职业院校技能大赛--g-38“微生物技术及应用”赛项规程高职组.doc

2016年福建省职业院校技能大赛“微生物技术及应用”赛项规程 一、赛项名称赛项编号：G-38赛项名称：微生物技术及应用赛项组别：高职组赛项归属大类：生化与药品二、竞赛目的通过竞赛活动，激发学生学习兴趣，提升学生技能水平和职业素养，培养学生的团队意识与合作能力，促进教学改革。同时通过校企合作办赛事，促进校企深度融合，提升项目的职业内涵。三、竞赛内容本次竞赛由二部分组成：基础技能操作和应用技能操作。基础技能操作占总成绩70%，主要考查选手基础技能的熟练程度和规范程度；应用技能操作占总成绩30%，主要考查选手的综合技能。内容如下：项目名称时间(min)内容分值（分）合计成绩（分）基础技能操作15细菌革兰氏染色2510020液体培养基的制备2510细菌分离培养技术20应用技能操作20水样标本细菌菌落总数测定30四、竞赛方式竞赛方式为团体赛。每所院校可选派一支参赛队，每队2名选手，每名选手可指定1名指导老师。每位选手通过现场随机抽签的方式决定比赛时段及项目顺序，评分为细菌革兰氏染色（25%）、液体培养基的制备（25%）、细菌分离培养技术（20%）和水样标本细菌菌落总数测定（30%）总和，团体得分由各队参赛选手成绩总和而得。五、竞赛流程日期时间内容第一天8:30-11:30各参赛院校报到12:00-13:00午餐15:00-15:30选手抽签（确定抽签顺序）15:30-16:00集体照相16:00-17:30选手熟悉赛场16:00-17:00领队、指导老师会议17:30-18:00检查、封闭赛场17:30-19:00晚餐第二天6:30-7:00早餐7:30-7:50选手检录7:50-8:10选手抽签（确定比赛顺序）8:10-12:00微生物技术及应用竞赛11:00-13:00午餐13:00-18:00微生物技术及应用竞赛18:00-18:30成绩评定、汇总18:30-19:30竞赛点评19:00-20:00晚餐第三天上午各代表队返程六、竞赛试题本次技能操作竞赛题为公开试题，已在本赛项规程中公开。七、竞赛规则（一）参赛资格：必须为福建省2016年普通高等职业院校微生物技术及应用相关专业注册在籍的全日制高职高专学生，年龄限制在25周岁以下（1991年6月30日之后出生），不分性别、年级。指导教师资格：必须为该校现任专职教师。资格审查由各校自行负责，大赛组委会办公室抽审。（二）参赛准则：1参赛选手必须穿大赛组委会统一提供的白大褂，并佩戴参赛序号牌（现场抽签决定），选手不得在参赛服饰上作任何标识，一经查实取消本次竞赛成绩。 2赛前1日，各领队组织选手参观熟悉竞赛场地和设备。大赛用物由承办单位提供，不得使用自带参赛物品。3比赛当日选手必须按竞赛时间，提前30分钟到检录处检录并在工作人员的引导下进入候赛室，迟到l0分钟者取消参赛资格。选手凭参赛证、学生证、身份证进入候赛室。工作人员负责对选手的身份进行核查。参赛选手不允许携带任何书籍和其他纸质资料，不允许携带通讯工具和存储设备。4参赛选手在候赛室随机抽签决定比赛顺序后，由竞赛现场工作人员组织引导选手到指定的竞赛场地进行竞赛准备工作。5参赛选手在规定时间内独自完成各竞赛项目。选手在竞赛过程中，无论遇到任何问题，需举手向裁判员示意。选手之间互相询问按作弊处理。竞赛过程中如出现仪器设备故障问题，应提请竞赛裁判长到赛场确认原因。如果确实是因为设备故障原因导致选手中断或终止竞赛，由竞赛裁判长视具体情况做出决定。6选手在竞赛过程中不得擅自离开赛场，如有特殊情况，需经裁判员同意后作特殊处理。