血液病基因检测的临床意义 ppt课件.ppt

髓细胞系恶性肿瘤 根据细胞形态学、免疫学、细胞遗传学、分子 生物学以及临床特征WHO分型法将髓系肿瘤分为 骨髓增生性疾病（MPD）（肿瘤，MPN） 骨髓增生异常/骨髓增生性疾病 （肿瘤） （MDS/MPD, MDS/MPN） 骨髓增生异常综合征（MDS） 急性髓细胞白血病（AML） 四 大 类 1 PH染色体t(9;22)(q34;q11),BCR/ABL阳性 的慢性髓系白血病（CML） 慢性中性粒细胞白血病（CNL） 慢性嗜酸粒细胞白血病/高嗜酸粒细胞综征 （CEL/HES） 真性红细胞增多症（PV） 慢性原发性骨髓纤维化（伴髓外造血） （CIMF） 原发性血小板增多症（ET） 不能分类骨髓增生性疾病 七 类 骨髓增生性肿瘤（MPN） 2 骨髓增生异常/骨髓增生性肿瘤 （MDS/MPN） 是一种克隆性造血干细胞疾病，特点表现为MDS 与MPD交叠，有多种“有效”造血及病态造血存在 。 慢性粒-单核细胞白血病（CMML） 不典型慢性髓系白血病（aCML） 幼年型粒-单核细胞白血病（JMML） 不能分类的MDS/MPD 四 类 3 骨髓增生异常综合征（MDS） MDS也是克隆性疾病，以无效造 血为其特征引起血细胞减少，骨髓 及血象一至多系细胞病态造血。 4 MDS亚型分类 亚型 外周血象 骨髓象 1.难治性贫血 贫血；未见或罕见 仅红系增生异常， （ RA） 原始细胞 原始细胞 5%， 环形铁粒幼细胞15% 2. 难治性贫血伴 贫血；未见或罕见 仅红系增生异常， 环形铁粒幼细胞 原始细胞 原始细胞 5%， （） 环形铁粒幼细胞15% 3.难治性血细胞减少 血细胞减少（二系或 二系或多系细胞增生异常 伴多系增生异常 全系）；未见Auer小体； 10%；原始细胞 5%， （RCMD） 未见或罕见 原始细胞 ； 未见Auer小体； 单核细胞1109/L 环形铁粒幼细胞15% 4.难治性血细胞减少 血细胞减少（二系或 二系或多系细胞增生异常 伴多系增生异常和 全系）；未见Auer小体； 10%；原始细胞 5%，环 形铁粒幼细胞 单核细胞1109/L 未见Auer小体； （RCMD-RS） 环形铁粒幼细胞15% 5 亚型 外周血象 骨髓象 5.难治性贫血伴 血细胞减少， 一系或多系细胞增生异常； 原始细胞增多1型 原始细胞5% 原始细胞5%9%； （RAEB-1） 未见Auer小体； 未见Auer小体； 单核细胞1109/L 6.难治性贫血伴 血细胞减少， 一系或多系细胞增生异常； 原始细胞增多2型 原始细胞5%19% 原始细胞10%19%； （RAEB-2） Auer小体（）； Auer小体（）； 单核细胞1109/L 7.未归类的MDS 血细胞减少， 单一髓系细胞增生异常； （MDS-U） 未见或罕见原始细胞； 原始细胞5% ； 未见Auer小体； 未见Auer小体； 8.5q-综合征 贫血； 少叶核巨核细胞正常或增多； del（5q） 血小板计数正常或增高； 原始细胞5% ； 原始细胞5%； 细胞遗传学检测仅见 del（5q）异常； 未见Auer小体； 6 AML是髓系原始细胞克隆性增生疾 病，WHO分型将AML分为： 1. 伴有特殊染色体的AML 2.伴有病态造血的AML 3.治疗相关的AML和MDS 4.不伴特殊细胞遗传易位的AML 四亚型。 