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文档简介

其一患房间隔缺损、肺动脉瓣狭窄另一为正常单卵双胎儿童 之间差异表达基因的分析,吕小东 刘迎龙 刘宗正 赵勇 刘玉清 先 心 病 研 究 室,Fuwai Hospital,CAMC,.,单卵双胎特点,基因型完全相同 母体环境基本相似,单卵双胎儿童其一患CHD 另一正常原因,患儿基因结构发生改变 患儿基因表达异常,研 究 目 的,通过分析其一患ASD、PS另一为正常单卵双胎儿童之间基因表达的差异，寻找与ASD、PS相关基因,主要实验材料,XL1 BLUE细菌菌株 人类8-10周龄胎儿心脏cDNA文库 一岁，男性，其一患先天性心脏病房间隔缺损和肺动脉瓣狭窄另一为正常单卵双胎儿童之外周静脉血中白细胞,方 法,提取患儿与正常儿童白细胞 mRNA mRNA转化为cDNA 放射性物质标记cDNA作为差示筛选的探针 差示筛选患儿与正常儿童差异表达的cDNA片段 测定差示筛选所得cDNA片段序列 分析测序结果,技术路线,细 菌,胎儿心脏cDNA文库,ASD、PS儿童cDNA探针,正常儿童cDNA探针,差示筛选技术路线示意图,结 果,.,一患CHD另一为正常单卵双胎 差示筛选,患儿,正常儿,单卵双胎中正常儿童 表达高于患CHD儿童的EST,新EST 5条 已知基因 36条,单卵双胎中患CHD儿童 表达高于正常儿童的EST,新EST 7 已知基因 41,讨 论,.,选用差示筛选技术 筛选差异表达基因的原因,差示筛选(Differential Screening，DS)技术和其他类似技术相比： 所获差异片段较长 较为经济 缺点：假阳性高 （差异表达基因筛选技术的共有缺点） 所在实验室此技术应用非常成熟,白细胞基因表达变化部分反应心脏的生理或病理状态变化？,1.构成心肌细胞的结构基因在白细胞中表达 2.心肌肥厚的高表达基因与白细胞中高度表达的部分基因相同,较重要的与ASD、PS相关的 已知功能基因,与细胞分化相关基因 6 与细胞信号传递相关基因 13 参与蛋白表达基因 21 与细胞结构和运动相关基因 7 代谢相关基因 8 合计 55,clathrin light-chain A 基因,正常儿童表达高于患CHD儿童 此基因参与细胞结构和运动 已有文献报道其参与神经嵴的发育，推测可能与圆锥动脉干畸形发生相关,结 论,利用差示筛选技术，比较单卵双胎其一患CHD另一为正常儿童之间的基因表达差异，是一种有效寻找CHD相关基因的方法。 本实验发现了一些与先天性房间隔缺损、肺
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