7在竞赛规定时间结束时各参赛选手应立即停止操作，不得以任何理由拖延竞赛时间。参赛选手欲提前结束比赛，应向现场裁判员举手示意并记录比赛终止时间，比赛终止后，不得再进行任何与比赛有关的操作。竞赛结束后，经裁判员许可后，参赛选手方可离开赛场。八、竞赛环境赛场设在福建生物工程职业技术学院实验实训中心，设有检录处、候赛室、物品准备室、处置室、赛室、休息室、计分室、申诉仲裁室，另有紧急疏散通道、医疗服务站等。九、技术规范微生物技术及应用竞赛项目操作规范（）细菌革兰氏染色参赛选手在规定的15min内，对待测菌种（菌种范围：大肠埃希氏菌、金黄色葡萄球菌、苏云金芽孢杆菌、短小芽孢杆菌、阴沟肠杆菌）进行简单染色，要求各步骤正确，正确使用油镜观察染色结果并判断。具体操作规范详见下表。项目考核内容操作标准制片滴加无菌生理盐水涂片：取一洁净的载玻片，滴一小滴生理盐水于载玻片中央，按无菌操作要求（注：单手持无菌培养皿，打开皿盖约45角，另一手持接种环，在酒精灯8-10cm范围内进行操作），用接种环挑取少量细菌于玻片中央水滴中，均匀涂布，形成直径约为1-1.5cm的菌膜，要求涂片薄而均匀。（注：涂片是否均匀将在镜检中进行判定）接种环的使用：按无菌操作要求，正确对接种环进行灭菌，并取菌、制作涂片。干燥：为在规定时间内完成操作，可以利用酒精灯火焰温度干燥涂片，注意不能太靠近火焰（应在酒精灯火焰上方约半尺处），在固定之前要保证菌种细胞活性。接种环的使用涂片、干燥固定固定：涂片干燥后，以钟摆速度将玻片（菌膜面朝上）通过酒精灯火焰3次，进行固定。革兰氏染色初染初染：用结晶紫染液覆盖涂菌部位，染色10s，水洗至流出水无色（使用塑料吸管，下同）。媒染：用卢戈氏碘液覆盖涂菌部位10s，水洗至流出水无色。 脱色：用95%乙醇脱色（持续10-20s），稍后立即洗去乙醇。 复染：用沙黄染液染色10s，水洗至流出水无色。媒染脱色复染干 燥干燥：为在规定时间内完成操作，可以利用吸水纸吸去玻片上残余水珠，进行干燥。镜检 显微镜的使用载玻片安置：移开镜套，插上电源，打开显微镜，将载玻片放置于载物台上并用标本夹夹住。调节光源：调节光源、光圈到适当的照明强度。低倍镜观察：移动推进器使观察对象处于物镜的最下方，转动粗准焦螺旋，在视野中寻找物像，再略微转动细准焦螺旋，使看到的物像更加清晰。油镜观察：在低倍镜下找到合适的观察目标并将其移至视野中心，通过转换器将低倍镜转离工作位置，在待观察的目标区域滴上一滴香柏油，将油镜转到工作位置，油镜镜头此时应正好浸泡在镜油中。调节光圈使视野的亮度合适，微调细准焦螺旋使物象清晰。染色结果判断染色结果判定：在实验结果记录表上完成对染色细胞形状（球状或杆状）和颜色（紫色或红色）的描述，并判断细菌属于革兰氏阳性球（杆）菌或革兰氏阴性球（杆）菌。显微镜清洁和归位镜检完毕处理：缓慢下降载物台至最低位置，调节光源到最暗，关闭电源开关。取下载玻片。 清洁显微镜：先用擦镜纸擦去油镜镜头上的香柏油，再用沾有少许二甲苯的擦镜纸擦掉残留的香柏油，最后再用干净的擦镜纸抹去残留的二甲苯（注：需要按同一个方向擦洗镜头）。清洁后，将物镜转成八字形，同时降下聚光镜，将推进器归位，拔下电源，罩上镜套。文明操作实验后台面整理操作结束，将载玻片放入消毒液中，用酒精灯盖子熄灭酒精灯（注：酒精灯应在制片结束后立即熄灭），清理桌面上的实验废弃物。 在操作过程中，无不当操作。