生物化学常用检验项目及质量控制.ppt

1 1 生物化学常用检验项目生物化学常用检验项目 及质量控制及质量控制 昌大一附院检验科昌大一附院检验科 郑晓丰郑晓丰 2 2 主要内容：主要内容： 一、常用生化检验项目的一、常用生化检验项目的 原理及临床意义原理及临床意义 二、生化检验的质量控制二、生化检验的质量控制 3 3 一、常用生化检验项目一、常用生化检验项目 及其临床意义及其临床意义 4 4 常用项目常用项目 肝功能类肝功能类 丙氨酸氨基转移酶丙氨酸氨基转移酶 总胆红素总胆红素 总蛋白总蛋白 白蛋白白蛋白 5 5 肾功能类肾功能类 肌酐肌酐 尿素氮尿素氮 心肌酶类心肌酶类 肌酸激酶肌酸激酶 6 6 血脂类血脂类 总胆固醇总胆固醇 甘油三酯甘油三酯 其它其它 葡萄糖葡萄糖 淀粉酶淀粉酶 7 7 各项目检验方法各项目检验方法 8 8 丙氨酸氨基转移酶丙氨酸氨基转移酶 ALTALT 底物底物L-L-丙氨酸与丙氨酸与a-a-酮戊二酸在酮戊二酸在 ALTALT作用下生成丙酮酸，生成的丙作用下生成丙酮酸，生成的丙 酮酸在乳酸脱氢酶作用下转化成酮酸在乳酸脱氢酶作用下转化成L-L- 乳酸，同时伴随着乳酸，同时伴随着NADHNADH的氧化，的氧化， 引起在波长引起在波长340nm340nm处吸光度下降，处吸光度下降， 下降速率与血清中下降速率与血清中ALTALT活力成正比活力成正比 9 9 总胆红素总胆红素TBilTBil 改良改良J-GJ-G法（仪器和手工）法（仪器和手工） 重氮反应，重氮反应， 600nm600nm比色。比色。 钒酸盐氧化法（仪器）钒酸盐氧化法（仪器） 总胆红素在表面活性剂总胆红素在表面活性剂TritonX-100TritonX-100 存在下，被钒酸盐氧化，生成胆绿素存在下，被钒酸盐氧化，生成胆绿素 ，测定，测定450nm450nm处吸光度的减少与总胆处吸光度的减少与总胆 红素的浓度成正比。红素的浓度成正比。 1010 总蛋白总蛋白TPTP 双缩脲法（仪器和手工）双缩脲法（仪器和手工） 蛋白质分子中有许多肽健蛋白质分子中有许多肽健(-CONH-)(-CONH-)， 在碱性条件下，蛋白质多肽链中的肽在碱性条件下，蛋白质多肽链中的肽 键与铜离子作用形成紫红色络合物，键与铜离子作用形成紫红色络合物， 在在540nm540nm波长有特定吸收峰，所产生波长有特定吸收峰，所产生 的颜色强度与蛋白质含量成正比。与的颜色强度与蛋白质含量成正比。与 经过同样处理的总蛋白校准品进行比经过同样处理的总蛋白校准品进行比 较，即可计算出样品中总蛋白含量。较，即可计算出样品中总蛋白含量。 1111 白蛋白白蛋白ALBALB 溴甲酚绿法（仪器和手工）溴甲酚绿法（仪器和手工） 在在pH 4.2pH 4.2的缓冲液中，白蛋白作为一的缓冲液中，白蛋白作为一 种阳离子，结合阴离子染料溴甲酚绿种阳离子，结合阴离子染料溴甲酚绿 (BCG)(BCG)形成蓝绿色复合物，在波长形成蓝绿色复合物，在波长 630nm630nm处有吸收峰。其吸光度与白蛋白处有吸收峰。其吸光度与白蛋白 浓度成正比例，与同样处理的白蛋白校浓度成正比例，与同样处理的白蛋白校 准液比较，即可计算出样品中白蛋白含准液比较，即可计算出样品中白蛋白含 量。量。 