实验二-影响酶促反应的因素.ppt

实验二 温度、pH 值、激活 剂和抑制 剂对酶活 性的影响 及特异性 一、实验目的 1通过实验，观察温度、pH值、激活剂与 抑制剂对酶促反应速度的影响。 2能运用所学的生化知识对实验结果进行 正确的分析。 二、实验原理 利用淀粉及其水解产物的颜色反应，来比较唾液淀粉酶在 不同条件下催化淀粉水解的程度，从而判断温度、pH、激 动剂和抑制剂对酶的活性影响。 淀粉糊精 麦芽糖和葡萄糖 蓝色 碘 紫色红色无色 无色 碘碘 二、实验原理 u在低温时，酶活性降低，酶促反应速度较慢，甚 至停止；随着温度升高，酶的活性恢复，反应速 度加快；当达到最适温度时，酶的活性最大，酶 促反应速度达到最大。人体内大多数的酶的最适 温度在37左右。温度过高，酶变性失活，酶促 反应速度下降，甚至停止。 u每种酶都有最适的pH值，在最适pH值时，酶的活 性最大，酶促反应速度最快；偏离酶的最适pH均 可引起酶蛋白变性而降低或失去活性。唾液淀粉 酶的最适pH值为6.8。 u氯离子对唾液淀粉酶有激活作用；铜离子对唾液 淀粉酶有抑制作用。 三、实验材料 u1.1%淀粉溶液 取可溶性淀粉1g, 加5ml蒸馏水, 调成糊状, 再加80ml蒸馏水, 加热并不断搅拌, 使其充分溶解, 放冷, 最后用蒸馏水稀释至 100ml。 u2.pH3.0缓冲液 取0.2mmol/LNa2HPO4溶液205ml， 0.1mol/L柠檬酸溶液795ml, 混合即成. u3.pH6.8缓冲液 取0.2mmol/LNa2HPO4溶液772ml， 0.1mol/L柠檬酸溶液228ml, 混合即成. u4.pH8.0缓冲液 取0.2mmol/LNa2HPO4溶液972ml， 0.1mol/L柠檬酸溶液28ml混合即成. 5.0.9%NaCl溶液 6.1% CuSO4溶液 7.碘液 9.试管架 11.试管夹 12.滴管 13.白瓷板 14.恒温水浴箱 15.电炉 16.烧杯 【注意事项】 1.注意实验器材的干净，避免杂质影响反应 结果 2.各管反应时间应严格控制，保证一致。 四、实验方法 稀释唾液制备 用水漱口，含蒸馏水咀嚼2分钟 后，把唾液吐进烧杯中备用。（注：唾液淀粉酶 活性具有个体差异，按下述各实验方法进行实验 ，有部分同学可能失败，可重新操作，但在重做 过程中，要根据第一次实验结果改变稀释唾液的 用量，反应太慢，则增加稀释唾液用量，如果反 应太快，则减少稀释唾液的用量） 煮沸唾液的制备 取上述唾液约5ml，放入沸水中 煮沸5分钟，取出备用。 （一）温度对酶促反应速度的影响 管 号 123 缓缓冲液（pH6.8）20滴20滴20滴 1%淀粉溶液10滴10滴10滴 把三支管溶液摇摇匀，然后分别别放至相应应的温度中水浴预预温 预预温温度 0 37 37 预预温5分钟钟后取出，继续继续 向各管加入相应应唾液 稀释释唾液10滴10滴 煮沸唾液10滴 把三支管摇摇匀，然后分别别放至相应应的温度中水浴10分钟钟，加碘2滴 水浴温度 03737 结果与分析 取白瓷板一块，向各凹分别加1滴碘液，每 隔半分钟用滴管或玻棒从2号管取溶液1滴 ，加到已加有碘液的小凹中，观察颜色变 化，直至与碘不呈色时（即只显棕黄色时 ），向各管加碘液1滴，摇匀观察颜色变化 (切记勿摇动)。摇匀再观察。 （二）pH对酶促反应速度的影响 管号123 1%淀粉溶液10滴10滴10滴 pH5.0缓缓冲液10滴 pH6.8缓缓冲液10滴 pH8.0缓缓冲液10滴 稀释释唾液5滴5滴5滴 把三支管摇摇匀，然后放至 37水浴10分钟钟，加碘2滴摇摇匀 结果与分析 将各管混匀，放进37水浴箱 中保温。 取白瓷板一块，向各凹分别加 1滴碘液，每隔半分钟用滴管 或玻棒从2号管取溶液1滴，加 到已加有碘液的小凹中，观察 颜色变化，直至与碘不呈色时 （即只显棕黄色时），向各管 加碘液1滴，摇匀观察颜色变 化。 （三）激活剂与抑制剂对酶促反应速度的影响 管号1234 1%淀粉溶液10滴10滴10滴10滴 pH6.8缓缓冲液10滴10滴10滴10滴 蒸馏馏水2滴 氯氯化钠钠溶液2滴 CuSO4溶液2滴 Na2SO4溶液2滴 稀释释唾液5滴5滴5滴5滴 把三支管摇摇匀，然后放至 37水浴10分钟钟，加碘2滴摇摇匀 结果与分析 将各管摇匀，放进37水 浴箱中保温。取白瓷板一 块，向各凹分别加1滴碘 液，每隔半分钟用滴管或 玻棒从2号管取溶液1滴， 加到已加有碘液的小凹中 ，观察颜色变化，直至与 碘不呈色时（即只显棕黄 色时），向各管加碘液1 滴，摇匀，观察各管颜色 变化。 激活剂与抑制剂 激活剂与抑制剂 五、思考题 1. 什么是酶的最适温度？ 2. 什么是酶的最适pH? 3. 激活剂与抑制剂对酶活性影 响实验中设置第四管的作用 是什么？ 4. 什么是酶的特异性？ （四） 酶的专一性对酶促反应的影响。 加入物1号管2号管3号管 PH值6.8缓冲液20滴20滴20滴 1