器皿破损实验操作过程规范选手编号： 细菌革兰氏染色显微镜观察结果记录形态描述：细菌细胞颜色：结果判断：附：微生物技术及应用竞赛项目评分细则（）细菌革兰氏染色 操作时间：15min项目考核内容分值评分标准及要点制片滴加无菌生理盐水1分生理盐水滴加在载玻片中间，0.5分生理盐水无过多、无漏出，0.5分接种环的使用3.5分接种环彻底灼烧，0.5分接种环冷却后再取菌，0.5分在酒精灯无菌区域范围内操作，0.5分按无菌操作要求单手打开培养皿，1分取单菌落时培养基无划破，0.5分涂片后灼烧接种环，放回原处，0.5分涂片、干燥1分涂片区域均匀合理，0.5分干燥时，载玻片与火焰的距离适中，0.5分固定1分在酒精灯外焰以钟摆速度通过3次，1分革兰氏染色初染0.5分结晶紫染液，无漏液，10S，水洗媒染0.5分卢戈碘液，无漏液，10S，水洗脱色0.5分95%乙醇，无漏液，10-20S，水洗复染0.5分沙黄染液，无漏液，10S，水洗干 燥0.5分正确干燥，0.5分镜检显微镜的使用3.5分正确放置载玻片,先使用低倍镜寻找视野，0.5分滴加镜油至镜检位置，并用油镜观察0.5分调亮视野至适合观察的亮度，1分油镜观察时，使用细准焦旋钮，0.5分物像清晰，1分染色结果判断7.5分染色结果正确，5分实验记录规范，0.5分涂片均匀，细胞无过密或过疏，1分无其它杂菌和杂质，0.5分视野亮适合观察，0.5分显微镜清洁和归位3分镜检结束，正确步骤清洁油镜镜头，1.5分显微镜正确归位，1分操作结束，将载玻片放入消毒液中0.5分文明操作实验后台面整理2分台面整理，正确清理实验废弃物，并注意环保（按照实验室生物安全手册（第三版）、实验室生物安全通用要求（GB 19489-2008）的规范要求处理实验废弃物）0.5分器皿破损未破损，0.5分实验操作过程规范在操作过程中，无不当操作，1分完成 时间共用 时间竞赛时间结束时各参赛选手应立即停止操作，不得以任何理由拖延竞赛时间。合计25分各项操作应当规范、到位方可得分，凡操作错误一律不得分，如不熟练可酌情给分。微生物技术及应用竞赛项目操作规范（）液体培养基的制备参赛选手在规定的20min内，配备一定体积（200500ml，由裁判组于比赛当天确定）液体培养基（培养基范围：LB培养基和YPD培养基，竞赛现场将提供配方），均分于250ml的三角瓶中，并用全自动高压蒸汽灭菌锅完成灭菌准备操作。LB培养基配方：Tryptone(胰蛋白胨)：1%， Yeast Extract(酵母提取物)：0.5%, NaCl(氯化钠)：1% ，pH=7.0。YPD培养基配方：Tryptone(胰蛋白胨)：2%，Yeast Extract(酵母提取物)： 1%， Dextrose（葡萄糖) ：2%， pH=5.4。具体操作规范详见下表。项目考核内容操作规范称量计算根据所提供的培养基配方计算各组分应称量的量，并记录。天平的准备调节电子天平水平泡至中间位置，并四脚稳固。称量前应先将电子天平调零。称量操作称量纸的边角应对折防止培养基撒出。称取不同的培养基成分应使用不同的药匙，不同的称量纸，防止交叉污染。称量过程应减少药品浪费,多余药品放入废液缸中。药品称量完成后应盖好瓶盖并放回原位，标签朝外。天平使用后应关机、清扫天平盘。溶化培养基溶化将培养基各种成分按配方称量好后，及时放入烧杯中，防止部分培养基受潮粘在称量纸上。用量筒量取适当体积的蒸馏水，加入到烧杯中。培养基在溶解过程中需不断搅拌，溶解至培养基澄清无沉淀，表明培养基溶解彻底。调酸碱度pH的测定用玻璃棒蘸取少量培养基，在试纸一端点一下即可，根据酸碱度利用1mol/L NaOH和1mol/L HCl进行调节pH。调pH值时，边滴加试剂边搅拌，并随时用pH试纸测量,避免pH回调。分装和包扎分装将培养基平均分装入25个三角瓶中，分装过程中注意操作防止培养基洒出。