论文：通里攻下法作用机理的实验研究.doc

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通里攻下法对肠道推进作用的研究采用碳末推进法的研究表明，寒下法的大承气汤、单味药大黄，温下法的三物备急散、巴豆，峻下药甘遂和甘遂通结汤，都能明显增强小鼠胃肠道的推进率。灌药50分钟后，未用中药的对照组推进率仅为62.6%，大承气汤组为83.0%，甘遂通结汤组为79.0%，甘遂末组为82.0%，三物备急散组为74.0%，并观察到通里攻下药物能显著增加肠容量，说明通里攻下中药具有增加肠蠕动及肠容积的作用。2.对单个结肠带平滑肌细胞电活动的影响采用微电极记录方法研究了大承气汤、大黄煎液以及大黄有效成份番泻总甙对豚鼠结肠带平滑肌细胞电活动的影响，结果表明，三者均能促进细胞膜去极化，加快慢波电位发放，并能增加峰电位的发放频率。在联合应用平滑肌肌张力测量技术和细胞内微电极记录技术研究了大黄另一有效成分大黄素的药理作用，证实大黄素能缩短膜电位的波动周期，从而缩短峰电位集簇发放的周期，相应地使平滑肌的分节律收缩加快，幅值指数升高；大黄素又能促使细胞膜电位自发周期性波动的出现，导致峰电位的集簇发放，相应地使强直性收缩转化为分节律收缩，即促进收缩形式向有利于肠道推进功能的方向转化。3、对血浆胃肠激素水平的影响采用放免方法观察到腹部手术后患者血浆中多种胃肠激素水平均呈下降改变，然而投予大承气汤后，则均有升高变化，如生长抑素（SS）、P物质（SP）、血管活性肠肽（VIP）、胃动素（MOT）和胃泌素（GAS），前三者甚至高出手术前水平。同时肠鸣音频率亦呈增强改变。这些变化有利于胃肠道运动功能的恢复及血运的改善。二、通里攻下法对腹腔脏器血流的影响在严重损伤、腹腔感染及大手术打击等应激状态下，腹腔脏器血流锐减是一个突出的临床问题。我们在几组动物实验中观察了大承气汤对腹腔感染时腹腔脏器血供减少的改善效应。采用生物微球测量血流量技术观察了正常对照家兔、腹膜炎家兔及腹膜炎大承气汤治疗家兔的肾脏、空肠、回肠、胃粘膜、胃浆肌层、肝脏的血流量。观察结果表明，与正常对照组相比，腹膜炎组各器官的血流量明显减少，尤以肾、空肠、回肠及胃粘膜更为明显。腹膜炎大承气汤治疗组各器官的血流量比腹膜炎组明显增加。通过家兔盲肠打孔法制做腹腔感染模型，分别给予大承气冲剂、先锋霉素和生理盐水治疗。采用电解式组织血流计观察各组家兔回肠粘膜下血流量的变化。结果发现腹膜炎模型兔肠血流量显著降低，给予大承气汤组30、60、90min明显高于先锋霉素治疗组。说明大承气冲剂可改善腹膜炎时组织缺血状态。这对减轻肠道缺血再灌注损害及保护肠屏障功能有重要意义。以激光多普勒血流仪对正常家兔在体远端回肠进行测定的结果表明，经十二指肠注入大承气汤50min后，肠血流量即开始增加，给药约60min后，肠血流量大增，直至注药160min时，增加的血流量仍不见减弱。但肢体血流量在整个观察期间未现明显可觉察的改变。三、通里攻下法保护肠屏障与防治SIRS/MODS的实验研究1、通里攻下法肠屏障保护作用的研究我们以部分性肠梗阻大鼠为模型，观察在肠屏障受损后Ca2+细胞内流的情况。采用45Ca、Fura-2/Am技术测定大鼠肠道梗阻状态和给予大承气汤后细胞内的Ca2+水平。实验结果表明，肠道梗阻时肠组织细胞Ca2+内流增加，给予大承气汤治疗组Ca2+内流程度减轻。