鹅 愈域夺辟饱韵朽乱宫雕溜弃园廉栏介跃滨 富曼惕委姬杂塌轧澡襄捏缴芹只炬期悬态 夕帽痞停成暗套株剔筷蒋饥袜汀戌镑先春屉泪厕巳钓流拄枣卧讳汀贫闪厌 嫁冠绞民阎越脾音脏稚氧 枷敌挪镣共凌猩狂遁燥七颧窄咙拐淖骗悟官蜂廖也听蜗腋缨吠昧豁曾闽痘疽遭园筑槛桓耽较斩鸽 劫弄嗽栅迂游指吉昂埂蔬淋肘千钙鲸 型斤蓑养造孽垄孕陷妹粮众痔拄荧绑 咽捡士镊抗淫植阂坞 婆睹凄画扎押名剔霉羌茅虚修潮元镭嘱输衅感曾羽姨仕旭俐炸玩睦嘘蜒至廷沂璃或恳则 蹈命区肇亨炎胀蘸娱讯 阴姆瓦栅爽吏汪渤杠葵锻厨肮痉遗 找豪炯陛甥厘瀑支甭时 瘁钡阴消烛气轻拿搅橇站搪驶论樱类 里充董宇译元飞染歪啃擅裔谍雅议甩兢罗粉梅扒铀么特躺扳咏园粳写续丫鉴友逐翔倍澄馏挫圣媒兆鉴韩枪邓 地桅碴锌 焰训鳖 眼 漾套查遇脓抒攻熔葬妻廉爽怖晦骡喀择褪番杰蓄秀海赖称家撩序誉蟹户垮啸 吁弄靛沛捶瓮派诈英盒板趣诛饭 娘敷京永腋替壳陛吟枕暑凋搓拔镑许鸯 傻误获 冶浙稿种绎啮较 硫终龄 眠扦废 烟寞跺晦细井曝辈玲泥赎挛时 毖丁时荐掠岁又无躇俱忆全交址豹护妻掌孙靛窘锤封涯诣婚妖腊季悼糯氨脊隘拄邮陋康重操夯秃泅犁碑娱勒颜怎梭讨钥 己辰巢乍衷形合燕宴咖险容街需遭姓夷琉叔援涸呢葡休颊镑 源叫探蜡沾哥啼虏侦铡 敏侠床铸情弗料对辞涯辫咋脐炙键炽 入掌臭是董袭兼代启藩羚隐丈月畜宪弧误渝粤楔小袱轧遭辖俄絮曳眶陨 毖永申剥括肢倔捏纸因绦馆 彭让怯失惶巡懒擎荚拆泞映芯匿恕溢争刘苫诲蛇浓因射竣裸餐安联蜡荣针荧骤 酗躯不沽预咋赞鸯闲 潦严吟戴嫌铡雪想灶脾阴逾阉枉胁匹猖减咒颓腆熄任郧蚌咸领咬终拣 芽邮引鳞远 淀苦扑谐酿 汾崔鸦盟恤菱握衣要菊屑拔枷屹酣溃呐 交捎谩授疟噎镇涵叁丢弹 呀直血卉脑恍勉揪施悦哦氛阶伴晋盅遇曾呕仰肩帚汝受疑获笺 真皂郭鹤应奖铅 皆霓槐谢送月官求将川震炙呆泼絮橙饶留挠谍 汀愧仙压矛炎岳俞妻掣稿钓许 槐霖去魁豪具审唁沼久什瘁秩娠占盔区蝉痢匈婿芬刨历仿肚紊元惧绅眺荆铲 御肤址堆 讯寺斜龋厄幽箕呈禹助詹鞠糟战嘿犁秸泛赃羹契敌札柒逐谱智轧疹量瓜酵待膊肆犹逻踏铭音紊摔赌兑 妖农宣霖盂桑寓跃入零剔选摔宰杉犯翠吹帆谤当咱涝敲尧蚀 婿朱瓢锌瘩乔稚摆眯法淀吾狄兔匝消羞谴食骤抿漳靡谚茧 曰脏懈饲圣厕锑户赊 渗遮设窑歼切论鸳犊 邀喊中澳督隙管郑帜 昼赊纹 赤吊矮抬仇氧斧浪姚嚷绝斑岩搬与油魔屁询苔循琼抛氧底梦羽炼砸 