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临床常用免疫学检查 华中科技大学同济医学院 同济医院诊断学教研室 钟 强 临床常用免疫学检查 l血清免疫球蛋白（immunglobulin，Ig）测定 l血清补体测定 l细胞免疫检测 l感染免疫检测 l自身免疫检查 l肝炎病毒标志物检测 l肿瘤标志物检测 血清免疫球蛋白分类 lIg通常是指具有抗体活性和（或）抗体样结构 的球蛋白。 l应用免疫电泳与超速离心分析可将Ig分5类： IgG、IgA、IgM、 IgD、 IgE。 lIgG：含量最多或最主要的Ig（75%），唯一 能够通过胎盘的Ig。主要由脾脏和淋巴结中的 浆细胞合成与分泌。 lIgA：约占10%，SIgA在局部免疫中起重要作 用。主要由肠系淋巴组织中的浆细胞产生。 血清免疫球蛋白 lIgM：分子量最大，由5个IgM单体通过J 链连接。是最早出现的Ig，是抗原刺激 后最早出现的抗体，其杀菌、溶菌、溶 血、促吞噬以及凝集作用比IgG高 5001000倍。 l测定方法：单向免疫扩散法（RID）或 免疫比浊法。 血清免疫球蛋白 测定参考值 l参考值： IgG：7.616.6g/L （RID法） IgA：7103350mg/L IgM ：0.482.12 g/L .l临床意义 免疫球蛋白增高 多克隆增高:常见于各种慢性感染、慢性肝 病、肝硬化、淋巴瘤和某些自身免疫性 疾病，如SLE、类风湿关节炎等。 单克隆增高:主要见于免疫增殖性疾病，如 多发性骨隋瘤、原发性巨球蛋白血症等 。 l免疫球蛋白降低：常见于各类先天性免疫缺陷 病、获得性免疫缺陷病、联合免疫缺陷病及长 期使用免疫抑制剂的病人。 l血清IgD测定 免疫扩散法：062mg/L 已发现有些抗核抗体、抗基底膜抗体、抗甲状 腺抗体和抗“O”抗体等均属IgD，但活性甚低 。 血清IgE：主要由鼻咽部、支气管、胃肠 道等粘膜固有层的浆细胞分泌，为亲细 胞抗体，能与肥大细胞、嗜碱性粒细胞 膜上的FceR结合，产生I型变态反应。 ELASA：0.10.9mg/L 临床意义： 1. I型变态反应 2. IgE型骨髓瘤、寄生虫感染等 3. 慢性肝炎、SLE、类风湿性关节炎等 。 l是一种单克隆B淋巴细胞异常增殖时产生的IgG分 子或片段，一般不具有抗体活性。 l参考值：蛋白电泳法，免疫电泳法：阴性 l意义：1.多发性骨髓瘤（MM），占35%65%，其 中IgG型占60%左右； IgA型占20%左右； 轻链型 占15%左右； IgD、 IgE型罕见。2.巨球蛋白血症 。3.重链病（HCDs）。4.半分子病。5.恶性淋巴瘤 。6.良性M蛋白血症。 血清M蛋白测定 （M protein，monoclonal immunoglobulins） 血清补体测定 l补体是具有酶活性的一种不耐热球蛋白，分3 组：9种补体成分（C1C9）；B、D、P、H、 I 因子；补体调节蛋白，如C1抑制物、C4结合 蛋白、促衰变因子等。 l总补体溶血活性（CH50）测定 l参考值 试管法：50000100000U/L 意义：增高 见于急性炎症、急性组织损伤、恶 性肿瘤及妊娠。降低 见于急性肾小球肾炎、 自身免疫性疾病、亚急性感染性心内膜炎、慢 性肝病、肝硬化、AIDS、严重烧伤等。 血清补体测定 l血清C3：主要由巨噬细胞和肝脏合成，在经典 激活途径与旁路激活途径中发挥重要作用。 参考值：免疫比浊法0.851.70g/L 增高 作为急性时相蛋白，在急性炎症、传染病 早期、急性组织损伤、恶性肿瘤、抑制物排斥 反应时增高。降低 补体合成能力降低；合成原 料不足；消耗或丢失太多；先天性补体缺乏。 血清补体测定 l血清C4测定：由肝脏、吞噬细胞合成， 参与补体的经典激活途径。 l参考值：单向免疫扩散法：0.197+/- 0.109/L。 l临床意义基本与C3相似，降低还见于多 发性骨髓瘤、IgA肾病、遗传性C4缺乏 症等。 血清补体测定 l补体C1q测定 l参考值：0.1790.04g/L l临床意义：与C3相似，降低还见于活动 性混合性结缔组织病、重度营养不良、 肾病综合征、重度联合免疫缺陷病等。 