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文档简介

酶联免疫吸附实验 (ELISA) 目的和要求 v掌握ELISA的原理、操作过程及注意事项 v了解ELISA实验结果的读取和分析 实验原理 v借助酶标记抗体（或抗原）在体外与 抗原（或抗体）结合，通过相应底物被 酶解后出现显色反应。反应颜色深浅与 抗原（或抗体）量的多少有关。 v特点：灵敏、特异 v类型： 双抗体夹心法、竞争法、间接法等 双抗夹心法ELISA 竞争法 ELISA 实验材料 vBSA包被的测定板 v酶标抗鼠IgG抗体 v待检血清，阳性血清，阴性血清 v洗涤液： PBS吐温-20 v底物液：邻苯二胺（OPD） v终止液：10% H2S04 实验步骤 加入稀释好的待测血清每孔100ul， 37孵育40min 加入100ul酶标抗体, 37孵育30min 洗板3次,每次1min 洗板3次,每次1min 实验步骤 加入100ulTMB底物液避光室 温孵育15min 终止反应:每孔加1滴10硫酸 结果观察 注意事项 u加样：应将所加物加在ELISA板孔的底部，并 注意不可溅出，不可产生气泡。 u洗板：每次洗液加入后，应静置1分钟使清洗 更加彻底。末次洗板尽量将水甩干。 u液体全部加完后，可将酶标板在桌子上平行轻 轻晃动30秒，混匀液体。 u底物有毒性，终止液对皮肤有腐蚀性，尽量避 免接触。 将待测血清1:100稀释后，再做倍比稀释到各孔 ，每孔100l，见表。注意混匀。 1: 100 1: 200 1: 400 1: 800 1: 1600 1: 3200 1: 6400 1: 12800 阴性 血清 阴性 血清 100ul 血清稀释及加样 1: 100 1: 200 1: 400 1: 800 1: 1600
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