本实验提供250ml的三角瓶用于分装培养基，一般装液量不超过三角瓶装量1/2即可。分装时应避免培养基粘附瓶口，以免引起污染。包扎分装完成后包好封口膜后，外面包牛皮纸一层或旧报纸二层，用绳正确捆扎，不打死结。包扎完成后可将标注培养基名称、制备日期及制备人编号的标签纸贴上，并贴上灭菌指示带。灭菌灭菌锅的操作接通电源，打开开关，向锅内加入适量的水，保证水位达到标准。加水选择去离子水或蒸馏水，防止水垢产生，使锅体不容易被腐蚀。在网框中放入培养基，将网框提入灭菌锅内，检查密封圈并加盖，采用对角式均匀拧紧锅盖上的螺栓，使螺栓松紧一致，勿使漏气。根据培养基灭菌要求设置灭菌温度及时间。检查上排气阀应处于开启状态，下排气阀和安全阀应处于关闭状态，准备灭菌。因时间限制，本实验将这一步作为实验完成标志。文明操作实验后整理实验过程应及时清理废弃物、各药品归位以及实验台的整理等。器皿破损器皿破损主要指操作过程出现的烧杯、三角瓶等器皿的损坏情况。在实验操作过程中，无不当操作。实验操作过程规范选手编号： 液体培养基制备计算结果记录（1）培养基配方应称取量Tryptone(胰蛋白胨)2%Yeast Extract(酵母提取物)： 1%Dextrose（葡萄糖)2%蒸馏水瓶数pH=5.4灭菌温度：灭菌时间：选手编号： 液体培养基制备计算结果记录（2）培养基配方应称取量Tryptone(胰蛋白胨)1%Yeast Extract(酵母提取物)0.5%NaCl(氯化钠)1%蒸馏水瓶数pH=7.灭菌温度：灭菌时间：附：微生物技术及应用竞赛项目评分细则（）液体培养基的制备操作时间： 20min项目考核内容分值评分标准及要点计算培养基组分的计算1分根据所提供的培养基配方正确计算各组分应称量的量，并记录。称量天平的准备1分水平，四脚稳固，0.5分调零，0.5分称量操作2.5分正确使用称量纸，0.5分正确使用药匙，药品未洒出，0.5分多余药品处理及药品归位并盖好瓶盖，1分复原天平、清扫天平盘，0.5分溶化培养基溶化4分将各培养基成分按配方称量好准确放入烧杯中溶解，无撒出，培养基未粘附在称量纸上，2分正确使用量筒, 0.5分培养基搅拌溶化，溶解彻底，溶液澄清无沉淀，1.5分调酸碱度pH的测定3分正确使用pH试纸将培养基的pH调整到规定值，3分分装和包扎分装2.5分培养基均匀分装于三角瓶中 0.5分分装过程无培养基洒出，培养基未粘附瓶口，1分三角瓶装液量不超过容量的1/2，1分包扎2分封好瓶口，并用绳子正确捆扎，1分标注培养基名称、制备日期及制备人编号，并贴上灭菌指示带，1分灭菌灭菌锅的使用5分接入电源，打开开关，检查灭菌锅内蒸馏水量是否充足；不足时用蒸馏水补充，1.5分放入培养基，检查密封圈，正确盖严锅盖，1分正确设置灭菌温度及时间，1分检查上排气阀应处于开启状态，下排气阀和安全阀应处于关闭状态，准备灭菌，1.5分文明操作实验后台面整理4分台面整理整洁（应在包扎流程结束后） 1.5分器皿破损器皿未破损，0.5分操作过程规范在实验操作过程中，无不当操作，2分完成时间共用 时间竞赛时间结束时各参赛选手应立即停止操作，不得以任何理由拖延竞赛时间。合计25分各项操作应当规范、到位方可得分，凡操作错误一律不得分，如不熟练可酌情给分。微生物技术及应用竞赛项目操作规范（）细菌分离培养技术（平板分区划线法、斜面接种法）参赛选手在规定的10min内，完成对细菌的平板分区划线以及斜面接种，其中分区划线要求分为四个区，斜面接种为菌种保存操作法而非生化试验鉴定操作法。为了便于观察评判，每个选手分别划线2个平板和接种2个斜面。由于比赛时间受限，无法培养得到单个菌落，故当培养皿和待接种管放置培养箱培养，同时正确口述培养时间和温度，即操作结束。