《组织培养概述》PPT课件.ppt

组织培养技术 Tissue Culture Techniques (In Vitro Culture) 概述 . 绪言/Introduction . 细胞生长的基本需要/ Basic requirement of cell growth . 细胞培养的配备/Equipment . 清洁、消毒与灭菌/Cleaning , Disinfection and Sterilization . 无菌操作/Aseptic technique . 培养细胞的形态/Morphology of culture cell I.绪言/ Introduction 1.概念/Concept 2.发展史/Developing history 3.应用/Application 1.概念 n体外培养/In vitro culture 将动植物活体内取出的组织、细胞或器官等，放置 在类似体内生存环境中，使其维持、生长或繁殖的方 法。 whole culture microorganism parasite organ culture parts culture tissue culture cell culture 器官培养/Organ culture n体外器官原基或整个器官或部分器官的维持或 生长，包括结构和功能上的维持和分化。 （The maintenance or growth of organ primordia or the whole or parts of an organ in vitro,in a way that may allow differentiation and preservation of the architecture and/or function.） Organ culture 组织培养/Tissue culture n体外组织的维持或生长，包括结构和功能上 的维持和分化。 （The maintenance or growth of tissue in vitro,in a way that may allow differentiation and preservation of the architecture and/or function.） n组织块（O.51立方毫米）或薄片（厚0.2 毫米） 细胞培养/Cell culture n是指单细胞在体外培养。 （This term is used to denote the growing of cell in vitro, including the culture of single cell. ） n通常体外培养中的单细胞不再形成组织。 n细胞培养也称为组织培养（tissue culture） ，二者可作为同义语使用。 细胞培养的类型/Types of cell culture （1）原代培养/Primary culture （2）传代培养/ Subculture （cell line） （1） Primary culture 直接来自活体的细胞（组织或器官）的初次培养 。 （A culture start from cells,tissues or organs taken directly from organisms.） n严格地说，是指成功传代之前的培养，此时的细胞 保持原有细胞的基本性质，如果是正常细胞，仍然 保留二倍体数。 n实际应用上，常把第一代至第十代以内的培养细胞 统称为原代细胞培养。 新生大鼠肺成纤维细胞（原代） 培养的天数：48h 放大倍速：倒置显微镜 X40 培养基种类：1640+10%小牛血清 细胞状态与特征简述:细胞呈梭形，有 伪足，边缘清晰整齐，贴壁生长 幼兔骨髓基质干细胞（原代）： 细胞种类：幼兔骨髓基质干细胞 培养的天数：五天后 放大倍数：倒置显微镜 X40培养基种类：DMEM+20%胎牛血清细胞 状态与特征简述:细胞呈梭形，有伪足，边缘清晰整齐，贴壁生长 传代/passage or subculture n将细胞从一个培养瓶转移到另外一个培养瓶的 过程。 当细胞增殖达到一定密度后，则需要分离出一部分 细胞和更新营养液，否则将影响细胞的继续生存 培养细胞的“一代”，不表示细胞分裂一次，而是 指培养细胞从接种到再次转移培养的过程。 原代培养细胞的生命归宿 n原代培养期 n传代期 n衰退期 （2）Subculture 细胞系/Cell line 原代培养成功后的细胞，传代再培养，称 细胞系。 n有限细胞系/Finited cell line n无限细胞系/ infinited cell line n有限细胞系/Finited cell line 细胞群体在体外生长有一定限度，即体外传代（ passage or subculture）到一定次数时，细胞 停止繁殖、衰退、死亡。 一般情况下可传代10-50次。 n无限细胞系/ infinited cell line 细胞群体能无限制生长下去，不进入衰退期。 肿瘤细胞系可无限增殖；正常细胞系可发生自发 转化，使细胞获得永久增殖的能力。 Infinited cell line: HelaHela n细胞株（cell strain） 用单细胞分离培养或通过筛选的方法，从 原代培养物或细胞系中获得具有特殊性质或 标志物的培养物称为细胞株 n体内培养/In vivo culture 是将活体的组织细胞、器官等取出，放置在 其它生物体内让其生长和发育的方法。 器官移植/transplantation 干细胞/stem cell 2.发展史 n19世纪末，20世纪初 温生理盐水培养鸡胚髓板组织存活数天提出组 织培养(tissue culture)概念 （ 1885 Roux ） 血浆凝块试管中培养成年兔肝、肾、甲状腺、卵巢 植块3天早期器官培养 （ 1897 Loeb ） 应用悬滴培养法，用动物血清培养狗的肉瘤细胞， 存活约72小时。 （1906 Beebe等） 短期存活，没有细胞的生长和增殖。 悬滴法培养蛙胚神经组织存活了几个星期, 且从培养的细胞中长出了轴突 完善了体外培养体系，体外培养技术的开始 （ 1907 Harrison ） 改良悬滴培养法培养鸡胚心肌细胞数年 将无菌操作技术（aseptic technique）引入 体外培养 发现动物体液中存在着对动物细胞生长有强烈 促进作用的生长因子 （ 1912 Carrel ） n1950s 培养技术快速发展 无菌操作技术/aseptic technique 培养容器/ culture flasks 抗生素/antibiotics 培养基/medium 培养方法/culture methodsmicrocarrier， hollow fiber culture 微栽体法 nWezel 在1967 年首创 n固体微珠直径约在50 微米到数百微米之间 n将细胞悬液和微载体混合孵育,待细胞贴附于微载体 上,再转移至培养液中培养 n借助温和搅拌系统使细胞随载体均匀悬浮于培养液 中， n细胞就能够在微载体表面迅速生长、增殖,细胞浓度 可高达107 个/ ml 。 n适于各种细胞的大规模培养 空心纤维法: n是Richard knazek 等在1972 年创建的 n空心纤维是一种由硅胶、聚砜、聚丙烯等材料构建 的可透性滤膜,外径约为1/ 33/ 4mm ,表面具 有海绵状多孔结构,既能使水分子、营养物质和气体 透过,也能使细胞在上面贴附生长。 n当细胞密度达到107 108个/ ml 时,逐渐用无 血清培养液代替含血清培养液。此时细胞不再增殖, 但能正常生活并继续分泌所需的蛋白质或其他生物 制品。 n在生产激素和单抗时被广泛应用。 3. 应用 n细胞生物学/cell biology 形态、发育、营养、代谢、病变等 n遗传学/genetics 染色体分析、细胞融合、杂交、转基因等 n病毒学/virology 病毒培养 n免疫学/immunology 细胞因子 n细胞毒试验/cytotoxic test 检测有毒物质并判断其强弱（对药品、化妆品、食品 添加剂、杀虫剂等进行筛选和安全评估） n生物制品/biologic product (biologics) 疫苗、干扰素、激素、酶、生长因子、单克隆抗体等 n干细胞培养/stem cell culture 细胞定向诱导分化、移植 n肿瘤细胞培养/tumour cell culture 肿瘤细胞生物学特性、肿瘤细胞发生发展、筛选抗癌 药物 应用体外培养技术的优点 1.细胞种类广泛（从低等动物到高等动物，从 胚胎到成体，从正常组织到肿瘤细胞）。 2.能长时间直接观察活细胞的形态结构、生命 活动及