急性髓细胞白血病（AML） 7 1伴有特殊细胞遗传易位的AML （1）伴有t(8;21)(q22;q22)AML, AML1（CBF）/ETO的AML （2）伴有inv(16)(p13;q22)或 t(16;16)(p13;q22), CBF/MYH11的骨髓嗜酸粒细胞增多的AML （3）伴有t(15;17)(q22;q11-12),PML/RAR 及变异的急性早幼粒细胞白血病（APL） （4）伴有11q23(MLL)异常增生的AML 8 2伴有多系血细胞增生异常的 急性髓细胞白血病 （1）由MDS或MDS/MPD转化而成 （2）发病前无MDS病史 9 3治疗相关的AML和MDS （1）与烷化剂相关 （2）与拓扑异构酶抑制剂相关 （一些可以是淋巴系） （3）其他 10 4不伴特殊细胞遗传易位的AML （1）未分化AML （2）未成熟AML （3）成熟AML （4）急性粒-单核细胞白血病 （5）急性单核细胞白血病 （6）急性红白血病 （7）急性巨核细胞白血病 （8）急性嗜碱细胞白血病 （9）伴骨髓纤维化的急性全髓增生 （10）髓细胞肉瘤 11 12 淋系肿瘤： B系肿瘤和T/NK细胞系肿瘤 又可分为两大类型： 前体淋巴细胞肿瘤（淋系白血病） 外周或成熟淋巴细胞肿瘤（淋巴瘤） 前者指淋巴细胞分化的早期阶段起源的肿瘤 后者是分化成熟阶段来源的肿瘤 13 B细胞系肿瘤 前体B细胞肿瘤 前体B淋巴母细胞白血病/淋巴瘤（B-ALL/LBL） 成熟（周围）B细胞肿瘤 B-慢性淋巴细胞性白血病/小淋巴细胞淋巴瘤（B-CLL/SLL） B-细胞幼淋巴性细胞白血病（B-PLL） 淋巴浆细胞淋巴瘤（LPL） Burkitt淋巴瘤（BL） 多毛细胞白血病（HCL） 浆细胞骨髓瘤/浆细胞瘤（PCM/PCL） 脾边缘区B细胞淋巴瘤，绒毛状淋巴细胞（SMZL） 结外边缘区B细胞淋巴瘤，MALT型（MALT-MZL） 结型边缘区B细胞淋巴瘤，单核细胞样B细胞（MZL） 滤泡性淋巴瘤（FL） 套细胞淋巴瘤（MCL） 弥漫性大B细胞淋巴瘤（DLBCL） 14 T细胞和NK细胞系肿瘤 前体T细胞肿瘤 前体T淋巴母细胞淋巴瘤/白血病（T-LBL/ALL） 成熟（周围）T细胞肿瘤 T-细胞幼淋巴细胞白血病（T-PLL） T-大颗粒淋巴细胞白血病（T-LGL） 侵袭性NK细胞白血病（ANKCL） 成人T细胞淋巴瘤/白血病（ATCL/L） 结外NK/T细胞淋巴瘤，鼻型（NK/TCL） 肠病型T细胞/淋巴瘤（ITCL） 肝脾T细胞淋巴瘤 皮下脂膜炎样T细胞淋巴瘤 蕈样真菌病/Sezary综合征（MF/SS） 间变性大细胞淋巴瘤（ALCL） 15 霍奇金淋巴瘤（霍奇金病） 结节性淋巴细胞为主型霍奇金淋巴瘤（NLPHL） 经典型霍奇金淋巴瘤 结节硬化型霍奇金淋巴瘤，1和2级（NSHL） 富于淋巴细胞经典霍奇金淋巴瘤 混合细胞型霍奇金淋巴瘤（MCHL） 淋巴细胞消减型霍奇金淋巴瘤（LDHL） 16 白 血 病 基 因 检 测 17 基因突变是指由于DNA分子中发生碱基对的 _而引起的_的改变。 增添 替换 缺失 （D） （d1） （d2） （d3） 增添、缺失或替换 基因结构 基因突变一定会导致生物性状的改变吗? 18 mRNA:G A A 甲 乙 丙 丁 DNA碱基对替换，不一定引起蛋白质结构的改变。 结论: 碱基对替换一定会导致蛋白质结构的改变吗? 氨基酸: 天冬氨酸天冬氨酸 谷氨酸缬氨酸 G A UG A CG U A 19 1 1、二战时，美国在日本的广岛、长崎投下两、二战时，美国在日本的广岛、长崎投下两 颗原子弹，导致白血病患者出生率增加。颗原子弹，导致白血病患者出生率增加。 2、苏丹红进入人体可产生致癌作用。 3、乙肝病毒使肝细胞进一步变异，肝细胞 不凋亡，而且不断地再生，就形成了肝癌。 内因：DNA复制时自身也偶尔发生错误 物理因素 化学因素 生物因素 基因突变原因： 20 基因突变的特点 大多数基因突变对生物体 是有害的，只有少数是有利的 ，有些既无害也无益。 