具体操作规范详见下表。项目考核内容操作标准准备正确准备准备：戴上手套、口罩，正确在平板和待接种管做编号（菌种、参赛号、日期） 无菌无菌操作无菌：左手持培养皿，以中指、无名指和小指托住皿底，食指与拇指扣住皿盖，食指为支点，拇指向上打开皿盖（以下开盖均统一操作），开盖不超过45角，右手持接种环，在酒精灯8-10cm范围内进行无菌操作。接种环使用灭菌、冷却、取菌灭菌：点燃酒精灯，右手以持笔式握持接种环柄，将接种环彻底灭菌。镍铬丝部分（环和丝）必须烧红，以达到灭菌目的，然后斜放金属头即接镍铬丝的螺口部分旋转灼烧片刻以彻底灭菌，再将除手柄部分的金属杆旋转往返灼烧2-3遍；冷却：灼烧后的接种环需冷却，可触及琼脂表面无菌处或平皿盖处冷却（注：为评分标准的统一化，冷却操作动作需明显，不可在空气中冷却，防止引歧义，以下提到冷却均统一操作）；取菌：冷却后的接种环挑取单个标本菌落，且培养基无划破。分区划线第一区第一区：将标本密集划线于平板边缘，约占平板的1/5，同时确保培养基无被划破，对接种环进行彻底的灼烧灭菌；第二、三、四区第二区：调整培养皿至适合操作的位置，灼烧后的接种环冷却（注：同上），将接种环通过第一区1次，进行连续不重叠Z字形划线，均匀流畅，培养基无划破，对接种环进行彻底的灼烧灭菌；第三区：调整培养皿至适合操作的位置，灼烧后的接种环冷却（注：同上），将接种环通过第二区1次，进行连续不重叠Z字形划线，均匀流畅，培养基无划破，对接种环进行彻底的灼烧灭菌；第四区：调整培养皿至适合操作的位置，灼烧后的接种环冷却（注：同上），将接种环通过第三区1次，进行连续不重叠Z字形划线，均匀流畅，不与第一区交叉，培养基无划破，对接种环进行彻底的灼烧灭菌，放置试管架上，培养皿需倒置。斜面接种手持试管及接种环左手正确握持菌种管与待接种管，菌种管在后，待接种管在前，斜面向上管口对齐。右手持接种环进行灼烧灭菌（同上）。接种用右手的小指和手掌及无名指和小指分别夹住试管塞，并拔出，将试管口缓缓过火灭菌。将灼烧灭菌的接种环伸入菌种管内，接触无菌落生长的培养基或下1/2试管壁冷却，待冷却后再从斜面上挑取少许菌苔，在火焰旁迅速伸入接种管，在斜面底部自下而上划一条线，再从底部向上做Z形密集划线，划满斜面。接种完毕，取出接种环，灼烧试管口，管塞迅速过火，并在火焰旁将管塞塞入管口，再重新仔细灼烧接种环后，放回原处，并塞紧管塞。培养倒置培养皿操作结束，将待接种管和倒置的平板置于35-37培养箱进行18-24h的培养。文明操作实验台面清理操作过程未造成培养基、桌面、身体衣物及环境污染，熄灭酒精灯，清理桌面上的实验废弃物。在实验操作过程中，无不当操作。实验操作规范附：微生物技术及应用竞赛项目评分细则（）细菌分离培养技术（平板分区划线法、斜面接种法）操作时间：10min项目考核内容分值评分标准及要点准备正确准备1.5分戴上橡胶手套、口罩，正确于琼脂平板和待接种管做好编号，1.5分无菌无菌操作3分整个操作过程均于酒精灯无菌区内完成，1.5分；正确规范无菌操作，1.5分。