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彩超在小鼠原位肝癌移植模型中的应用研究 摘要：目的：研究应用彩超评价小鼠原位肝癌移植造模成功的可行性。方法：建立小鼠肝癌原位移植模型， 应用彩超方法观察(3、5、9、16d)不同造模时间小鼠肝癌原位移植造模情况，同时与解剖观察肿瘤比较；并取 其肿瘤作病理组织学检查。结果：彩超在模型建立中后期9d组肿瘤的检测结果与解剖观察情况相近，肿瘤检出率 可达90。结论：彩超检测方法是一种无创诊断，可用于小鼠原位肝癌模型的实时评价，为建立小鼠原位移植肝癌 模型的判定提供科学依据.毕业论文 关键词：彩超；小鼠原位肝癌；模型 目前，肝癌治疗措施强调实行综合治疗，即通过 西医、中医及其他有效的手段和方法相结合的综合 治疗。中医药在防治肝癌发生，减少复发，减轻放、 化疗的毒副作用，提高生存质量，延长生存期等方面 有独特的优势，随着医药科技的发展，中医药治疗肝 癌的临床疗效不断提高，并且也从多方面展开药物 作用机理的研究。本文开展应用现代临床医疗的彩 超技术评价小鼠肝癌原位移植模型，试图为中医药 临床防治肝癌药物的药效实验研究提供研究手段及 其新的评价方法。本研究也是国家自然基金项目中 药复方靶向给药系统研究的一部分. 材料与方法 1实验材料小鼠h22肝癌瘤株：中国协和药 物所提供；清洁级icrb鼠，雄性，68周龄，体质量 18229：由吉林大学实验动物中心提供，动物合格证 号101023；bcn一1 360超净1=作台jouan公司；kx一41 倒置生物旺微镜，日本olympus生产；iu22彩超机， phllips公司. 2实验方法 21小鼠原位肝癌模型的建立及分组取腹腔 接种h22肝癌细胞株后7d的昆明种小鼠。无菌抽取h22 肝癌细胞株腹水，生理盐水洗涤，离一31 000 rrain，5min 弃上清，台盼蓝染色计数，生理盐水调整癌细胞数至 1108ml备用。健康昆明种小鼠，戊巴比妥钠腹腔注 射麻醉，小鼠仰卧固定，备皮，常规消毒铺巾，于上腹正 中剑突下作一约icm的切口。轻压双侧肋弓以挤出部分肝叶，湿纱布垫于肝叶下方以保护然后用025ml医 用注射器针头沿肝叶长轴方向插人缓慢注入h22肝 癌细胞悬液003ml(细胞数为3106)。在拔出针头的 同时，迅速用棉签轻压lmin止血，然后在针眼周嗣用 酒精棉球轻搽。小心地将肝脏网纳入腹腔，缝合切口， 术毕【li。术后正常饮水、进食。术后将造模动物随机4 组，即模型3d组，模型5d组，模型9d组，模型16d组， 另设正常对照组。正常组动物同样手术方法给予生 理盐水造模. 22彩超对小鼠肝癌造模的检测实验动物分4 次进行b超检测，每次取5只正常组进行对照，分别于 造模第3、5、9、16h将正常对照组和模型组小鼠腹部 剪毛处理，用彩超仪对小鼠肝脏进行扫描，选择最 适宜条件。彩超检测条件：深度：20，增益指数74， 探头频率7512mhz。随后，脱椎处死小鼠，开腹用 游标卡尺测量肿瘤大小，并与彩超结果进行对照. 23病理形态学观察剥离肝脏及其肿瘤，10 甲醛固定，常规石蜡包埋，切片，he染色，在光学显 微镜下进行组织学检查. 结果 1彩超检测与解剖肉眼观察结果正常组小鼠 肝脏彩超检测结果表明：超声显示弱回声，无结节； 正常小鼠解剖肝脏表明：肝脏无结节。