医学课件血液的一般检查

主讲 李妤蓉,第一章 血液学一般检验（1）,邢台医学高等专科学校 检验教研室,绪 论,一、临床检验（clinical laboratory technology or science）,又称实验诊断学，就是通过实验室的各种检查方法，包括感官检查、理学检查、化学检查、显微镜检查以及自动化仪器检查等，对病人的血液、体液、分泌物和排泄物等标本进行检查、分析，以获得病原、病理变化及脏器功能状态等资料。,教学目标,1、了解血液的生理特性 2、掌握血液标本的采集方法及注意事项 3、掌握血液标本的采集部位 4、掌握血液标本的抗凝及抗凝剂 5、掌握血涂片的制备方法,教学内容,1、一般血液学检验概述 2、血液的生理特性 3、血液标本的采集 4、抗凝剂 5、血涂片的制备,教学重点,教学重点： 血液标本的采集方法及注意事项 血液标本的采集部位 血液标本的抗凝及抗凝剂 教学难点 血液标本的抗凝,二、临床检验在医学中的作用,1、为准确诊断、及时治疗提供依据,临床检验的结果是支持诊断、鉴别诊断、甚至确定诊断的 主要依据。,例：anemia,依据：血中红细胞和血红蛋白量减少,leukemia,依据：血象和骨髓象,肾脏有实质性损伤的依据,尿液中出现蛋白、细胞 管型,问：tumor？,2、为分析病情、观察疗效、判断预后提供依据,在疾病过程中，血液、体液、分泌物和排泄物也 会随之发生相应的变化,3、为预防疾病提供资料,如血象和肿瘤细胞学的普查等,三、临床检验的一般方法,1、目视检查,直接观察标本：颜色、透明度、性状，有无 凝块或寄生虫,2、理学检查,液体的相对密度、血液比粘度、红细胞沉降 率、红细胞比积等病理变化,3、化学检查,定性和定量检测标本化学成分的病理变化,4、显微镜检查,观察有型成分的数量和形态,5、自动化仪器检查,电子技术、程序控制的发展,四、学习临床检验的目的和要求,1、理论联系实践,2、操作要求,3、检验结果必须和临床表现结合,4、检验人员的医德,第一章 血液学一般检验,血液学检查 ： 反应造血系统本身、机体全身或局部病变,有助于疾病的诊断及疗效、预后的观察,只能反应疾病某一方面的情况，不能认为是病程的全部反应；不同个体，对同一影响有不同的反应，或也可对不同影响产生 相同的反应,第一节 概论,一、血液生理概要,血液的组成 血液主要和理化性质 1.血量 2.颜色 3.红细胞在血浆中的悬浮稳定性 4.粘滞性 5.比重和渗透浓度 6.PH 7.凝固性 血液的功能 1.动输功能 2.协调功能 3.维护机体内环境稳定 4.防御功能动,二、血液标本的采集,毛细血管采血法 静脉采血法,毛细血管采血法,部位：中指或无名指尖内侧，半岁以下拇指或 足部，特殊人员视情况而定。,b. 所用器材：采血针、吸管,c. 采血步骤及注意事项,静脉采血法,部位：主要是肘静脉。还可以在：手背部手腕部等 幼儿可采用颈外静脉采血。,采血器材：一次性注射器，检验用真空定量采血装 置,c. 采血步骤及注意事项,两种采血方法的优缺点比较,毛细血管,静脉血,缺点,限制了重复实验和追 加实验，标本量少， 局部炎症可得假结果 ，组织液可混入,不同抗凝剂的使用， 改变血液性质，影响 有形成分的形态,优点,价廉、快速、操作简 便，标本可直接测定,标本代表性大，无组 织液影响，适于临床 研究，可重复实验和 追加其他实验,三、血液标本的抗凝,两个概念 1.抗凝 2.抗凝剂 抗凝的方法 1.化学抗凝-常用抗凝剂(枸椽酸钠乙二胺四乙酸二钠草酸钠双草酸盐肝素) 2.物理抗凝,常用的抗凝剂和适用,1、柠檬酸钠（枸橼酸钠或柠檬酸三钠）,a. 抗凝原理：螯合钙离子,使用方法 配成109 mmol/L(32g/L)的浓度 106 mmol/L(38 g/L) 的浓度 和血液1：9（止血检验）、和血液1：4（血沉）,化学名：3-羟基-3-羧基戊二酸（三钠盐）,c. 