EBV血清学诊断及临床应用PPT精品课件

,EBV感染血清学诊断及其临床应用,疱疹病毒家族,Epstein-Barr Virus (EBV),Cytomegalievirus (CMV),Varicella-Zoster Virus (VZV),Human Herpes Virus (HHV-6, -7, -8),Herpes simplex virus (HSV-1, HSV-2),Herpes Virus Family,EBV（Epstein-Barr Virus） 一种常见的人疱疹病毒 结构特点：, 内核：缠绕DNA的核心蛋白 中环：衣壳蛋白（二十面体） 外环：包膜（上面有刺突）,EBV相关疾病,传染性单核细胞增多症,(Infectious Mononucleosis,IM), EBV原发感染急性发作的疾病, 在少儿或青春期初次感染EBV，部分个体会,出现 IM 病症, 发病人群,发达国家：15 25岁,中国：学龄或学龄前少儿,EBV相关疾病,鼻咽癌,(nasopharyngeal carcinoma), 发生于鼻咽粘膜的上皮性,恶性肿瘤, 具有明显的区域性和人种,倾向性, 东南亚国家常见癌症之一，,发病率1053/100,000人, 中国南部发病率,1530/100,000,传染性单核细胞增多症 (Infectious Mononucleosis,IM),EBV原发感染导致的疾病,血涂片检测活化淋巴细胞,敏感性及特异性较差,嗜异性抗体检测,多克隆B细胞活化,特异性较差，易与其他感染发生交叉反应 小于5岁儿童无法检测，不适于中国,血清学检测抗EBV相关抗原抗体,主流方法，保证敏感性和特异性,聚合酶链反应（PCR）,受病毒载量变化影响检出,检测方法,EBV抗原, 主要关注的抗原类型 VCA(CA): 衣壳抗原 EA：早期抗原 EBNA：核抗原 主要关注的抗体类型 IgG IgM,antibody titer,Anti-EBV antibodies: Anti-EBV-CA (IgM),course of disease,weeks,months,infection,symptoms,antibody titer,Anti-EBV antibodies: Anti-EBV-CA (IgG),course of disease,weeks,months,symptoms,antibody titer,Anti-EBV antibodies: Anti-EBV-EA (IgG),course of disease,weeks,months,symptoms,antibody titer,Anti-EBV antibodies: Anti-EBNA (IgG),course of disease,weeks,months,symptoms,antibody titer,Anti-EBV antibodies: Early and Late Phase,course of disease,weeks,months,early phase,late phase,symptoms,Anti-EBV antibodies: Avidity,antibody titer,Anti-EBV antibodies: Early phase,early phase,CA (IgM),CA (IgM + IgG) EA (IgG) CA (IgM) + CA (IgG, low avidity),Antibody titer,Anti-EBV antibodies: Late phase,late phase,CA (IgG, high avidity) + EBNA (IgG),血清学检测的复杂性,5% 的EBV新近感染不产生anti-CA (IgM),Anti-CA (IgM)在少数 病例中可以持续存在,20-30% 的新近感染不产生 Anti-EA (IgG),Anti-EBNA (IgG) 阴性，由于： - 慢性活动性EBV感染 - 细胞免疫抑制,亲合力检测的必要性, 对临床明确确诊的58例传单患者进行EBV多种抗体检测，结果：,Everything is possible! 结论：单纯依靠抗EBV-CA-IgM阳性来诊断传单，敏感性较低，结合 EBV抗体谱和亲合力检测可提高诊断的敏感性 临床检验杂志2005年第23卷第5期，谢正德等，抗体亲合力检测对诊断儿童EBV相关性传染性单核细胞增多症的意义,推荐检测策略,多个指标同时检测，综合判断,CA-IgM,CA-IgG,EA-IgG,NA-IgG,CA-IgA,诊断标准,国内学者提出针对中国患者的诊断标准,实用儿科临床杂志第二十二卷第二十二期，儿童EB病毒传染性单核细胞增多症临床特征及诊断标准，谢正德， 首都医科大学二附属北京儿童医院,欧蒙EBV产品系列,完 整 的 解 决 方 案,EUROIMMUN,欧蒙EBV荧光产品,FI 2799-1 FI 