模型组小鼠肝 脏超声与解剖检测结果表明：小鼠原位移植肝癌存 在高回声、等回声、低回声3种类型，其中以高回声多 见并较易发现和测量。当肿瘤生长3d时，有50b鼠 生长出平均02cm014cm大小的结节，此ft,寸b超显 示10只小鼠均无结节；当造模第5天时，有loojx鼠 长出平均o57cmx043em大小不等的结节或肿块，并 有1只呈弥漫性生长，彩超仅检查出一只实际大小在 029emx029em的肿瘤，检出率占总数的10；当造 模第9天时，有1001”鼠长出平均089cmx043era， 彩超的检出率可达90；至第16天时，有100d、鼠长 出089emx066em的肿瘤并且小鼠多伴有腹水，此时 彩超的检出率仍为90。结果见表l、图l. 表1 彩超与解剖观察不问时间小鼠原位移植肝癌情况=10) 彩超检查解剖观察造模天数丽面天万可忑夏二了蕊丽看夭不ii忑i再再薄 2病理学检测结果正常组小鼠肝d,nf清晰， 肝细胞索、肝窦排列整齐，汇管区结构清楚；肝癌模 型组肿瘤细胞生长旺盛，较为弥散，细胞核体积较 大，深染，多呈圆形或椭圆形，胞浆丰富略嗜碱性， 有的胞浆呈空泡状，可见病理性核分裂与瘤巨细胞， 见图1. 讨论 目前，建立小鼠肝癌动物模型方法主要有皮下 移植和肝癌的原位移植，而肝癌的原位移植能够更 好地模仿人肝癌体内的血供和生长环境，提供与肝 癌病人相似的肝癌生物学特性，更好地反映抗癌药 物的药效学指标。但此种方法要求接种手法准确， 对操作环境要求必须无菌，尤其此种模型建立是否 成功常采用动物处死后评价。这是大多数研究者谨 慎采用此方法的原因之•。目前，采用小鼠原位肝癌 移植模型进行抗肿瘤药物研究，缺少行之有效的模 型建立评价方法. 彩超是根据形态学的改变为临床诊断疾病提供证据的，它不像病理那样作出准确的诊断，但一些疾 病在超声显像中有特殊表现，并且具有活体、实时、 动态的优点。肝癌的声像图有其规律性，根据这些变 化的规律，目前临床上彩超检查是常用的诊断方法。上常用的彩超机对于实验有使用方便，容易获 得的优点，因此，本实验用临床用彩超机对小鼠原位 移植肝肿瘤模型建立进行评价，探讨用其评价小鼠 原位肝肿瘤的可行性. 实验结果表明：彩超在对小鼠原位肝癌移植模型 建立的初期(0-5天)评价效果并不理想，检出率仅为 10，但在肿瘤生长成熟期(大于057era x 043era)对 肿瘤的检出率有了明显的提高，检出率可达到90. 临床用彩超机在小鼠原位肝癌移植模型的建立过程 中适用于肿瘤成熟期的评价.临床用彩超机探头的常用频率范围为l一15 mhz，最高频率为40 mhz，而用于小动物实验检测的 高频率超声系统探头频率为125825mhz，平均中 心频率为40 mhz，本实验发现临床用彩超机探头频 率较低，因此如能够采用高频率的探头将会提高实 验的检出率和准确度. 对小鼠原位肝癌移植模型的评价采用彩超手段 是一种无创诊断和监澳flb鼠肝癌原位肿瘤的可行检 测方法，可为中医临床防治肝癌药物实验用小鼠肝 癌原位肿瘤模型建立的判断提供科学依据。此检测 方法也可用于其它实验动物肝癌模型建立的评价. 参考文献 【l】李志字，薛华，何生，等葡萄球菌肠毒素a脂质体对小鼠原位移 植m2肝癌的治疗作用中华肝胆外科杂志嬲，10(10阳b，_6 li zhi•yu，xue hua，he sheng，et a1antitumor ef