lB因子测定-C3激活剂前体 细胞免疫检查 l淋巴细胞表面标志物检测 l T淋巴细胞表面标志物检测：E玫瑰花 形成试验、免疫荧光法（IFA）、荧光激 活细胞分类法（FACS）、免疫金银法以 及免疫酶染色法等。 lE玫瑰花形成试验 SRBC+CD2 l参考值 Et 64.4%6.7% l免疫荧光法 T淋巴细胞表面标志物检测 l意义 可用于T淋巴细胞计数， T淋巴细胞亚 群的分类以及判断T淋巴细胞的活化程度。 lCD3 分子表达于所有成熟T淋巴细胞的表面， 是总T淋巴细胞的重要标志，CD3+ 常见于甲状 腺功能亢进、淋巴细胞性甲状腺炎、重症肌无 力以及器官移植后排斥反应。 CD3+ 主要见于 免疫缺陷病，如AIDS、先天性胸腺发育不全 综合征以及联合免疫缺陷病等。亦可见于恶性 肿瘤、SLE、免疫抑制剂治疗等。 T细胞分化抗原测定 l白细胞分化抗原（cluster differentiation，CD） lCD3代表总T淋巴细胞，CD4是辅助、诱导T细胞的标 志，CD8是抑制、杀伤性T细胞的标志。应用单抗和荧 光标记二抗反应在荧光显微镜下或流式细胞仪中计数 CD的百分率。 l参考值 ：免疫荧光法（IFA）： CD3为63.1%10.8% ； CD4 为42.8%9.5%；CD8 19.6%5.9%；CD4 /CD8 为（2.20.7）/1。流式细胞术：CD3 61%85%；CD4 28%58%；CD8 19%48%；CD4 /CD80.92.0/1。 T细胞分化抗原测定 l临床意义 lCD3 lCD4+T细胞下降 常见于某些病毒感染性疾病，如 AIDS、MCV、严重创伤、全身麻醉、大手术、应用 免疫抑制剂等； 升高见于类风湿性关节炎活动期。 lCD8+ T细胞下降 常见于类风湿性关节炎、Sjogren综合 征、重症肌无力、DM（II型）以及膜型肾小球肾炎等 ； 升高见于传染性单核细胞增多症急性期、MCV以 及慢性乙肝。 lCD4 +/CD8+比值下降，常见于AIDS、瘤型麻风病、恶 性肿瘤进行期和复发时。也见于部分感染性疾病如传 染性单核细胞增多症、MCV、血吸虫病等；增高见于 类风湿性关节炎活动期、SLE、Sjogren综合征、重症 肌无力、膜型肾小球肾炎以及器官移植后排斥反应等 。 淋巴细胞功能检测 lT细胞转化试验 l形态学法： T细胞转化率60.1%7.6% l3H-TdR掺入法：培养淋巴细胞用液体闪乐 烁仪测量，记录每分钟脉冲数（cpm）。 lSI（刺激指数）=PHA刺激管cpm均值/对照管cpm均值 lSI2为有意义，2为淋巴细胞转化率降低。 T细胞转化试验 l临床意义 l判断机体细胞免疫功能水平，降低常见 于细胞免疫缺陷或细胞免疫功能低下者 ，如恶性肿瘤、淋巴瘤、重症结核、肝 硬化等。增高常见于Down综合征。 l估计疾病的疗效与预后 B淋巴细胞表面标志物检测 l表面抗原：CD19、CD20、CD21、CD22和 CD40等 l表面受体：B细胞抗原受体（BCR）、细胞因 子受体（CKR）、补体受体（CR）与Fc受体 等。 lB细胞表面免疫球蛋白（BCR，SmIg）是B细 胞的特征性表面标志。将荧光标记的抗不同类 型Ig的单克隆抗体进行检测，可将B细胞分为 SmIgG、SmIgM、 SmIgA、 SmIgD、 SmIgE 。 B淋巴细胞表面标志物检测 l参考值：免疫荧光法（羊抗人）（以携带该标 志的细胞百分数表示） lSmIg+细胞总数：均值21%（16%28%） lSmIgG+ 细胞：均值7.1%（4%13%） lSmIgM+细胞：均值8.9%（7%13%） lSmIgA+细胞： 均值2.2%（1%4%） lSmIgD+细胞： 均值6.2%（5%8%） lSmIgE+细胞： 均值0.9%（0%1.5%） B淋巴细胞表面标志物检测 l临床意义 lSmIg+细胞增高 ：常与B细胞恶性增殖有 关，主要见于慢淋、毛细胞白血病以及 巨球蛋白血症等。 