高中生物 检测生物组织中的糖类、脂肪和蛋白质.ppt

第一章 细胞的分子组成 第三节 有机化合物及生物大分子 实验1：检测生物组织中的糖类、脂肪和蛋白质 实验：检测生物组织中的糖类、脂肪和蛋白质 实验原理：某些化学试剂能够使生物组织中的有关 有机化合物产生特定的颜色反应。 化学试剂+有机化合物特定的颜色 还原糖 + 斐林试剂 砖红色沉淀 脂肪 + 苏丹（或苏丹）染液橘黄色（或红色 ） 蛋白质 + 双缩脲试剂紫色 淀粉 + 碘蓝色 水浴加热 一、可溶性还原糖的检测： （1）原理：还原糖 + 斐林试剂 砖红色沉淀 。 （2）选材：苹果、梨、白萝卜。含糖量较高，颜色为 白色或近于白色的植物组织。 （3）检测过程： 水浴加热 振荡混匀 5065水浴 加热2min 2mL 组织 样液 刚配制的斐 林试剂2mL 呈现浅蓝色 变成砖红色（Cu2O） 还原糖：含有半缩醛羟基的糖类，主要是葡萄糖、果糖和麦 芽糖。蔗糖、淀粉和纤维素属于非还原糖。 当质量浓度为0.1g/mL的氢氧化钠溶液与质量 浓度为0.05g/mL的硫酸铜溶液混合后，立即生成淡 蓝色的Cu（OH）2悬浊液。 Cu（OH）2与葡萄糖 、果糖、麦芽糖等可溶性还原糖共热，能够生成砖 红色的Cu2O沉淀。因此，利用该反应，可证明样液 中含可溶性还原糖。 RCHO+2Cu(OH)2RCOOH+Cu2O+2H2O 甲液乙液等量混合，现用现配，切不可分开滴 加，或者久置后才用。 制备组织样液 梨或苹果研磨 取5g，放入研钵中 洗净、去皮、切块 过滤滤液 （用单层纱布 ） 显色反应 向试管中加入 2ml组织样液 向试管中加入2ml 新配制的斐林试剂 或本尼迪特试剂 振荡混匀5065水 浴加热2min 观察现象 观察溶液颜色变化：浅蓝色棕色砖红色 结论：生成砖红色沉淀，说明梨或苹果中含有还原糖。 砖红色的糖（还原糖）非（斐林试剂）常好吃 2 ml组织样液1 ml新配制的斐林试剂 5065水浴加热 约2min 观察颜色变化 砖红色浅蓝色棕 色 【斐林试剂】：甲液：0.1g/mL的NaOH溶液，乙液：0.05 g/mL的CuSO4溶液，使用前等体积混合均匀（生成浅蓝色 的Cu（OH）2悬浊液），现配现用（时间一长，Cu（OH） 2 沉淀在溶液底部无法发生反应。且需要水浴加热。 还原糖的检测结果 斐林试剂与可溶性还原糖在水浴热的条件下，生成砖红色的 Cu2O沉淀。 -CHO+Cu(OH)2悬浊液 -COOH+Cu2O（砖红色） 二、脂肪的检测 （1）选材：经浸泡去种皮的花生种子。 （2）检测过程 ： 制片 选取最薄的切片置于洁净的载玻片中央 制成临时装片：滴12滴蒸馏水，盖上盖玻片 染色：在薄片上滴加23滴苏丹染液，染色23min 洗去浮色：用吸水纸吸去染液，滴加体积分数为50%的酒精12滴 镜检观察：在低倍镜下寻找到已着色的 圆形小颗粒，然后用高倍镜观察。 苏三（苏丹）送了我一个橘黄色的胭脂（脂肪 ） 切片：花生种子（浸泡h），去皮，将子叶削成薄片。 视野中 有橘黄 色颗粒 橘黄色小圆颗粒 即为脂肪颗粒 脂肪 + 苏丹（或苏丹）染液 橘黄色（或红色） 注意事项： （1）若用花生种子作实验材料，必须提前浸泡34小时，浸 泡时间短了，不容易切片，浸泡时间过长，则组织太软，切下 的薄片不易成形，切片要尽可能的薄。 （2）染色后一定要用50%的酒精溶液洗去浮色（酒精能溶解 苏丹），染色和洗浮色时间不宜过长。 三、蛋白质的检测： （1）原理：蛋白质 + 双缩脲试剂 紫色络合物 （2）选材：黄豆、鸡蛋清（稀释）、牛奶、豆浆 （3）检测过程： 2 ml组织样液 2 ml双缩脲试剂A液，摇匀 3-4滴双缩脲试剂B液，摇匀 观察颜色变化 紫色 双（双缩脲）子（紫色）弹（蛋白质 ） 将尿素加热，两分子尿素放出一分子氨而缩合成双缩脲 。反应式为: 双缩脲（H2NOC-NH-CONH2）在碱性环境（NaOH）中 能和Cu2+作用生成紫色的络化物，这个反应叫做双缩脲反应。 蛋白质分子中含有的肽键结构与双缩脲结构相似，因此，蛋白 质也可与双缩脲试剂发生颜色反应。 双缩脲双缩脲试剂 无色 紫色 （创造碱性条件） （提供Cu2+） 双缩脲试 剂B 3-4滴 双缩脲试 剂A 2mL 2mL 组织 样液 在碱性条件（NaOH）下，蛋白质中的肽键（NHCONHCO） 与Cu2作用生生紫色络合物。因此，操作时，应先加A再加B ，且A多B少，如果B过量， Cu2的蓝色就会遮盖生成的紫色 。 制备组织样液黄豆组织样液（或鸡蛋清稀释液） 黄豆 浸泡 研磨过滤滤液 去皮、切片 蛋清液鸡蛋鸡蛋清稀释液 稀释 显色反应 向试管中注入 2ml组织样液 向试管中注入 2ml双缩脲试剂A 加入3-4滴双缩 脲试剂B 观察现象 观察颜色变化：无紫色 结论：加入双缩脲试剂A后，颜色呈现为无色，加入B后，变为 紫色，说明鸡蛋清中有蛋白质存在。 蛋白质的检测结果 注意事项： （1）如果用鸡蛋清作为材料，则必须进行充分稀释，否则反应 后的产物会粘固在试管内壁上，使反应不彻底，且试管不易洗 刷干净。 （2）【双缩脲试剂】：A液：0.1g/mL NaOH，B液：0.01g/mL CuSO4。先加A液后加B液，且B不能过量，不需要加热。 （3）过量的双缩脲试剂B会与试剂A反应，使溶液呈蓝色，而掩 盖生成的紫色。 （4）先加入A液2ml，摇匀；再加入B液3-4滴，摇匀。 四、淀粉的检测： （2）选材：马铃薯匀浆 （1）原理：淀粉 + 碘 蓝色 （3）检测过程： 2 ml组织样液 2滴碘液 观察颜色变化 蓝色 蓝（蓝色）点（淀粉）点（碘） 制备组织样液 马铃薯块茎 研磨 取5g，放入研钵中 洗净、去皮、切块 过滤滤液 显色反应 向试管中注入2ml组织样液加入5滴碘-碘化钾 观察现象 观察溶液颜色变化：无色蓝色 结论：溶液变蓝，说明马铃薯组织中有淀粉存在。 鉴鉴定物质质生物材料所用试剂试剂颜颜色变变化 还还原糖 脂肪 蛋白质质 淀粉 苹果、梨、白萝卜 斐林试剂 砖红色沉淀 花生种子 苏丹染液 苏丹染液 橘黄色 红色 豆浆、牛奶、鸡蛋清双缩脲试剂紫色 面粉、马铃薯匀浆液 碘液蓝色 注：鉴定还原糖需加热；脂肪的鉴定不一定要用显微 镜，要观察脂肪颗粒，则必须用显微镜。 五、观察DNA、RNA在细胞中的分布 实验原理： （1）DNA主要分布在细胞核内，RNA大部分存在于细胞质中 。 （2）甲基绿和吡罗红两种染色剂对DNA和RNA的亲和力不同 ，甲基绿使DNA呈现绿色，吡罗红使RNA呈现红色。 （3）利用甲基绿、吡罗红混合染色剂将细胞染色，可以显示 DNA和RNA在细胞中的分布。 （4） 盐酸能够改变细胞膜的通透性，加速染色剂进入细胞， 同时使染色体中的DNA和蛋白质分离，有利于DNA和染色剂结 合。 甲基绿使DNA呈现绿色，吡罗红使RNA呈现红色，通过观 察两种颜色出现的部位来判断DNA和RNA在细胞中的分布 。 方法步骤 ： （1）取材和制片 在洁净的载玻片上滴1滴0.9%NaCl溶液 用消毒牙签刮口腔内侧壁后涂抹在液滴上 将涂有口腔上皮细胞的载玻片在酒精灯上烘干 （2）水解：将烘干的载玻片放入盛有30 mL 8%盐酸的小烧杯中，30 水浴保温5 min （3）冲洗涂片：用蒸馏水的缓水流冲洗载玻片10秒 （4）染色 吸水纸吸去载玻片上的水分 在载玻片上滴加两滴2滴用吡罗红，甲基绿染色剂，染 色5分钟 吸去多余的染色剂，盖上盖玻片 （5）观察：先低倍镜：选染色均匀，色泽浅的区域，移到视野中央 。后 高倍镜：观察细胞核和细胞质的染色情况。 0.9%生理盐水？ 人口腔上皮细胞 8%盐酸？ 蒸馏水 30水浴 吡罗红甲基绿染色剂 取材 水解 冲洗 染色 观察 思考与讨论： （1）9%Nacl溶液的作用？ 保持空腔上皮细胞的正常形态。 （2） 8%盐酸的作用？ 杀死细胞，改变细胞膜的通透性，加速染色剂进入细胞； 使染色体中的DNA与蛋白质分离，有利于DNA与染色剂结合。 （3）吡罗红甲基绿染色剂要现用现配。该实验不宜选用绿色植 物叶肉细胞（有颜色）和其他有颜色的细胞（如鸡血细胞）作 为实验材料，因其会干扰颜色观察。 双缩脲反应：含有两个或两个以上肽键的化合物与碱性硫酸 铜作用，生成蓝紫色的复合物 斐林试剂与双缩脲试剂的比较 斐林试剂试剂双缩脲试剂缩脲试剂 甲液乙液A液B液 成分 0.1 g/mL NaOH溶液 0.05 g/mL CuSO4溶液 0.1 g/mL NaOH溶液 0.01 g/mL CuSO4溶液 鉴鉴定 物质质 可溶性还还原糖蛋白质质或多肽肽 添加 顺顺序 甲乙两液等量混匀后立即 使用（现现配现现用） 先加入A液1 mL，摇摇匀， 再加入B液4滴（不能过过量 ），摇摇匀 反应应 条件 5065 水浴加热热不需加热热，摇摇匀即可 反应应 现现象 样样液变砖红变砖红 色沉淀样样液变变紫色 斐林试剂用的是甲液和乙液，须现配现用，混合均匀，水 浴加热。双缩脲试剂用的是A液和B液，先加A液，后滴B 液，不用水浴加热。 比较项较项 目斐林试剂试剂双缩脲试剂缩脲试剂 不 同 点 使用方法 甲液和乙液混合均匀后方可 使用，且现现配现现用 使用时时先加A液再加B液 反应应条件需50-65水浴加热热不需加热热即可反应应 反应应原理 还还原糖中的醛醛基被Cu（OH ）2 悬浊悬浊 液氧化,Cu（OH）2 被还还原为为砖红砖红 色Cu2O沉淀 具有两个以上肽键肽键 的化合物 在碱性条件下与Cu2+反应应生 成紫色络络合物 颜颜色砖红砖红 色紫色 浓浓度 乙液CuSO4浓浓度为为0.05 g/mL B液CuSO4浓浓度为为0.01g/mL 相同点 都含有NaOH、CuSO4两种成分，且所用NaOH浓浓度都是 0.1g/mL 斐林试剂与双缩脲试剂都由NaOH和CuSO4组成，但二者有如 下三点不同：