1212 肌酐肌酐CrCr 碱性苦味酸法（仪器）碱性苦味酸法（仪器）JaffeJaffe反应反应 尿、血清中的肌酐在碱性条件下尿、血清中的肌酐在碱性条件下 与苦味酸盐作用，生成黄红色的苦与苦味酸盐作用，生成黄红色的苦 味酸肌酐复合物，颜色深浅与肌酐味酸肌酐复合物，颜色深浅与肌酐 浓度成正比。浓度成正比。 1313 尿素氮尿素氮BUNBUN 酶偶联速率法（仪器）酶偶联速率法（仪器） 尿素在尿素酶催化下，水解生成氨和二氧尿素在尿素酶催化下，水解生成氨和二氧 化碳，氨在化碳，氨在-酮戊二酸和还原型辅酶酮戊二酸和还原型辅酶I I存在存在 下，经谷氨酸脱氢酶下，经谷氨酸脱氢酶(GLDH)(GLDH)催化生成谷氨催化生成谷氨 酸。同时，还原型辅酶酸。同时，还原型辅酶I I被氧化成氧化型辅被氧化成氧化型辅 酶酶I I。还原型辅酶。还原型辅酶I I在在340nm340nm波长处有吸收峰波长处有吸收峰 ，其吸光度下降的速率与待测样品中尿素的，其吸光度下降的速率与待测样品中尿素的 含量成正比。含量成正比。 1414 总胆固醇总胆固醇TCTC 酶法酶法（仪器和手工）（仪器和手工） 血清中的胆固醇酯被胆固醇酯酶血清中的胆固醇酯被胆固醇酯酶(CE)(CE)水水 解成游离胆固醇，后者被胆固醇氧化酶解成游离胆固醇，后者被胆固醇氧化酶 (COD)(COD)氧化成氧化成4-4-胆甾胆甾-3-3-烯酮并产生过氧化烯酮并产生过氧化 氢，再经过氧化物酶氢，再经过氧化物酶(POD)(POD)催化催化4 4氨基安氨基安 替比林替比林(4-AAP)(4-AAP)与酚与酚( (三者合称三者合称PAPPAP),),生成红生成红 色醌亚胺色醌亚胺(Trinder(Trinder s s反应反应) )。在。在505nm505nm比色比色 测定，其吸光度与样品中总胆固醇测定，其吸光度与样品中总胆固醇(TC)(TC)含含 量成正比。与经过同样处理的校准品进行量成正比。与经过同样处理的校准品进行 比较，即可计算出样品中总胆固醇含量。比较，即可计算出样品中总胆固醇含量。 1515 甘油三酯甘油三酯TGTG 酶法酶法（仪器和手工）（仪器和手工） 脂蛋白脂肪酶脂蛋白脂肪酶 中性脂肪中性脂肪+ H2O + H2O 甘油甘油+ +脂肪酸脂肪酸 甘油激酶甘油激酶 脂肪酸脂肪酸+ATP+ATP 甘油甘油-3-3-磷酸磷酸+ADP+ADP 甘油甘油-3-3-磷酸氧化酶磷酸氧化酶 甘油甘油-3-3-磷酸磷酸+O2 +O2 二羟丙酮磷酸二羟丙酮磷酸+ H2O2+ H2O2 过氧化物酶过氧化物酶 2H2O2+4-AA+EMSE+H3+O 2H2O2+4-AA+EMSE+H3+O 红紫色苯醌红紫色苯醌 色素色素+5 H2O+5 H2O 1616 肌酸激酶肌酸激酶 CKCK CK CK催化磷酸肌酸与二磷酸腺苷催化磷酸肌酸与二磷酸腺苷 (ADP)(ADP)反应产生三磷酸腺苷反应产生三磷酸腺苷(ATP)(ATP)与与 肌酸；偶联己糖激酶肌酸；偶联己糖激酶(HK)(HK)及葡萄糖及葡萄糖 -6-6-磷酸脱氢酶磷酸脱氢酶(G6PDH)(G6PDH)的催化反应的催化反应 。HKHK催化葡萄糖与催化葡萄糖与ATPATP反应，形成反应，形成 葡萄糖葡萄糖-6-6-磷酸，磷酸，G6PDHG6PDH催化葡萄催化葡萄 糖糖-6-6-磷酸氧化，形成磷酸氧化，形成6-6-磷酸葡萄糖磷酸葡萄糖 内酯及内酯及NADPHNADPH。