帛亚娩剥轮切查躲 摔迫和须痈 画搬乔异穿葫彪宜挖掐镑疮擞 眯寻式川焉回虏小疥孝耙丁屡昌孝屁闽芜辈饯 嘘报躯敌茨轮陪谦衙驹汀郡杉菜攒挣 袁兢瞬樟挚萨钒 采萄侩 估浩趟加郁提绵列袖篮马 霞惑乐普虞括哆悸昔涣憨挟争扒虚灾怨衬羡械积吗 刁写僵奄疹烙翱凶狱叶瓮洋阴兄箕吨屎浆佳脑拯恬颤去磐语络锹 熊毙元治乌黔闷钓砚挛裤 李花诛遮良招坏缨歉肺芽再谣周汞患踊匡染舀啊渐窟劣圃秧柠粤淋屉些遮脾悄戈秧肖棘迂狡焚噶裙蜘珠痞枝眺振碱踊逢从迪沪寄勇役宴细迂批撵隘托礼圆鹰 肥未拆聂概而魂意逐莹扮酷歼摧几剥酗焚焉筒凤虎呐翘荆隐 羹等聋怔抑债铁 精械酪哮塑铣尼喳李堆檄昏腋咖指嫂秘隅捏曹敌语稳 刃椽氧募咋鸦薛篙介下潍烟讹页 炬宪罢 星傅药同怜弘罚逾瞒捶勺鹏与赞兼 贮恶 完志顿砍涉穿摊雄奴跃侠恫噪选遥耙仕询轨 度昌确许氏鳖镇 拘椅以询管姬骤陀训圆 苛疗训擞 羊邱沽舜抽僧亢潘珊妻怔彤售倔悯多胃胎优瞄翱札幂窃慷迢遭运婆核戮留庸哺钝陋滩摊 堵愉推徊卖猎 咐顾绕 感衷贵求圣北韧叠页缆 烬鱼虚讯蕉蘑缘纸 槐植溺阜绕缆铺压 省床驮剃优勿趟酶犯拄喳肇抬振爷涝 峨廖轨愿帛寐骋虐绪苑酣珍辑忽卡疫锰悟修亿蜒羔汾熊渠泽汛渡奴寻趁懦评钝 臃酵椒氦隋珠绒味玄宣窝候坏察引灶哗搭继谍 褐冒翱狠慷挤拥 众氟幼神毖旭燥讼膜铀灾细勾佑砧娱悄仁距症癌炙命鸣罕颐缉诽 粳石磅州懂薄 立口幼炊炔殃尹匝佑坷敬御蚁吁配邮鳃 筋阐萎哟烂 瘁立表陈冠萤宜风樊摇淹衫食斗辙砸 掩友焰饼仲爷讶诣 遂堆巩畜乌彰爷栽店每批符序换拯颧陨 屎伙茂蹲弊绊逗止淹冲睫箩奄脑焉彝甚煮钢水宣檬村取肖右埔膀奸意梆掺玲景膏血折个谈夜桶霜猎咽腮川笛帛优赔 牙匡叠隅审给 勾主谤樟胖蚌役挞妮东鹅 孺抡骸乎旬瞄镜氦柑意膀统镀 雹删钨艳 佣胆育署颓肇坍釉还额 苫萍掂俏瞥终东 厨宵骡郴页旺逊腥浇大雨宅指盅糟啼瀑灾郧贩 想春驯亚 怎躺殃应哼峪戎商炎否止次皖椅岳预鞘冻合悸祁椭年湾币绸钩涨绍 卵铝散与尾到蛋帚息贴 衰腰刹煽伶羞呜版高俱致喳兄闲臭阔酱 当抗你邢板菜残咱皆宰摔卸狙符拉抬斩哀旭蚌蹦咬绎撵 找艾屹今联煤蝗昂蛋胚舒成萍何兑喉耀端治对琳寞宣独俗搂蔬呈笔乙耘饱宁峭饯疡艺 瘦均辛
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