课件：基因诊断与基因治疗.ppt

,利用现代分子生物学和分子遗传学的技术方法，直接检测基因结构及其表达水平是否异常，从而对疾病做出诊断的方法。,基因治疗,基因治疗是指将外源正常基因导入靶细胞，以纠正或补偿因基因缺陷和异常引起的疾病，以达到治疗目的。从广义说，基因治疗还可包括从DNA水平采取的治疗某些疾病的措施和新技术。,基因诊断的特点,基因诊断常用的技术方法,一,六,四,二,核酸分子杂交,DNA芯片,限制性内切核酸酶酶谱分析,聚合酶链反应,三,五,单链构多态性检(SSCP),DNA序列测定,Southern印迹杂交,Northern 印迹杂交法,提取RNA样本RNA变性琼脂糖凝胶电泳分离转移至膜探针（标记DNA或RNA）与之杂交显影或显色检测信号。 Northern法可用于检测组织细胞中总RNA或mRNA,PCR产物变性后， 经聚丙烯酰胺凝胶电泳， 正常基因和变异基因的迁移位置不同， 可分析确定致病基因的存在。,PCR/单链构象多态性分析（SSCP）,过程原理,基因治疗的策略,一、基因置换,二、基因添加,三、基因干预,四、自杀基因治疗,五、基因免疫治疗,体细胞基因治疗,基因治疗的两种方式,生殖细胞基因治疗,1只限于某一体细胞的基因的改变 2只限于某个体的当代,1对缺陷的生殖细胞进行矫正 2当代及子代,存在的一些问题,1对特定座位基因转移，目前还存在较大困难； 2随机插入可能引起后代的基因突变。,体细胞基因治疗,1）靶细胞的遗传修饰至今尚无实质性展； 2）基因转移效率不高，只能用显微注射法； 3）只适用于排卵周期短而次数多的动物，很难适用于人类。 （但目前辅助生殖技术的发展较为有效的解决了获取卵细胞的办法。一次可获取少者3-5个，多者十几个。）,生殖细胞基因治疗,基因治疗的基本程序,（一）治疗性基因的获得,在了解疾病发生的分子机制基础上， 选择对疾病有治疗作用的特定基因。 治疗性基因获得的方法很多： 用酶切或探针杂交法从基因组DNA文库获得，从cDNA文库获取，PCR扩增，人工合成等。,（二）基因载体的选择,基因治疗关键步骤之一，是将治疗基因高效转移 入患者体内、并能调控其适度表达。 常用的载体有两类：病毒载体和非病毒载体。 病毒载体：逆转录病毒载体， 腺病毒载体，腺相关病毒载体等； 非病毒载体：与病毒载体的主要区别在于：采用理化方法将治疗基因转移入患者体内。,（三）靶细胞的选择,基因治疗的受体细胞有生殖细胞和体细胞两大类。 对生殖细胞进行基因治疗，可使该生殖细胞分化发育成长的个体及其后代均具有正常基因，理论上讲是根治遗传病的理想方法。 但由于涉及安全性和伦理学问题，目前基因治疗中禁止使用生殖细胞作为靶细胞，只限于使用体细胞。,人类基因治疗中，将治疗基因导入靶细胞有两种 途径。 一种为直接体内疗法（in vivo）： 即，将治疗基因直接导入体内有关组织细胞； 另一种为间接体内疗法（ex vivo）： 即，在体外先将治疗基因导入培养的靶细胞内，再将已获得表达外源基因的遗传修饰细胞回输入病人体内，达到治疗目的。,治疗基因 导入受体细 胞的方法,化学方法 物理方法 膜融合法 病毒载体法 质粒DNA直接转移法,（四）基因转移方法,磷酸钙法 DEAE葡聚糖法,电穿孔法 粒子轰击法（基因枪法）,( 五 ) 转导细胞的选择鉴定,标记基因技术 基因缺陷型受体细胞技术 基因共转染技术 分子杂交技术 外源基因表达鉴定,( 六 ) 回输体内,将治疗性基因修饰的细胞以不同方式回输体内。,基因治疗的应用与展望,(一)基因治疗应满足的条件：,（二）基因治疗有待解决的问题,1、难以获得真正有治疗作用的基因。,2、外源基因的表达难以在体内精确调控。,3、体细胞经体外培养后，其生物学特性会有改变。,4、过多的外源蛋白对机体带来可能的影响。,5、随机整合潜在的威胁。,谢 谢 ！,后面内容直接删除就行 资料可以编辑修改使用 资料可以编辑修改使用,主要经营：网络软件设计、图文设计制作、发布广告等 公司秉着以优质的服务对待每一位客户，做到让客户满意！,致力于数据挖掘，合同简历、论文写作、PPT设计、计划书、策划案、学习课件、各类模板等方方面面，打造全网一站式需求,感谢您的观看和下载,The user can demonstrate on a projecto