lSmIg+细胞减低：主要与体液免疫缺陷有 关，常见于性联丙种球蛋白缺乏症、严 重联合免疫缺陷病等。 B淋巴细胞表面标志物检测 lB细胞分化抗原CD19、CD20、CD21、 CD22测定 l参考值：FACS：CD19+细胞 11.74%3.73% l临床意义 CD19为全部B细胞共有的表面 标志，增高见于B细胞系统的恶性种瘤， 减低见于体液免疫缺陷病。 NK细胞活性测定 lNK细胞能直接杀伤效应细胞，具有抗肿瘤、 抗感染和和免疫调节等功能，亦参与移植物排 斥反应、自身免疫病和超敏反应的发生。 lLDH释放法 l参考值 细胞毒指数：27.5%52.5% l51Cr释放法 l参考值 NK细胞活性（自然杀伤率）： 47.6%76.8% NK细胞活性测定 l临床意义 l活性升高 常见于病毒感染的早期，Down综合征，接 受器官移植、骨髓移植的患者等及免疫增强剂治疗患 者。 l活性降低 常见于恶性肿瘤、重症联合免疫缺陷病， AIDS和免疫抑制剂治疗者等。 l肿瘤疗效观察及预后评价 l免疫调节功能 NK细胞可释放INF-、INF-和GM- CSF等细胞因子。 乙型肝炎病毒血清标记物检测 lHBeAg，Anti-HBe或抗Hbe lHBeAg，Anti-HBc或抗Hbc 测定方法：ELASA，RIA HBsAg，Anti-HBs或抗HBs 乙型肝炎病毒血清标记物检测 lHBsAg（+）表示肝中有HBV 见于：乙型肝炎潜伏期和急性期。 慢性迁延性肝炎，慢性活动性肝炎，肝硬化 ，肝癌。 慢性HBsAg携带者。 Anti-HBs或抗HBs：中和抗体 乙型肝炎病毒血清标记物检测 lHBeAg：有乙型肝炎，是病毒复制活跃 ，传染性强的指标；持续阳性易转变为 慢性肝炎； HBeAg+和 HBsAg+可垂直传 播。 lAnti-HBe或抗Hbe：出现于急性感染的 恢复期，持续时间较长。意味着HBV部 分被清除或抑制，复制减少，传染性降 低。 乙型肝炎病毒血清标记物 lAnti-HBc或抗HBc：反映肝细胞受到HBV侵害 的一种指标，主要包括IgM、IgG、IgA。 l抗HBc IgM阳性是最早出现的特异性抗体，是 诊断急性乙型肝炎和判断病毒复制活跃的指标 ，并提示病人的血液有强传染性。也见于慢性 活动性肝炎。 l抗HBc IgG 其阳性滴度高，表明患有乙型肝炎 ，指正在感染；低滴度为既往感染指标，体内 时间长。 乙型肝炎病毒血清标记物 lHBV-DNA定性和定量测定：目前定量测 定范围为102 108 拷贝/ml。 l与血清免疫学结果的综合评价 HBsAg和Anti-HBs HBeAg，Anti-HBe ，Anti-HBc 5项标志物的变化和联合检测的临床意义 丙型肝炎病毒标志物检测 l抗-HCV（ELISA） l抗-HCV IgM阳性 常见于急性HCV感染，是诊断丙 肝的早期敏感指标；是HCV活动的指标，是判断HCV 传染性的指标。 l抗-HCV IgG lHCV-RNA测定 l测定方法 逆转录巢式PCR法，荧光定量PCR法 l（第三代试剂抗原包括C、NS3、NS4、NS5；丙肝病毒易发生变 异，抗-HCV阳转时间差异较大） 血清抗链球菌溶血素“O”测定 l参考值： 乳胶凝集法（LAT）：500U l意义：增高 常见于A组溶血链球菌感染相关疾 病，如扁桃腺炎、感染性心内膜炎、风湿热、 链球菌感染后肾小球肾炎等。 lASO 在A组溶血链球菌感染后1周开始升高， 46周达高峰，可持续几个月或几年。 l假阳性与假阴性 伤寒、副伤寒沙门菌免疫测定 l肥达（Widal）反应 l参考值 lO凝集价1：80 l伤寒H凝集价1：160 l副伤寒A、B、C凝集价1：80 l伤寒、副伤寒沙门菌抗体IgM测定 l参考值 ELASA法：阴性或滴度1：20 。 伤寒、副伤寒沙门菌免疫测定 l临床意义 lO升高，H正常 lH正常，O升高 lO升高，H升高 lO升高，A、B、C任何一项升高 血清C-反应蛋白（CRP）测定 lC-反应蛋白是一种由肝脏合成的，能与肺炎双球菌C 多糖体起反应的急性时相反应蛋白，具有激活补体， 促进吞噬和免疫调理作用。 