接种环使用 灭菌、冷却、取菌1.5分正确手持接种环、灭菌及冷却,1分接种环冷却后挑取少量菌体, 菌体培养皿需倒置，0.5分分区划线第一区1分一手打开无菌培养皿，0.5分；另一手持接种环将菌体沿培养基边缘Z字形密集划线，约占培养基面积1/5，0.5分第二、三、四区4分调整培养皿，完成四区划线,0.5分区与区之间需连线1次，接种环需灼烧灭菌冷却再连续Z字形划线， 2分分区合理，充分利用培养基，线条密而不重叠，均匀流畅，未划破琼脂，第四区划线未与第一区交叉，1分结束时，接种环灼烧灭菌放回原处，培养皿倒置，0.5分斜面接种手持试管及接种环1分正确手持菌种管、待接种管以及接种环，并正确灼烧灭菌，1分接种6分用持接种环之手的无名指、小指和手掌边取下菌种管和待接试管的管塞，让试管口通过火焰灭菌，管塞应始终夹在手中不可掉落，2分将灼烧后的接种环伸入菌种管，正确冷却，0.5分取少量菌体，将接种环移出菌种管，不可使接种环的部分碰到管壁，0.5分接种环快速伸入接种管，在斜面底部自下而上划一条线，再从底部向上做Z形密集划线，1分；切勿划破培养基，1分接种完毕，取出接种环，灼烧试管口及管塞，并在火焰旁将管塞旋上，0.5分再重新仔细灼烧接种环后，放回原处，并塞紧管塞，0.5分培养倒置培养皿0.5分操作结束，将待接种管和倒置的平板放入35-37培养箱培养18-24h，0.5分文明操作实验台面整理1.5分操作过程未造成培养基、桌面、身体衣物及环境污染，熄灭酒精灯，清理桌面上的实验废弃物，0.5分操作过程规范在实验操作过程中，无不当操作，1分完成时间共用 时间竞赛时间结束时各参赛选手应立即停止操作，不得以任何理由拖延竞赛时间。合计20分各项操作应当规范、到位方可得分，凡操作错误一律不得分，如不熟练可酌情给分。微生物技术及应用竞赛项目操作规范（）水样中细菌菌落总数的测定参赛选手在规定的20min内，在无菌室超净工作台内，完成水样的1:10稀释，选择原液、1:10两个稀释度进行加样、制备平板、培养。同时应做空白对照。具体操作规范详见下表。 项目 考核内容操作标准菌 落 总 数 的 测 定无菌室的进出关闭紫外灯，更换拖鞋，进入无菌室缓冲间，消毒双手，更换无菌服(正确穿着无菌服，实验服放入衣柜中)，戴上口罩、手套；更换洁净鞋，进入无菌室操作间。正确启动超净工作台，取酒精棉消毒，点燃酒精灯，开始操作。操作结束后，熄灭酒精灯，正确关闭超净工作台，将培养皿放入传递窗，进入无菌室缓冲间，更换实验服，叠好无菌服置于回收桶内，取出培养皿，离开无菌室缓冲间，打开紫外灯，离开无菌室。（考虑比赛时间及相关人员安全，关闭及打开紫外灯的操作可省略）编号用油性标记笔在所需的试管和培养皿上做好标记，以便区分。稀释加样、对照用10ml的无菌移液管吸取9ml无菌生理盐水到无菌试管中，用1ml无菌移液管吸取1ml水样，沿管壁缓慢注于盛有9ml无菌生理盐水的无菌试管中（注意移液管尖端不要触及稀释液面），在涡旋振荡器上使其混合均匀，制成1:10的样品匀液。选择原液和1:10这两个稀释度的样品匀液进行检测。吸取1ml样品匀液于无菌培养皿内，每个稀释度做两个培养皿，同时，吸取1ml空白稀释液加入到两个无菌培养皿内作空白对照。合理使用无菌移液管，注意无菌，避免重复浪费。制备平板及时将1520ml冷却至46的营养琼脂（事先置于46水浴锅，用时按铃通知室外人员通过传递窗传递）倾注到培养皿，并及时转动培养基使其混合均匀，以免培养基开始凝固后再混匀达不到效果。混匀时注意力度，勿使培养基污染皿盖或溢出。无菌操作过程注意无菌，瓶塞必须持于手中。培养培养基未凝固时，培养皿应轻拿轻放，水平静置，待其凝固后方可倒置。倒置培养皿后，将培养皿置于恒温培养箱中，培养温度为35-37，培养时间为48h2h。（口述培养温度、时间）文明操作实验台面整理等待培养基凝固的同时，利用等待的时间，整理实验台面。将废弃物扔至密闭废弃桶内，已使用的移液管置于回收筒内。用酒精棉球擦拭污染的桌面（培养基若未溢出，可免擦拭）。在实验操作过程中，无不当操作。实验操作过程规范备注：由于比赛时间有限，水样只稀释到1:10，选择原液、1:10两个稀释度进行接种培养。