实验一细胞膜的渗透性.ppt

实验一 细胞膜的渗透性及去污剂对红细胞膜稳定性的影响,一 细胞膜的渗透性 （一）、实验目的 1.了解细胞膜的渗透性 2.了解各种小分子物质跨膜进入红细胞的速度,1 物质运输 小分子： 大分子：,（二）、实验原理,2. 等渗 （isotonic or isosmotic）溶液和溶血 在等渗溶液中的红细胞保持正常大小和双凹圆碟形；在渗透压递减的一系列溶液中，红细胞逐步胀大并双侧凸起，当体积增加30%时成为球形；体积增加45%60%则细胞膜损伤而发生溶血，絮状物消失，溶液由悬浊液变为澄清，这时血红蛋白逸出细胞外。,将红细胞放入数种等渗溶液中，由于红细胞对各种溶质的透性不同，有的溶质可以渗入，有的不能渗入，渗入的溶质能够提高红细胞的渗透压，所以促使水分进入细胞，引起溶血，由于溶质透入速度互不相同，因此溶血时间也不相同。,（三）、实验材料、用品 1. 器材 50ml烧杯，试管(110cm),试管架，移液管(5mL、0.5mL). 2. 材料 鸡血. 3. 试剂 0.17mol/L氯化钠，0.17mol/L氯化铵，0.17mol/L醋酸铵，0.17mol/L硝酸钠，0.12mol/L草酸铵，0.12mol/L硫酸钠，0.32mol/L葡萄糖，0.32mol/L甘油，0.32mol/L乙醇，0.32mol/L丙酮，,（四）、实验步骤 鸡血细胞悬液 取50ml小烧杯一个，加1份鸡血和10份0.17mol/L氯化钠，形成一种不透明的红色液体，此即为稀释的鸡血.,2. 低渗溶液 取试管一支，加入5ml蒸馏水，再加入0.5ml稀释鸡血，注意观察溶液颜色的变化，由不透明的红色逐渐澄清，说明红细胞发生破裂造成100%红细胞溶血，使光线比较容易透过溶液。 3. 鸡红细胞的渗透性 1）取试管一支，加入0.17mol/L氯化钠5ml，再加入0.5ml稀释鸡血，轻轻摇动，注意观察溶液颜色有无变化，有无溶血现象，为什么？,不 同 低 渗 溶 液 中 的 溶 血 现 象,（五）、实验结果 将观察到的现象列入下表，对实验结果进行比较和分析。,二 去污剂对红细胞膜稳定性的影响 （一）、实验目的 掌握用比色计测量去污剂对细胞膜溶解作用的原理。 了解各种去污剂对细胞膜稳定性的影响，学会比较这种影响的方法。,（二）、实验原理 多种去污剂可以溶解细胞膜上的磷脂化合物，从而使细胞膜破裂，释放出细胞内物质。 本实验以红血球为材料，检测几种去污剂破坏红血球细胞膜的作用。通过测定几种去污剂作用后的无细胞溶液在540毫微米（血红蛋白的特异吸收高峰）波长处的光密度值，进行检验。,（三）、实验材料、用品 1、材料： 鸡血 2、试剂： （1）中性去污剂： 10 g/L Triton X-100 ， （2）阳离子去污剂： 10 g/L十六烷基三甲基铵溴（CTAB) （3）阴离子去污剂： 10 g/L十二烷基硫酸钠（SDS） （4）不同浓度Triton X-100: 用生理盐水配制 160g/L、140g/L、120g/L、100g/L、80g/L、60g/L 3、仪器： 722型分光光度计，离心机，移液管（1mL、0.5mL），恒温培养箱。,（四）、实验步骤 1. 红血球等渗溶液的制备 取已加抗凝剂的鸡血7.5mL，加生理盐水30.0mL，2500rpm离心10分钟，收集沉下的红血球，用生理盐水洗涤一次（15mL），再离心10分钟（2500rpm），收集沉淀，加30mL生理盐水，悬浮红血球，即为红血球等渗溶液，备用。,2. 不同去污剂对细胞膜的溶解作用 表1 不同去污剂对细胞膜的溶解作用,以Triton X-100的A值作为100%的溶解作用( 对照)，计算其它去污剂的相对溶解作用。,3. 不同浓度中性去污剂对细胞膜的溶解作用 表2 不同