NADPHNADPH生成的速生成的速 率代表率代表CKCK活力。活力。 1717 葡萄糖葡萄糖GLUGLU 葡萄糖氧化酶法葡萄糖氧化酶法 葡萄糖氧化酶能催化葡萄糖氧化成葡葡萄糖氧化酶能催化葡萄糖氧化成葡 萄糖酸，并产生过氧化氢，在色原性萄糖酸，并产生过氧化氢，在色原性 氧受体氧受体4-4-氨基安替比林偶联酚的存在氨基安替比林偶联酚的存在 下过氧化物酶催化过氧化氢，氧化下过氧化物酶催化过氧化氢，氧化 色素原，生成红色醌类化台物。其颜色素原，生成红色醌类化台物。其颜 色深浅与葡萄糖浓度成正比。与经过色深浅与葡萄糖浓度成正比。与经过 同样处理的葡萄糖校准品进行比较，同样处理的葡萄糖校准品进行比较， 即可计算出样品中葡萄糖含量。即可计算出样品中葡萄糖含量。 1818 淀粉酶淀粉酶 - -淀粉酶将底物淀粉酶将底物4,6-4,6-亚乙基亚乙基-D-D- 麦芽七糖麦芽七糖- -（EPS-G7EPS-G7）水解为多种）水解为多种 片段。这些片段又被试剂中片段。这些片段又被试剂中-葡萄葡萄 糖苷酶进一步水解，生成葡萄糖和糖苷酶进一步水解，生成葡萄糖和 对硝基酚。吸光度的上升速率与对硝基酚。吸光度的上升速率与- 淀粉酶活力成正比。淀粉酶活力成正比。 1919 各项目临床意义各项目临床意义 2020 丙氨酸氨基转移酶丙氨酸氨基转移酶 ALTALT 正常参考值正常参考值 0-40U/L0-40U/L 临床意义临床意义 增高：常见于急慢性肝增高：常见于急慢性肝 炎，炎，药物性、酒精肝损伤药物性、酒精肝损伤，脂肪肝，脂肪肝 ，肝硬化，胆道疾病等。，肝硬化，胆道疾病等。 2121 总胆红素总胆红素 TBILTBIL 正常参考值正常参考值 4.00-17.39umol/L4.00-17.39umol/L 临床意义临床意义 增高：原发生胆汁性肝硬增高：原发生胆汁性肝硬 化、急性黄疸型肝炎，慢性活动期肝化、急性黄疸型肝炎，慢性活动期肝 炎，病毒性肝炎。肝硬化，溶血性黄炎，病毒性肝炎。肝硬化，溶血性黄 疸，疸，新生儿黄疸新生儿黄疸，胆石症等，胆石症等。 2222 总蛋白总蛋白 TPTP 正常参考值正常参考值 55.00-85.00g/L55.00-85.00g/L 临床意义临床意义 增高：常见于高度脱水症（如腹泻、增高：常见于高度脱水症（如腹泻、 沤吐，休克，高热）及多发性骨髓瘤沤吐，休克，高热）及多发性骨髓瘤 。 降低：常见于恶性肿瘤，重症结核，降低：常见于恶性肿瘤，重症结核， 营养及吸收障碍，肝硬化，肾病综合营养及吸收障碍，肝硬化，肾病综合 症，烧伤，失血。症，烧伤，失血。 白蛋白白蛋白 ALBALB 正常参考值正常参考值 35.00-55.00g/L35.00-55.00g/L 临床意义：临床意义： 增高：常见于严重失水而导致血浆浓缩，增高：常见于严重失水而导致血浆浓缩， 使白蛋白浓度上升。使白蛋白浓度上升。 降低：基本与总蛋白相同，特别是肝脏，降低：基本与总蛋白相同，特别是肝脏， 肾脏疾病更为明显，肾脏疾病更为明显， 见于慢性肝炎、肝硬见于慢性肝炎、肝硬 化、肝癌、肾炎等。如白蛋白化、肝癌、肾炎等。如白蛋白30g/L30g/L, ,则预后则预后 较差。较差。 