2799-1x,Virus serology IIFT EBV 荧光模式 (1) EBV-CA IgG,positive reaction,negative reaction,Virus serology IIFT EBV 荧光模式 (2) EBV-CA IgM,positive reaction,negative reaction,Virus serology IIFT EBV荧光模式 (3) EBV-EA IgG,positive reaction,negative reaction,Virus serology IIFT EBV 荧光模式 (4) EBNA,positive reaction,negative reaction,Virus serology IIFT EBV亲合力检测 样本温育(两次) 清洗,Test A 样本缓冲液温育,Test B 尿素溶液温育,清洗,酶结合物温育,清洗,滴度改变,Test A,Test B,滴度相似,Test A,Test B,低亲合力抗体: Anti-EBV-CA,+ Buffer,+ Urea,高亲合力抗体: Anti-EBV-CA,+ Buffer,+ Urea,Patient 1,Patient 2,EBV抗体谱检测: 示例,EBV-CA (IgG),w/o urea,EBV-CA (IgG),with urea,EBV-CA (IgM),EBV-EA (IgG),EBNA (IgG), 新近感染, 既往感染,亲合力检测,早期,晚期或既往,EBV抗体谱检测: 示例,EBV-CA (IgG),w/o urea,EBV-CA (IgG),with urea,EBV-CA (IgM),EBV-EA (IgG),EBNA (IgG),亲和力检测,早期,晚期或既往,EBNA (IgG) 阴性 早期?,EBV-CA (IgM) 阴性 晚期或 既往?,1. 2.,EBNA 阴性是由于EBNA缺失? CA-IgM阴性是由于5%的新近感染不产生IgM?, ,亲合力检测 低亲合力 anti-EBV-CA (IgG) 早期感染,EBV抗体谱检测: 示例,EBV-CA (IgG),w/o urea,EBV-CA (IgG),with urea,EBV-CA (IgM),EBV-EA (IgG),EBNA (IgG),亲和力检测,早期,晚期或既往,EBNA (IgG) 阳性 晚期 或既往,EBV-CA (IgM) 阳性 早期, ,IgM-持续存在? 亲合力检测 高亲和力 anti-EBV-CA (IgG) 晚期或既往感染,欧蒙EBV ELISA产品,EI 2791 EI 2795 EI 2793,欧蒙EBV 膜条产品：EUROLINE EBV Profile 2 早期,早期或晚期 晚期 晚期, 所有相关抗原包被在同一膜条 可提供IgG和IgM抗体检测 可实现全自动操作 可通过EUROLineScan软件进行数字化结 果分析,DN 2790,鼻咽癌 (nasopharyngeal carcinoma),与EBV有明确关联的肿瘤,NPC 病因, 遗传因素（家族与种族聚集现象）, 环境与饮食（甲醛接触、咸鱼与腌制食品）, 与EBV感染联系紧密（相关度100%）,（所有NPC患者体液及血清中均存在EBV的DNA与高于正常滴度值的抗体。,NPC 诊断, 早期基本无症状，出现症状就医时基本已到晚期 早期治疗，5年生存率可达90%以上。晚期治疗，不超过20%（癌转 移） 高发区人群中的例行筛查意义重大 找到合适的早期诊断指标至关重要,筛查手段, NPC临床诊断标准：组织活检, EBV血清学诊断的作用凸显 优势：便于体检操作，技术成熟 问题：如何选择标志性抗体,VCA-IgA,优势： 研究较早,VCA-IgA,优势： 验证充分 2004 年第三届中国肿瘤学 术大会 EBCA-IgA是目 前唯一进行过大 样本量普查研究 的筛查指标,VCA-IgA,优势： 权威支持,N Engl J Med. 2001 Dec 27;345(26):1877-82.,VCA-IgA,优势： 高灵敏度,J Clin Virol. 2007 Dec;40(4):284-8. Epub 2007 Oct 31,EA-IgA,优势：, 研究较早，且验证充分,Int J Cancer. 1976 Jan 15;17(1):1-7., 极高的特异性（接近100%）,J Clin Virol. 2007 Dec;40(4):284-8. Epub 2007 Oct 31,EA-IgA 特点： 特异性高，敏感性一般,J Clin Virol. 2007 Dec;40(4):284-8. Epub 2007 Oct 31,NPC检测策略,CA IgA, 研究得较早 在中国唯一经过大样本量普查 临床症状前3年（平均）即可显,阳性 灵敏度高 方案1：CA-IgA、EA-IgA同时检测，最大限度保证检出率与可靠性。 方案2：