多数有害 21 结果：增殖过度，分化阻断，凋亡受抑 22 白血病的分子检测 w Southern blot w Northern blot w Western blot w FISH w PCR w 测序 w 芯片 23 白血病的分子检测 w PCR方法优点 快速 灵敏 特异 w PCR方法缺点 假阳性 假阴性 ！ 24 白血病的分子检测 w PCR：仅适用于染色体断裂点丛集于相对小的 范围内（90% CML患者 wBCR-ABL融合蛋白（p210）的酪氨酸蛋白激酶活性较正 常ABL高，可能是BCR对ABL激酶活性调节区的作用所致 w 由于5%CML患者为隐匿性Ph染色体，因此无Ph染色体 CML患者还需使用更灵敏的分子检测手段如FISH或RT- PCR检测BCR-ABL融合基因 w RT-PCR还能区分e1-a2和b2-a2/b3-a2二种BCR-ABL转录 本，从而区分ALL患者与CML急淋变患者，进而分别对 两种不同患者采用不同的治疗方案 C M L 62 BCR-ABL w 巢式RT-PCR检测BCR-ABL融合基因用于 CML移植患者移植后MRD监测。可在患 者血液学复发前的624个月骨髓检测就呈 阳性。 w RQ-PCR还能动态观察患者治疗后BCR- ABL转录本水平变化情况，反映疗效。 63 GATA2基因突变 w 调控早期造血干细胞增殖分化的转录因子，维 持造血干祖细胞的增殖和自我更新能力 w CML急变患者中新发现GATA2基因突变， 而 CML慢性期、加速期，AML（M1-M7）， MDS，ALL，CLL，淋巴瘤和骨髓瘤患者，以 及正常对照均未发现该突变，可见GATA2基因 突变仅与CML急变相关，是CML疾病进展过程 中的获得性突变。总发生率为12.5%（5/40）， 且均造成CML急粒单变 w GATA2基因突变与CML患者疾病进展和预后的 关系有待进一步阐明 64 JAK2基因突变 w Janus kinase 2 w 此基因突变主要见于MPD和MDS，另可 存在于部分AML尤M2 w 突变为V617F w 突变去除了JAK2 JH2负性调控，导致该 基因的持续活化，赋予细胞增殖存活优势 w JAK2可成为靶向治疗的靶点 65 66 MDS相关基因异常 w Delta样(Dlk)基因编码Dlk蛋白在MDS明显 增高者55%，而AML仅10%，可能是 MDS特异性基因，但作为诊断MDS的标 志基因尚待进一步确定 67 MDS相关基因异常 w RAS w 此原癌基因超家族编码鸟苷三磷酸水解酶(GTPase) 调节细胞生长相关信号 w ras癌基因的活化，尤其是N-ras的激活可在约35% 的MDS患者中发生 w FMS w 为集落刺激因子1，控制单核-巨噬细胞生长、分化 及功能 w fms基因的突变可在16%的MDS患者中发现 w ras和fms突变主要见于粒-单细胞分化的疾病，即 MDS中的CMML，患者生存期短，转AML多 68 MDS相关基因异常 w p53 w 在MDS时，p53突变较少见(5%)，但在较为进展的 病例中可高达15% w p53突变意味着化疗耐药和生存期缩短，因而是一种 有意义的预后指标 w FLT3 w 10%MDS有FLT3点突变，加快进展为AML，但 FLT3-ITD少见 w AML1(RUNX1) w 为MDS较常见的点突变，发生率25%，导致核心结 合因子(CBF)亚单位正常功能缺失，易转化AML 69 Ig/TCR基因重排 w Ig的基因由L，L和H三个基因组组成， 分别编码L链，L链和H链。L和H基因 又由编码Ig分子的V区和C区基因构成。 w TCR由两条肽链组成，链或链，不论 是哪一种肽链，其胞膜外区均包括两部分 ，即V区和C区。相应的编码基因为 TCRA,TCRB, TCRG和TCRD。 70 Ig/TCR基因重排 w Ig/TCR基因重排检测，对决定白血病的细胞来源系列乃 至分化阶段，有重大意义 w 在B系ALL中分别有9