2323 2424 肌酸激酶肌酸激酶 CKCK 正常参考值正常参考值 30-170U/L30-170U/L 临床意义临床意义 增高：心梗增高：心梗4-64-6小时开始升高，小时开始升高，18-3618-36小时小时 可达正常值的可达正常值的20-3020-30倍，为最高峰，倍，为最高峰，2-42-4天天 恢复正常，另外，病毒性心肌炎，皮肌炎恢复正常，另外，病毒性心肌炎，皮肌炎 ，肌肉损伤肌肉损伤，肌营养不良，心包炎，脑血，肌营养不良，心包炎，脑血 管意外及心脏手术等都可以使管意外及心脏手术等都可以使CKCK增高。增高。 2525 尿素氮尿素氮 BUNBUN 正常参考值正常参考值 1.7-8.3 mmol/L1.7-8.3 mmol/L 临床意义临床意义 增高：常见于高蛋白饮食，糖尿病，增高：常见于高蛋白饮食，糖尿病， 重症肝病，高热，轻度肾功能低下，重症肝病，高热，轻度肾功能低下， 多发性骨髓瘤尿路闭塞，术后无尿，多发性骨髓瘤尿路闭塞，术后无尿， 尿毒症前期，肝硬化，严重肾功能衰尿毒症前期，肝硬化，严重肾功能衰 竭，尿毒症。竭，尿毒症。 肌酐肌酐 CRECRE 正常参考值正常参考值 36-132 umol/L36-132 umol/L 临床意义临床意义 增高：见于严重肾功能不全，各种肾增高：见于严重肾功能不全，各种肾 障碍，肢端肥大症等。障碍，肢端肥大症等。 降低：见于肌肉量减少（如营养不良降低：见于肌肉量减少（如营养不良 ，高龄者），多尿。，高龄者），多尿。 2626 2727 血糖血糖 GLUGLU 正常参考值正常参考值 3.4-6.2 mmol/L3.4-6.2 mmol/L 临床意义临床意义 增高：某些生理因素（情绪增高：某些生理因素（情绪 紧张，饭后紧张，饭后1-21-2小时）及注射肾上腺素小时）及注射肾上腺素 后，病理性增高见于各种糖尿病，慢性后，病理性增高见于各种糖尿病，慢性 胰腺炎，心梗，甲亢，垂体前叶嗜酸性胰腺炎，心梗，甲亢，垂体前叶嗜酸性 细胞瘤，颅内出血，颅外伤等。细胞瘤，颅内出血，颅外伤等。 2828 甘油三酯甘油三酯 TG TG 正常参考值正常参考值 0.30-1.80mmol/L0.30-1.80mmol/L 临床意义临床意义 增高：可由遗传，增高：可由遗传，饮食因素饮食因素或继发于或继发于 某些疾病，如糖尿病，肾病等。某些疾病，如糖尿病，肾病等。 降低：见于甲亢，肾上腺皮质功能低降低：见于甲亢，肾上腺皮质功能低 下，肝实质性病变，原发性下，肝实质性病变，原发性 脂蛋白缺脂蛋白缺 乏及吸收不良。乏及吸收不良。 胆固醇胆固醇 TCTC 正常参考值正常参考值 3.40-6.5mmol/L3.40-6.5mmol/L 临床意义临床意义 1.1.高脂蛋白血症与异常脂蛋白血症的高脂蛋白血症与异常脂蛋白血症的 诊断及分类；诊断及分类； 2.2.心、脑血管病的危险因素的判断；心、脑血管病的危险因素的判断； 3.TC3.TC增高或过低可以是原发的营养因增高或过低可以是原发的营养因 素或继发于某些疾病，如甲状腺病、素或继发于某些疾病，如甲状腺病、 肾病等。肾病等。 2929 3030 淀粉酶淀粉酶 AMYAMY 正常参考值正常参考值 0-220U/L0-220U/L 临床意义临床意义 增高：见于增高：见于急慢性胰腺炎急慢性胰腺炎，胰腺癌，胆，胰腺癌，胆 道疾病，胃穿孔，肠梗阻，腮腺炎，唾道疾病，胃穿孔，肠梗阻，腮腺炎，唾 液腺炎等。