省略菌落计数及结果报告。参考GB/T 5750.122006 生活饮用水标准检验方法（微生物指标）、2010版中国药典 微生物限度检查法本实验在超净工作台内完成。本实验使用电动助吸器（型号：BIOHIT Midi Plus），以便选手独立完成实验。附：微生物技术及应用竞赛项目评分细则（）水样中细菌菌落总数的测定 操作时间：20min项目考核内容分值评分标准及要点菌 落 总 数 的 测 定无菌室的进出4分正确更换无菌服、口罩、手套、拖鞋、洁净鞋，2分正确使用超净工作台，1分正确消毒 1分2分正确更换实验服，叠好无菌服置于回收桶内，1分正确取出培养皿，离开无菌室，1分编号1分在所需的无菌试管、无菌平皿上都编号且正确，1分稀释、加样、空白对照13.5分使用无菌移液管时，要求无菌操作，保证移液管未受污染，移液的过程中，移液管尖端未触及其他物体表面，1分调整无菌移液管，移液管刻度可见，0.5分取液前，水样外包装消毒及混匀，1分取液时，锥形瓶瓶口、瓶塞有过火焰灭菌，0.5分移液的过程中，瓶口、瓶塞有过火焰灭菌，移液管无倒吸、无滴漏，1分放液时，移液管外壁未碰到试管口，若碰到则应过火焰灭菌，1分放液后，试管口、试管塞有过火焰灭菌，0.5分将试管置于涡旋振荡器上混匀，1分每个稀释度要做两个平皿，接种无漏缺，1分制备不同稀释度的样品匀液，移液管未混用，2分加样时，样品匀液未溅到皿盖或溢出，1分各吸取1ml空白稀释液加入到两个无菌培养皿内作空白对照，1分合理使用无菌移液管，注意无菌，2分制备平板5.5分正确取培养基，注意消毒，0.5分一手持培养皿，两指正确开合皿盖，一手持培养基瓶，2分加入培养基约1520ml， 1分倒培养基时，培养基瓶瓶口、瓶塞有过火焰灭菌，0.5分培养基瓶瓶口未接触平皿，培养基未溢出、滴漏 0.5分及时混匀，皿内的培养基未溅到皿壁、皿盖，未溢出，1分无菌1分操作过程注意无菌，瓶塞必须持于手中。培养1分培养基完全凝固，0.5分于35-37恒温培养箱内倒置培养皿，培养48h2h，0.5分文明操作实验整理2分整理整齐（包括实验台面及无菌服），器皿未破损，1分实验操作过程规范在实验操作过程中，无不当操作，1分完成时间共用 时间竞赛时间结束时各参赛选手应立即停止操作，不得以任何理由拖延竞赛时间。合计30分各项操作应当规范、到位方可得分，凡操作错误一律不得分，如不熟练可酌情给分。十、技术平台项目操作配备设施备注液体培养基的制备胰蛋白胨、酵母提取物、葡萄糖、NaCl、1mol/L NaOH、1mol/L HCl、蒸馏水、20cm药匙、250ml三角烧瓶、500ml烧杯、100ml量筒、500ml量筒、玻璃棒、封口膜、牛皮纸、线绳、pH试纸、YP2001N型电子天平、LDZX-50FB立式压力蒸汽灭菌器、灭菌指示带、培养基溶化加热设备为加热套（天津泰斯特98-1-B）细菌分离培养技术待分离菌种、接种环、酒精灯、标记笔、9cm无菌营养琼脂平皿（广东环凯微生物科技有限公司）、18*150试管装的斜面固体培养基、HPX-9272MBE培养箱，细菌革兰氏染色待测菌种（待测菌种由评委会于比赛前随机抽取，菌种范围包括：大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、苏云金芽孢杆菌、短小芽孢杆菌、阴沟肠杆菌）、载玻片、无菌生理盐水、酒精灯、接种环、Baso贝索快速革兰氏染液、数码互动显微镜（BK3300）、香柏油、二甲苯水样中细菌菌落总数的测定BIOHIT Midi Plus电动助吸器、9cm无菌平皿、1ml无菌移液管、10ml无菌移液管、18*180无菌试管、待检水样、无菌生理盐水、QT-1漩涡震荡器、已配制好未凝固的营养琼脂（广东环凯微生物科技有限公司）、佳滤超净工作台、HH-6水浴锅、HPX-9162MBE培养箱、酒精灯、标记笔十一、成绩评定竞赛评分严格按照公平、公正、公开的原则，由裁判员在竞赛现场针对具体操作表现进行评判、打分、复核。