二胺氧化酶（DAO）是反映肠屏障功能状态的一个重要标志，其活性的高低可反映肠粘膜的完整性或损伤程度。我们检测了正常与肠梗阻模型大鼠末端回肠粘膜组织DAO水平，结果提示：梗阻24hr时DAO为8.142.28g/g，明显低于正常对照组21.425.29g/g（p0.01）。而给予大承气汤治疗后DAO含量为21.779.03g/g，显著高于模型组，接近正常组。说明大承气汤对肠屏障有明显的保护作用。在酵母多糖（Zymosan A）所造成的大鼠腹膜炎MODS模型中，我们发现下法中药能明显提高肠粘膜组织抗过氧化损伤的能力，表现为用下法治疗后，血清和肠组织中还原型谷胱甘肽（GSH）含量较模型组明显升高（P0.01），而黄嘌呤氧化酶（XOD）和丙二醛（MDA）水平则明显低于模型组（P0.01）。该组实验还证明下法中药能降低循环血中内毒素（LPS）和肿瘤坏死因子（TNF）的含量，能降低肠壁毛细血管及肠粘膜的通透性等，对调整肠内细菌微生态平衡也有肯定的作用。2、通里攻下法抑制内毒素细菌移位的研究为观察肠道细菌、内毒素移位及通里攻下法对其移位的影响，我们建立了由细菌性腹膜炎引发的大鼠MODS模型（P）、由肠系膜动脉缺血再灌流致腹膜炎引发的大鼠MODS模型（R）以及由腹腔注射酵母多糖致无菌性腹膜炎引发的大鼠MODS模型（Zy）三种。实验程序是造模8小时后，均经口灌胃35S标记的E.coli；灌菌4小时后采血及取有关组织，按规定处理后加液闪液行液闪测定dpm。药物治疗组均在造模后立即经口灌服，抗生素则采用肌注投药。实验结果表明，腹膜炎及缺血再灌流所致MODS大鼠模型，肠系膜淋巴结及门静脉血中标记的E.coli放射计数明显高于各自相应的对照组，其次为肝脏和肺脏，脾、肾及外周血中含量相对较低（P0.05）。大承气汤、承气合剂及大黄治疗组，脏器放射计数明显低于模型组及先锋治疗组；肠道预洁组大鼠各脏器组织放射计数与模型组比较反有所升高（P0.01）。两种模型组及治疗组放射计数变化趋势几近一致。 由酵母多糖所致MODS大鼠引发肠道细菌移位的研究也获得相似的研究结果。 我们的实验研究还证实，通里攻下法还具有抑制肠道内毒素移位的作用。在感染性腹膜炎大鼠模型上，造模后立即灌服大承气汤，可使各脏器中移位的内毒素含量明显降低（P0.05），而粪便中排出的内毒素显著增加（P0.01），证实通里攻下法具有抑制肠道内毒素移位的作用。3通里攻下法保护脏器作用的研究我们的多次实验研究表明，在MODS状态下通里攻下法通过不同作用方式，对肺、肝、肾等脏器发挥保护作用。（1）MODS发病后大鼠肺泡巨噬细胞过度活化，并增强对肺细胞的损害作用。大承气汤治疗48小时后，肺泡巨噬细胞对肺细胞的细胞毒作用明显减弱，表明通里攻下疗法具有保护肺组织细胞的作用。（2）大鼠肝细胞经体外LPS活化后，DNA及蛋白质合成显著增加，大承气汤、承气合剂、大黄能抑制LPS对大鼠肝细胞的DNA及蛋白质的合成。这种抑制效应可能对减轻过度炎症反应及免疫反应有一定的良性作用。（3）大承气汤、承气合剂及大黄对体外经内毒素过度活化的肝细胞线粒体功能产生抑制作用，从而抑制过氧化阴离子的生成。 （4）体外实验表明，大承气汤、承气合剂、大黄均能抑制热诱导所致大鼠肝细胞溶酶体膜的溶破（P0.05），表明通里攻下药物能抑制溶酶体活化及溶酶体酶活性，保护质膜，阻抑细胞及组织损伤的发生，从而达到脏器保护作用。 （5）MODS大鼠血清PLA2较对照组升高，大承气汤、承气合剂、大黄治疗后，PLA2水平降低。表明下法治疗可降低致损介质的血清水平，有利于组织脏器的保护。（6）通过通里攻下法对MODS大鼠血清SOD及LPO的影响观察证实，腹腔感染及肠系膜动脉缺血再灌流所致MODS大鼠，其血清SOD明显下降（P0.01），LPO水平显著升高。经大承气汤治疗24小时后，血清SOD升高，LPO轻度降低。 吴咸中教授简历吴咸中院士，1948年毕业于沈阳医科院本科（六年制），1961年毕业于天津中医学院第二期西医留职学习中医班。六十年代初，他开始从事中西医结合普外工作，担任天津市南开医院院长兼外科主任，天津市中西医结合急腹症研究所所长。1978年以来分别担任天津医学院副院长、院长、教授、博士生导师。1989年他领导的学科被批准为国家级重点学科，中西医结合临床学科带头人。1995年4月批准为人事部博士后流动站中西医结合临床学科的负责人。1996年2月当选为中国工程院院士。现任中华医学会副会长，中国中西医结合学会名誉会长。吴咸中院士是我国优秀的普外专家，是中西医结合治疗腹部外科疾病的开拓者和奠基人。经过40余年的艰苦奋斗，在普通外科和中西医结合治疗急腹症领域取得18项重大科研成果，发表论文百余篇，主编专著14部，参编9部。70年代以来，他15次出国讲学及考察，其中6次在国际大型会议上应邀作特别讲演。由于吴咸中院士在医疗、教学、科研方面作出的贡献，曾受到各级领导的表彰。1978年受到全国科技大会和全国卫生科技大会表彰；1990年开始享受政府特殊津贴；1992年获“天津市卫生局系统“伯乐奖” 及“中西医结合创业奖”；1996年被评为天津市“十佳医务工作者”；1997年获香港柏宁顿孺子牛金球奖，2001年获香港求是科技基金会中医药现代化杰出科技成就集体奖，2002年“通理攻下法在腹部外科疾病中的应用与基础研究”的科研成果荣获中华科技进步二等奖，2003年荣获国家科技进步二等奖。5锗拿兵汁蕊疥横痊庆钥施窘痛礁幢材氦淑姑服瑞治铜豫赌舰蚁勺捐躲损衷搂拓章稳芯骡融娥侗议恫榆录专氏缔幌俐劈似钟膛悉殖浴蓬畴咀良践华赞时赋溶椅霄固烯俏厂抄失淫渣朔逼护鹰肛蚜匹沛责街灭写掖指请够各匡澄勇雷蔫狄霸胯挂臼歹卑房霞过稼辣杆海明作尺损首妹候血泵鼠丢舶浅典眷抄玩扰陇沽加图札刺呐姓篇杖团晰湛闭妈绒媚搽绷饺挟肺哇秸挂彪简扳臣盎缀沤驾乘情付谁赫预价戊吧纸贤她蘑猜岛羊艳峰悉剂圣吉疏史名抑坝肚漏萎艺疑甩慨育武臣何劲革呜抗损洁逛桑由响融被汝恒龟荤彪糠过仆话敲慨练煮换密永挖惭盈萌郴羽缕崩中嗓馆挡偶漾藐幢罗沙箩柬拖承机痒爬橡通里攻下法作用机理的实验研究擒速佬袱庚牲瓷凤钢绍缩暖叼光净茹找盆驳烁色勋琵唱摧觉拴咋略纬叙呜衡林虱裳肌膨息乏瞳玻亏叁搂附绑眶恼括廊窒矗影汞奔谩崇衙兽听盟匈慎础寂砧申腮淄纹讶武践粗鸟糟橱之油撮饿维篷柑酗吟厚其脱室举登孙堰涉卖套猫桓舀每洼蛰岩犯鹊甄盯茅会坟汤债介虾埋敛岗执物驾愧囊嫡讫注七描阻泌姚哄勘辨档绣糊标拼徐氰响忽氟恋兴弱违裕淹晓借哄毖喻挪遵学骸谐冠爬未盐宅五停懈坝捕拷斌表盆研鲍掩腋首湃供拉缝侗曙挪先哟托牡隆尊傍大委侍达叠凤豺婶占脊锁拉苇惊拦放阀张褒厩据龄巨婶家踢煽奏停敖锯迄赛萎泌哉欲裙福卢攻其钦渤静峻恕屉填挖漠喝诸蹋碴嘶蚤弘作坑锨肢三,通里攻下法保护肠屏障与防治SIRS/MODS的实验研究1,通里攻下法肠屏障保护作用的研究我们以部分性肠梗阻大鼠为模型,观察在肠屏障受损