FOLIN-酚试剂法测定蛋白质含量（LOWRY基本法）.ppt_第1页
FOLIN-酚试剂法测定蛋白质含量（LOWRY基本法）.ppt_第2页
FOLIN-酚试剂法测定蛋白质含量（LOWRY基本法）.ppt_第3页
FOLIN-酚试剂法测定蛋白质含量（LOWRY基本法）.ppt_第4页
FOLIN-酚试剂法测定蛋白质含量（LOWRY基本法）.ppt_第5页
已阅读5页，还剩7页未读， 继续免费阅读

下载本文档

版权说明：本文档由用户提供并上传，收益归属内容提供方，若内容存在侵权，请进行举报或认领

文档简介

实验8 Folin-酚试剂法测定蛋白质含量（Lowry基本法）,一 目的与要求 Folin-酚试剂法测定蛋白质含量的原理和方法。,二 实验原理,Folin-酚试剂（Folin-phenol reagent）的显色原理主要是：试剂中的磷钼酸-磷钨酸混合物被蛋白质还原，形成多种还原型的混合酸，并且有特殊的蓝色。包括两步反应。 试剂甲使蛋白质发生烯醇化反应，在碱性条件下，形成蛋白质-铜络合物，从而使电子转移到混合酸中，大大地增强了酚试剂对蛋白质的敏感性。, 试剂乙（磷钼酸-磷钨酸混合液）受蛋白质中半胱氨酸、酪氨酸、色氨酸和组氨酸等作用，使钨酸、钼酸两者同时失去1个、2个或3个氧原子，还原成含有多种还原型的混合酸，并且有特殊的蓝色。,利用蓝色深浅与蛋白质浓度的关系，可制备标准曲线，测定样品中蛋白质含量。本法可测定的蛋白质含量为15-280g/mL。,三 操作步骤 标准曲线制作, 取试管6支，编号。按表7-2操作，加入牛血清白蛋白标准溶液（200g/mL），补足蒸馏水，使各管容量达1mL。算出各管中实际蛋白质含量，然后按顺序加入定量试剂甲、乙（各管加入乙试剂必须快速，并立即摇匀！），在分光光度计以上波长500nm比色，读取光密度。,表7-2 Folin-酚试剂法标准曲线制作步骤,2. 以各标准溶液浓度为横坐标，各管的光密度为纵坐标作图，得标准曲线。 标准曲线必须从零点开始出发，最好能成一直线。画好后，注明所用仪器的型号及编号、所用波长及测定方法、名称及制作日期。, 样品测定 取试管3支，分为测定管和空白管和标准管。测定管内加入1mL待测样品溶液（适当稀释至25-280g/mL蛋白质）。操作步骤与制作标准曲线相同，见表7-3。,四 结果与计算 根据光密度读数查得标准曲线，计算检测液内的蛋白质含量。进一步可根据检测溶液的稀释倍数及实际所要求的蛋白质浓度换算。本实验要求蛋白质含量浓度以g/L为单位，也可以
人人文库> 全部分类> 教育资料 > 课件下载

温馨提示

  • 1. 本站所有资源如无特殊说明，都需要本地电脑安装OFFICE2007和PDF阅读器。图纸软件为CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.压缩文件请下载最新的WinRAR软件解压。
  • 2. 本站的文档不包含任何第三方提供的附件图纸等，如果需要附件，请联系上传者。文件的所有权益归上传用户所有。
  • 3. 本站RAR压缩包中若带图纸，网页内容里面会有图纸预览，若没有图纸预览就没有图纸。
  • 4. 未经权益所有人同意不得将文件中的内容挪作商业或盈利用途。
  • 5. 人人文库网仅提供信息存储空间，仅对用户上传内容的表现方式做保护处理，对用户上传分享的文档内容本身不做任何修改或编辑，并不能对任何下载内容负责。
  • 6. 下载文件中如有侵权或不适当内容，请与我们联系，我们立即纠正。
  • 7. 本站不保证下载资源的准确性、安全性和完整性, 同时也不承担用户因使用这些下载资源对自己和他人造成任何形式的伤害或损失。

最新文档

评论

0/150

提交评论