适用范围：止血学检验、血沉、输血保养液（毒性小）,2. 草酸钠（乙二酸的钠盐）,a. 抗凝原理：草酸钙沉淀,b. 使用方法 草酸钠0.1mol/L 和血液1：9,c. 适用范围： 止血学检验,3. 双草酸盐抗凝剂,a. 抗凝原理： 草酸钙沉淀,使用方法： 草酸钾0.8g , 草酸铵1.2g（100ml） 与血液 1：10 （80C以下烘干）,适用范围： 红细胞检验（红细胞比积、计数、网织红细胞计数） 不适于血小板计数和白细胞分类计数,4. 肝素 （含硫酸基团的粘多糖）,抗凝原理：低浓度时抑制因子a、和PF3之 间的作用，加强抗凝血酶灭活丝 氨酸蛋白酶，从而阻止凝血酶形成， 还能抑制凝血酶的自我催化及抑制 因子的作用；高浓度时阻断凝血 酶和纤维蛋白的反应。,b. 适用方法： 1g/L浓度的肝素钠（每毫克含100125u）与血液 1：10,优点：抗凝能力强、不影响血细胞体积、不易 溶血、抑制血小板聚集、能耐高温。,适用范围： 红细胞检验（红细胞计数、血红蛋白 测定、红细胞比积）和多种生化分析,5. 乙二胺四乙酸（EDTA）盐,a. 抗凝原理： 螯合钙离子,b. 使用方法： 15g/L浓度EDTA 和血液 1：10,适用范围： 对血细胞形态影响小-血小板计数； 影响血小板聚集和白细胞吞噬功能 -不易做止血学检验及血小板功能 检验。,物理方法抗凝 脱纤维蛋白： 将血液注入有玻璃珠的器皿中，转动，纤维 蛋白缠绕凝固于玻璃球，从而防止血成凝块。适 用于免疫学检验、红斑性狼疮细胞和细菌培养血 培基的制备。,四、血涂片的制备技术,血涂片的用途：血细胞形态学检验、网织红、 寄生虫检验。 血液病的诊断与鉴别诊断 各种贫血的诊断与鉴别诊断,2. 玻片的处理： 3. 血涂片制备方法：推片法、拉片法、压拉法、棕黄层涂片法 血标本的来源 血涂片既可直接用非抗凝的静脉血或毛细血管 血,也可用经EDTA抗凝的血液制备.,将推玻片向1的方向稍抽回，当血液充满推玻片的宽度后，以一定均匀的速度向2的方向滑动。,4. 血涂片质量评价： 均匀、厚薄、头体尾、边缘、两侧,注意：血滴大，速度快;角度大-血膜厚,小结,本节课内容都是要求我们掌握的，都是我们一般血液学检查的基础，所以我们要认真的掌握住，为后面个章节的学习做下良好的铺垫，打好坚实的基础！,复习题,一、 名词解释 抗凝 抗凝剂 二、 选择 1、使血涂片染色时产生蓝色背景的抗凝剂是 A 枸椽酸钠 B 乙二胺四乙酸钠盐 C 双草酸盐 D 肝素 2、以除去血中钙离子而阻止血液凝固的抗凝剂有： A 枸椽酸钠 B 乙二胺四乙酸钠盐 C 双草酸盐 D 肝素 E 草酸钠 3、血细胞分析中抗凝剂的最佳选择是 A 枸椽酸钠 B 乙二胺四乙酸钠盐 C 双草酸盐 D 肝素,4、血沉测定血和抗凝剂的比例是： A 1：9 B 1：4 C 1：10 D 以上都不对 5、血凝四项抗凝剂的最佳选择是 A 枸椽酸钠 B 乙二胺四乙酸钠盐 C 双草酸盐 D 肝素 三是非题 1、草酸钾可使红细胞胀大，草酸胺则可使红细胞缩小。 2、血涂片必须用毛细血管血制备。 3、EDTA血制备的血涂片既适用观察血小板形态，又适用观察红细胞和白细胞形态。,五、 血细胞染色技术,血涂片在用普通显微镜观察之前需要固定和染色。 固定的目的是将细胞蛋白质和多糖等成分迅速交联凝固,以保持原有形态结构; 染色的目的是使细胞的主要结构,如细胞膜、细胞质、细胞核等染上不同的颜色，以便于镜下观察。,a 碱性美蓝：是氯盐，有色部分为阳离子，染细胞核 的染料。如亚甲蓝、天青。,b 酸性伊红：是钠盐，有色部分为阴离子，能结合细胞的碱性成分并染色，如血红蛋白、嗜酸性颗粒成分及细胞浆中的某些蛋白等。