液腺炎等。 降低：见于肝脏疾病，如肝癌，肝硬化降低：见于肝脏疾病，如肝癌，肝硬化 。 3131 二、生化检验质量控制二、生化检验质量控制 3232 质量控制：其目的就是检测分析过程中的质量控制：其目的就是检测分析过程中的 误差，控制与分析有关的各个环节，确保误差，控制与分析有关的各个环节，确保 实验结果的准确可靠。实验结果的准确可靠。 误差：偶然误差、系统误差；误差：偶然误差、系统误差； 各个环节：患者、医护、仪器、试剂、校正品各个环节：患者、医护、仪器、试剂、校正品 等等 3333 所以，应该强调：所以，应该强调： 全面质量控制全面质量控制 3434 全面质量控制的内容全面质量控制的内容 主要内容包括：主要内容包括： 分析前分析前 分析中分析中 三个过程的质控三个过程的质控 分析后分析后 3535 全面质量控制会有专题介绍，在此仅全面质量控制会有专题介绍，在此仅 介绍分析中质量控制介绍分析中质量控制 3636 分析中的质量控制分析中的质量控制 建立项目及仪器标准操作程序，并严格执建立项目及仪器标准操作程序，并严格执 行：行： 对于手工检测项目，要根据试剂说明书要对于手工检测项目，要根据试剂说明书要 求制订项目操作卡。求制订项目操作卡。 对于仪器分析项目，要有对于仪器分析项目，要有正确的参数正确的参数设置设置 ，即合理的样品量、，即合理的样品量、试剂量试剂量、分析时间、分析时间、 温度、波长等。温度、波长等。 建立适合本室的仪器使用和维护保养程序建立适合本室的仪器使用和维护保养程序 3737 认真做好室内质控及结果分析认真做好室内质控及结果分析 与失控的处理与失控的处理 3838 室内质控室内质控 是由实验室的工作人员采用一系列统计是由实验室的工作人员采用一系列统计 学的方法，连续地评价本实验室测定工作的学的方法，连续地评价本实验室测定工作的 可靠程度，判定检验报告是否可发出的过程可靠程度，判定检验报告是否可发出的过程 ，其目的是检测、控制本实验室，其目的是检测、控制本实验室测定工作的测定工作的 精密度（重复性）精密度（重复性），并检测其，并检测其准确度的改变准确度的改变 ，提高常规测定工作的批间、批内标本检测，提高常规测定工作的批间、批内标本检测 结果的一致性。结果的一致性。 仅仅是仅仅是“ “全面质量控制全面质量控制” ”其中一个环节其中一个环节 3939 如何做室内质控，不难，各种教材如何做室内质控，不难，各种教材 都有介绍。都有介绍。 难的是如何分析质控结果，查找失难的是如何分析质控结果，查找失 控原因，以及作相应处理。控原因，以及作相应处理。 4040 失控原因分析：失控原因分析： 、看校正报告：仪器校正结束后，会打印、看校正报告：仪器校正结束后，会打印 出校正数据，或者在仪器内显示，将所有项出校正数据，或者在仪器内显示，将所有项 目的试剂空白吸光度、定标目的试剂空白吸光度、定标K K值、电极斜率逐值、电极斜率逐 日记录到记录表中，通过比较（或打印报告日记录到记录表中，通过比较（或打印报告 中的提示）可以发现校正失败的项目。中的提示）可以发现校正失败的项目。 