参赛选手总成绩由各单项成绩相加求得，各参赛队团体成绩由各队参赛选手成绩总和而得。团体竞赛名次依据各队参赛选手成绩总和由高到低排列，比赛成绩相同时，比赛总用时少的名次在前；比赛成绩和比赛总用时相同，名次并列。十二、赛项安全1赛点执委会制定安保须知、安全隐患规避方法及突发事件预案，设立紧急疏散路线及通道等，确保比赛期间所有进入赛点车辆、人员需凭证入内；严禁携带易燃易爆等危险品及比赛严令禁止的物品进入场地；场地设备设施均可安全使用。2参赛选手在参赛过程中，必须服从场内裁判及工作人员的指挥，严格按照制作规程进行操作，正确使用器具及设备。如出现意外，立即向工作人员汇报并配合妥善处理。3裁判员在比赛前，强调安全规则。当现场出现突发事件时，应及时给予处理。十三、申诉与仲裁1福建省职业院校技能大赛设仲裁工作委员会，赛点设仲裁工作组,组长由大赛组委会办公室指派，组员为赛项裁判长和赛点执委会主任。2参赛队对赛事过程、工作人员工作若有疑异,在事实清楚,证据充分的前提下可由参赛队领队以书面形式向赛点仲裁组提出申诉。报告应对申诉事件的现象、发生时间、涉及人员、申诉依据等进行充分、实事求是的叙述。非书面申诉不予受理。3提出申诉应在赛项比赛结束后1小时内向赛点仲裁组提出。超过时效不予受理。提出申诉后申诉人及相关涉及人员不得离开赛点，否则视为自行放弃申诉。4赛点仲裁工作组在接到申诉报告后的2小时内组织复议，并及时将复议结果以书面形式告知申诉方。5对赛点仲裁组复议结果不服的，可由代表队所在院校校级领导向大赛仲裁委员会提出申诉。大赛仲裁委员会的仲裁结果为最终结果。6申诉方不得以任何理由拒绝接收仲裁结果；不得以任何理由采取过激行为扰乱赛场秩序；仲裁结果由申诉人签收，不能代收；如在约定时间和地点申诉人离开，视为撤诉。7申诉方可随时提出放弃申诉。十四、竞赛观摩1观摩对象：各参赛队领队、指导教师及随队人员。2观摩方法及遵守的纪律：参加观摩的代表须遵守大赛纪律，按照大赛组委会的组织有序观摩。比赛期间，注意赛场安静。凡观摩人员均不得进入赛场内部进行拍照、交流、观看。十五、竞赛视频本赛项将对比赛整体情况进行摄制，形成教学宣传片，反映本赛项整体情况和优势特色。十六、竞赛须知（一）参赛队须知1竞赛采用团队组织个人参赛形式。2参赛队名称：统一使用学校名称。3参赛队组成：每校可选派2名选手，参赛选手为2016年在籍的全日制高职高专学生，年龄限制在25周岁以下（1991年6月30日之后出生），不分性别、年级。4每位选手可指定1名指导教师，负责本校参赛队的参赛组织和与竞赛组织机构的联络。在比赛期间，指导教师不得进入竞赛场地内，发现违规取消该队参赛资格。5参赛选手在报名获得确认后，原则上不再更换。6各参赛队在领队带领下准时到达大赛的举办地点，及时办理报到、入住等必备手续，领取相关证件及资料，做好赛前准备工作。7参赛队按照大赛赛程安排，凭大赛组委会颁发的参赛证和有效证件参加竞赛及相关活动。8各参赛队要根据大赛日程安排准时、有序的组织好参赛选手熟悉赛场、按时参赛。9各参赛选手竞赛项目出场次序采用抽签方式确定。10.各参赛队应遵守相关规定，树立良好的赛风，确保大赛顺利进行。如有问题统一由领队向赛项执委会提出。11.参赛队所有人员在竞赛期间未经组委会批准，不得接受任何与竞赛内容相关的