,C 复合染料：碱性美蓝和酸性伊红的水溶液混合后产生一 种不溶于水的伊红化美蓝（ME）中性沉淀，即瑞氏染料。,（一）瑞氏染色法,1.瑞氏染液 概念：瑞氏染液 瑞氏染料,2. 细胞染色原理： 既有物理作用和/或化学作用,1) 物理作用:毛细管现象、渗透、吸收、吸附作用等,2)化学作用： a. 细胞内带负电荷的酸性物质易与碱性染料结合，该物质又称嗜碱性物质。如淋巴细胞质和嗜碱性粒细胞中的嗜碱性颗粒。,b.细胞内的碱性物质与酸性染料（伊红）结合成红色，因此该物质又叫嗜酸性物质。如红细胞中的血红蛋白和嗜酸性粒细胞浆中嗜酸性颗粒等为碱性物质。,c. 嗜中性粒细胞中的中性颗粒呈等电状态与伊红 美 蓝均可结合，染呈淡紫红色。,d. 细胞核蛋白主要由脱氧核糖核酸和强碱性的组蛋白、精蛋白等组成，与酸性伊红结合染成红色；但因核蛋白中还含有少量的弱酸性物质，与碱性美蓝作用染成蓝色，两种颜色混合到一起故成紫红色。,e 原始红细胞和早幼红细胞的胞质和细胞核仁的染色结果。,3）PH对细胞染色的影响 环境PHPI 则该蛋白质带负电荷增多，易与美蓝结合，染色偏蓝 常用缓冲液调节染色时的PH（6.46.8 ）,3.试剂及其配制 1) Wright染液 瑞氏染粉0.1g,甲醇60.0ml 有强大的脱水力，可将细胞固定为一定形态，并使蛋白质沉淀为颗粒状、网状等结构，增加细胞与染料接触表面积，提高对染料的吸附作用，增强染色效果。,2)磷酸盐缓冲液（PBS）：磷酸二氢钾（无水） 0.3g，磷酸氢二钠（无水）0.2g, 蒸馏水加1000ml。,4.染色步骤： a. 用蜡笔在血膜两头划线，平放于染色架上。 b. 加瑞氏染液覆盖血膜，固定1min。 c. 滴加等量或稍多的缓冲液，混匀，染色5-10 分钟。 d. 用清水冲洗，待干后镜检。,5. 注意事项： a. 血膜干透后才能染色，否则染色时易脱落。 b. 染色时间与染液浓度、室温及细胞多少有关，一般染液淡、染色时间长些效果好。 c. 染液不能过少，以防蒸发沉淀。 d. 冲洗时不能先倒掉染液，应以流水冲，防染料沉着。冲洗时间也不能长。 e. 染色过淡，可复染。 f. 染色过深可用水冲洗或浸泡，还可用甲醇脱色。,6. 瑞氏染液的质量评价,(二) 姬姆萨染色法,1.染色原理： 基本成分是伊红和亚甲蓝，改进了染料的质量，使细胞核和寄生虫着色好，结构显示更清晰，而胞浆和中性颗粒染色较差。,2.试剂 Giemsa 甲醇,3.染色方法 1) 甲醇固定干燥血膜3-5min 2)将血膜在染液中浸染10-30min 3) 流水冲洗,待干后镜检,六、血细胞显微镜计数法 测定方法及评价 器材 显微镜 微量吸管 计数板 血盖玻片 操作方法 质量控制 1、技术误差 采血部位不当 稀释倍数不准 充液不当 血液发生凝固 误认 仪器不准 混合时产生气泡 2、固有误差,血球计数板的构造和使用,血球计数板是由一块比普通载玻片厚的特制玻片制成的.玻片中有四条下凹的槽,构成三个平台.中间的平台较宽,其中间又被一短横槽隔为两半,每半边上面,刻有一个方格网.方格网上刻有9个大方格,其中中间的一个大方格为红细胞计数室.四角的大方格为白细胞计数用。一大方格的长和宽各为1mm,深度为0.1mm,其体积为0.1mm3. 计数室通常有两种规格.一种是大方格内分为16中格,每一中格又分为25小格;另一种是大方格内分为25中格,每一中格又分为16小格.但是不管计数室是哪一种构造;它们都有一个共同的特点,即每一大方格都是由1625=2516=400个小方格组成.,白,白,白,白,红,复习题,一名词解释 瑞氏染液 二、选择 1 目前最常用的血细胞染色法是 A 网织红染色法 B 瑞氏染色法 C 瑞-吉氏