DNA重组技术的基本工具.ppt

1.1 DNA1.1 DNA重组技术的基本工具重组技术的基本工具 DNA重组技术的基本工具 准确切割DNA的工具（“分子手术刀”） DNA片段的连接工具（“分子缝合针”） 基因转移工具（“分子运输车”） 基因的大小以纳米计算，要对它进行剪切、 拼接等操作，没有非常精细的工具是不行的。进 行基因操作最少需要以下三种工具： 思考 在自然界中有一些生物的DNA可能进入另 一种生物的细胞中。我们有没有学过相关 的实例？ 现今存在的生物为什么没有在长期的进化 过程中被外源DNA的入侵而灭绝，仍能保 持一种稳定状态？ 怎样才能使外来的DNA失效从而保护自身 ？ 识别双链识别双链DNA DNA 分子的某种分子的某种特定的核苷酸特定的核苷酸 序列序列，并且使每一条链中，并且使每一条链中特定部位特定部位的两的两 个核苷酸之间的个核苷酸之间的磷酸二酯键磷酸二酯键断开。断开。 主要是从主要是从原核生物中分离纯化出来原核生物中分离纯化出来的一的一 种酶。能将外来的种酶。能将外来的DNADNA切断切断，由于这种，由于这种 切割作用是在切割作用是在DNADNA分子内部进行的，故分子内部进行的，故 名限制性核酸内切酶。名限制性核酸内切酶。 40004000种。种。 1 1、来源：、来源： 2 2、种类：、种类： 3 3、作用：、作用： 4 4、结果：、结果：形成两种末端形成两种末端 一、一、 “ “分子手术刀分子手术刀” ” 限制性核酸内切酶限制性核酸内切酶 黏性末端 平末端 限制酶切割DNA后形 成的末端黏性末端 、平末端是如何形成的 ？ 科目一考试网 / 科目一模 拟考试2016 金手指驾校网 / 金手指驾驶员考试 2016 重播 什么叫黏性末端？什么叫黏性末端？ 当限制酶当限制酶从识别序列的中心轴线两侧切从识别序列的中心轴线两侧切 开时，开时，被限制酶切开的被限制酶切开的DNADNA两条单链的切两条单链的切 口，带有几个口，带有几个伸出的核苷酸伸出的核苷酸，他们之间正，他们之间正 好好互补配对互补配对，这样的切口叫，这样的切口叫黏性末端黏性末端。 什么叫平末端？什么叫平末端？ 当限制酶当限制酶从识别序列的中心轴线处切从识别序列的中心轴线处切 开时，开时，切开的切开的DNADNA两条单链的切口，是平两条单链的切口，是平 整的，这样的切口叫整的，这样的切口叫平末端平末端。 基因的针线DNA连接酶 切断的DNA片段要与受体细胞的 DNA连接，你觉得可以用什么酶？ DNA聚合酶和DNA连接酶有何 相同点和不同点？ DNA连连接酶DNA聚合酶 连接DNA链双链单链 连接部位在两DNA片段之间 形成磷酸二酯键 将单个核苷酸 加到已存在的核 酸片段的3末端 的羟基上，形 成磷酸二酯键 限制酶切割后有两种不同的结果， 一种产生黏性末端，一种产生平末端 。那么恢复它们的连接时，所用DNA 连接酶是否可以不加选择？ E.coliDNA连接酶：连接黏性末端 T4DNA连接酶：连接黏性末端和平末端 基因进入受体细胞的载体 要让一个从甲生物细胞内取出来 的基因在乙生物体内进行表达，首 先得将这个基因送到乙生物的细胞 内去！能将外源基因送入细胞的工 具就是载体。 基因进入受体细胞的载体 假如目的基因导入受体细胞后不能复制 将怎样？ 作为载体没有切割位点将怎样？ 目的基因是否进入受体细胞，你如何察 觉？ 如果载体对受体细胞有害将怎样？ 作为载体的必要条件 能自我复制 有切割位点 能与目的基因结合 能进入受体生物细胞并在受体生物细胞内复制并 表达； 有遗传标记基因 对受体细胞无害 比较容易得到 3、基因的运输工具运载体 能复制并带着插 入的目的基因一 起复制 有切割位点有标记基因的存 在，将来可用含 青霉素的培养基 鉴别。 练习练习 在基因工程中，切割运载体和 含有目的基因的DNA片段，需 使用（ ） A. 同种限制酶 B. 两种限制酶 C. 同种连接酶 D. 两种连接酶 不属于质粒被选为基因运载体的理由是不属于质粒被选为基因运载体的理由是 A A、能复制、能复制 （ ） B B、有多个限制酶切点、有多个限制酶切点 C C、具有标记基因、具有标记基因 D D、它是环状、它是环状DNADNA D D 练习练习 3) 3) 基因工程是在基因工程是在DNADNA分子水平上进行设计施分子水平上进行设计施 工的。在基因操作的基本步骤中，不进行碱工的。在基因操作的基本步骤中，不进行碱 基互补配对的步骤是基互补配对的步骤是 （ ） A A、人工合成目的基因、人工合成目的基因 B B、目的基因与运载体结合、目的基因与运载体结合 C C、将目的基因导入受体细胞、将目的基因导入受体细胞 D D、目的基因的检测和表达、目的基因的检测和表达 C C 练习练习 大肠杆菌的一种