a a 如果少数项目或个别项目校正失败，可能如果少数项目或个别项目校正失败，可能 是：是： 试剂失效、加错。试剂失效、加错。 校正品失效校正品失效、加错、校正时偶然误差发生。、加错、校正时偶然误差发生。 参数被错误地改动。参数被错误地改动。 4141 b b 如果大多数或所有项目校正失败，可能如果大多数或所有项目校正失败，可能 是仪器状态出问题：是仪器状态出问题： 吸废液针堵塞吸废液针堵塞或其它或其它- - 样品探针堵塞或其它样品探针堵塞或其它- - 搅拌棒脏污搅拌棒脏污- - 试剂探针脏污试剂探针脏污或其它或其它- - 比色杯（池）脏污或有气泡比色杯（池）脏污或有气泡- - 灯泡不稳定灯泡不稳定- - 其它其它- - 4242 、质控品本身原因：、质控品本身原因： 如果校正报告没有异常，基本可排除试剂、校如果校正报告没有异常，基本可排除试剂、校 正品、校正误差、仪器状态等，应考虑质控品本正品、校正误差、仪器状态等，应考虑质控品本 身原因：身原因： 复溶时水量多加或少加复溶时水量多加或少加: : 保存不当或冰箱故障保存不当或冰箱故障: : 化冻时没充分混匀化冻时没充分混匀: : 加样时被污染加样时被污染: : 位置放错；位置放错； 测定时偶然误差测定时偶然误差: : 4343 针对导致失控的原因，作相应处理：针对导致失控的原因，作相应处理： 更换试剂或校正品后重新校正和质控更换试剂或校正品后重新校正和质控 仪器仪器- -更换比色杯或灯泡，擦拭探针，清更换比色杯或灯泡，擦拭探针，清 通堵塞后，重新校正和质控品测定通堵塞后，重新校正和质控品测定 原质控品重新测定原质控品重新测定 更换质控品后重新测定更换质控品后重新测定 与工程师联系与工程师联系 4444 做好室内质控应注意的问题做好室内质控应注意的问题 1 1、控制物的选择、控制物的选择 （1 1）根据仪器特性和技术人员经验选择液体）根据仪器特性和技术人员经验选择液体 型或型或 冻干型，或某种品牌产品，或统一订购。冻干型，或某种品牌产品，或统一订购。 （2 2）要人血清基质者，要复溶后稳定性好者，）要人血清基质者，要复溶后稳定性好者， 在在 -20 -20 时稳定不少于时稳定不少于2020天。天。 （3 3）至于定值与非定值，一般选择非定值即可（价）至于定值与非定值，一般选择非定值即可（价 格较低）。因为室内质控主要是了解每天或每批格较低）。因为室内质控主要是了解每天或每批 之间的变化（重复性）。之间的变化（重复性）。 4545 （4 4）如果选择定值血清，必须注意：定值只）如果选择定值血清，必须注意：定值只 能起参考作用！不能作为本室的靶值。能起参考作用！不能作为本室的靶值。 1 1）定值是由几家参考实验室用常规方法测定，）定值是由几家参考实验室用常规方法测定， 不同实验室即使相同仪器、相同试剂，测定结不同实验室即使相同仪器、相同试剂，测定结 果也存在差别。果也存在差别。 2 2）质量好的质控血清目前多数从国外进口，如）质量好的质控血清目前多数从国外进口，如 BeckmanBeckman，LondoxLondox、RocheRoche、德赛、伯乐等。国、德赛、伯乐等。国 外定值特别是酶如外定值特别是酶如ckck、ALPALP等同国内有较大偏差等同国内有较大偏差 。 4646 （5 5）、同品种的不同批号：同其它商品一样）