l参考值：8.2mg/L（免疫比浊法） l意义 组织损伤，如大手术，严重创伤，烧伤，心肌梗 死等，发病后数小时迅速增高，病情好转后又迅速下 降。又复升高提示继发感染或深部静脉血栓形成。 l风湿热活动期，可达200mg/L以上。 l细菌性感染常明显升高，病毒性感染升高不明显或轻 度升高。 l恶性肿瘤，器官移植后排斥反应，妊娠等可见明显升 高可在发病后数小时迅速增高，病情好转后又迅速下 降至正常。 肾综合征出血热病毒抗体检测 l参考值 lIFA，ELASA：阴性 l特异性IgM-感染后23天检出，710天达 高峰。特异性IgG感染后两周出现，可持 续多年。 艾滋病血清学检查 l检测抗HIV（I型或II型）是AIDS诊断的一个主要指标 。抗原为HIV感染的T细胞株的病毒抗原（HLA-DR抗 原污染可出现假阳性） 。 l方法：初筛试验ELASA ，乳胶凝集法，免疫印迹法， 斑点免疫渗透法。 确认试验 可选用蛋白印迹试验（WB）， PCR法检查HIV病毒DNA。 lHIV抗原检测 P24抗原（病毒衣壳蛋白，具群特异性 ）。 HIV核酸检测 DNA-PCR；RNA-PCR 梅毒血清学检查 l是由梅毒螺旋体梅毒亚种所致的一种性 传播疾病。 l梅毒螺旋体抗体检测：非密螺旋体抗原 试验和密螺旋体抗原试验，前者为筛选 试验和治疗效果监测，后者为确诊诊断 。 l暗视野显微镜检查 l梅毒螺旋体PCR检测 甲胎蛋白（AFP）测定 l参考值 CLIA，RIA，ELASA：血清25g/L l临床意义 l原发性肝癌明显升高，AFP300 g/L l病毒性肝炎、肝硬化患者不同程度AFP升高但 常 300 g/L。 l生殖腺胚胎性肿瘤血清AFP升高 l妊娠小扁豆凝集素（LCA）结合型AFP25% 提示原发性肝癌。 自身抗体检查 l自身免疫性疾病（AID） lAID-器官特异性和非器官特异性（抗原为细胞 核或胞浆成分）及中间型。 l抗核抗体（ANA）：是以细胞的核成分为靶抗 原的自身抗体的总称。间接免疫荧光检查有四 种荧光图谱：均质型（抗dsDNA抗体和抗组蛋 白抗体）；周边型（抗dsDNA抗体）；斑点型 或颗粒型（抗U1-RNP、抗Sm、抗Scl-70、抗 SS-B/La、抗SS-A/Ro等）；核仁型（核糖体、 U3-RNP、RNA聚合酶）。 自身抗体检查 l抗核抗体（ANA）检查：抗各种细胞核成分（ 脱氧核糖核蛋白-DNP、DNA、可提取的核抗 原-ENA和RNA等）。 l参考值：IFA法阴性，血清滴度1：40为阳性 l见于SLE（80%100%）、MCTD（100%） 、原发性胆汁性肝硬化95%100%）、DM （ 30%50%）、RA等。 自身抗体检查 l抗DNA抗体分为：抗ds-DNA、抗ss-DNA、抗z-DNA 抗z-DNA 对SLE有特异性，检出率在90%以上。 l抗dsDNA抗体测定的临床意义 l见于SLE活动期，阳性率70%90%。特异性教高（ 95%）敏感性较低-诊断与治疗监控。另外参与SLE发 病机制。 l抗Sm抗体测定：为SLE所特有，疾病特异度达99%， 且能反应疾病活动的程度，灵敏度较低，平均为20% 。与CNS、肾病、肺纤维化及心膜炎有一定关系。 自身抗体检查 l抗组蛋白抗体（AHA）测定 l临床意义：50%70%的SLE及95%以上的药物诱导性 狼疮可出现，主要靶抗原为H2A-H2B DNA复合物，与 SLE活动有关。 l抗核糖核蛋白（RNP）抗体测定 l临床意义：抗U1-RNP抗体主要与MCTD相关，在 30%40%的SLE病人中可检测到，并常与Sm抗体相 伴出现。常与下列临床表现有关，肾脏较少累及、雷 诺现象、手肿胀、食管运动不良等。 自身抗体检查 l抗SS-A/Ro抗体测定 l干燥综合征有三种不同的自身抗体：SSA、 SSB、SSC（RANA），前两者仅见于原发性 干燥综合征，后者见于伴类风湿性关节炎的继 发性干燥综合征。 lSS-A/Ro抗体见于干燥综合征（SjS）（灵敏度 88%96%），RA（3%10%），SLE（ 24%60%）。其他疾病：亚急性皮肤性狼疮 （70%90%