E-cadherin在肺腺癌中的差异性表达-肿瘤医学论文.doc

E-cadherin在肺腺癌中的差异性表达-肿瘤医学论文E-cadherin在肺腺癌中的差异性表达 姜丽红1 孙 雪2 王文革2 范海滨3 宋军利4 1.辽河油田总医院病理科，辽宁盘锦 124010；2.辽河油田总医院妇产科，辽宁盘锦 124010； 3.辽河油田总医院儿科，辽宁盘锦 124010；4.辽河油田总医院康复科，盘锦辽宁 124010 摘要 目的 探讨E-cadherin mRNA及其编码蛋白在肺腺癌中的表达是否存在差异性。方法 选取肺腺癌20例，应用RT-PCR法和WESTERN-BLOT法分别检测肺腺癌区和正常区E-cadherin mRNA及其编码蛋白表达情况。结果 肺腺癌中E-cadherin mRNA水平与蛋白水平存在明显不一致的情况，即尽管40%的肺腺癌病例的E-cadherin在mRNA水平有表达，但在蛋白水平却难以检出。 结论 在肺腺癌细胞内很可能存在某种转录后调节（沉默）机制，如RNA选择性剪接、microRNA。因此，该文为深入研究E-cadherin的表达调节机制及其肿瘤生物学意义提供颇有价值的线索。 关键词 E-cadherin；肺腺癌；差异性 中图分类号 R734.2 文献标识码 A 文章编号 1674-074（3）02（c）045-02 Differential E-cadherin Expression Patterns in Iung Adenocarcinoma JIANG Lihong1 SUN Xue2 WANG Wenge2 FAN Haibin3 SONG Junli4 1. Department of pathology，The general hospital of Liaohe oilfield, Panjin 124010, China；2. Department of gynaecology and obstetrics，The general hospital of Liaohe oilfield, Panjin 124010, China；3. Department of pediatric，The general hospital of Liaohe oilfield, Panjin 124010, China；4. Department of Rehabilitation，The general hospital of Liaohe oilfield, Panjin 124010, China Abstract Objective To study the diversity of E-cadherin mRNA and its protein expression in lung adenocarcinoma. Methods 20 patients with lung adenocarcinoma were selected. E-cadherin mRNA and its protein were detected by RT-PCR and WESTERN-BLOT, respectively. And the sample came from lung adenocarcinoma and normal tissue of the same patient. Results Our results demonstrated the discrepancy of E-cadherin expression at mRNA and protein levels. Conclusion The discrepancy of E-cadherin expression at mRNA and protein levels reflect potential involvement of posttranscriptional regulation(s), Such as RNA alternative splicing and microRNA that remains to be further elucidated. Key words E-codherin; Lung adenocarcinoma;Dfference 上皮钙粘素(E-cadherin)是一类介导上皮细胞相互黏附的钙依赖性跨膜糖蛋白。国内外大量研究证实，恶性肿瘤局部浸润和远处转移与细胞间粘附力的降低有关，其中E-cadherin具有重要作用1-3。但是目前对E-cadherin的研究大多数仍局限于蛋白或转录的单一层面，关于该基因转录产物和蛋白表达之间的关系尚罕有报导。2010年2月2012年9月，该科研小组对20例肺腺癌进行了相关研究，力图阐明E-cadherin mRNA及其编码蛋白在肺腺癌中是否存在差异性的问题，现报道如下。 1 资料与方法 1.1 一般资料 20例肺腺癌病理资料来自辽河油田总医院病理科。其中女性8例，男性12例；年龄3876岁，平均65岁。对同一患者的新鲜肺腺癌组织和正常肺组织标本分别提取mRNA和蛋白质，然后分别应用RT-PCR法和WESTERN-BLOT法检测E-cadherin mRNA及其编码蛋白表达情况。 1.2 RT-PCR反转录反应条件为 55 30 min，99 5 min，5 5 min，具体操作按照TaKaRa RNA LA PCRTM Kit试剂盒提供的说明书进行；PCR反应条件：E-cadherin引物序列：F 5acute;-GACGCGGACGATGATGTGAAC-3acute;，R 5acute;-TTGTACGTGGTGGGATTGAAG A-3acute;；96 预变性5min，96 1 min，56.3 1 min，72 1 min，共循环35次，然后72 延伸7 min2。PCR扩增产物2%琼脂糖凝胶电泳。 1.3 WESTERN-BLOT 按分子克隆实验操作指南进行，一抗为鼠抗人E-cadherin单克隆抗体、兔抗人-actin多克隆抗体；二抗为辣根过氧化物酶标记的羊抗兔鼠IgG，应用ECL法标记结合信号，通过荧光自显影感光在Kodak XAY胶片上。 2 结果 20例新鲜肺腺癌组织与其自身正常对照肺组织分别提取RNA和蛋白质，然后应用RT-PCR和WESTERN-BLOT方法对E-cadherin进行了mRNA及其编码蛋白表达情况的检测，结果见图1。 结果发现：40%（820）肺腺癌组织中E-cadherin mRNA呈阳性，而蛋白水平为阴性；10%（220）肺腺癌组织中E-cadherin蛋白水平比mRNA水平下调更为明显。 3 讨论 肺癌的发生发展是一个复杂的多因素参与的过程。在这个过程中细胞粘附分子E-cadherin起着重要作用。研究表明，E-cadherin含量多少与细胞间粘附功能异常、上皮性肿瘤的浸润和转移密切相关。 人的E-cadherin基因CDH14定位于16q22.1，编码分子量为120 kD的单链跨膜糖蛋白，主要定位于上皮细胞膜。E-cadherin分子包括细胞外区、跨膜区和细胞内区3个区域。其细胞外区通过结合钙离子维持串联结构域的稳定和促进细胞黏附。此外，E-cadherin的细胞内区与caterin形成E-cadherin-caterin复合物，连接于肌动蛋白细胞骨架，从而形成和维持细胞间的稳固连接。因此，E-cadherin是维持上皮细胞间相互粘附的重要蛋白。 E-cadherin的功能异常可以导致多种恶性改变，包括细胞形态改变、细胞间黏附力下降及细胞移动性增强。因而，E-cadherin对肿瘤侵袭和转移起着重要的抑制作用，而且这已在许多研究中得到了证实5。 目前，关于E-cadherin转录与翻译之间关系的研究甚少。为此，本实验选取肺腺癌作为研究对象，从检测不同类型肺组织的E-cadherin mRNA和蛋白水平入手。结果发现，在某些病例中E-cadherin表达在mRNA和蛋白水平存在着明显差异性，即mRNA水平有表达，而蛋白水平阴性或者mRNA水平与蛋白水平明显不一致。分析原因很可能是转录后调节机制发挥着重要作用。E-cadherin mRNA水平与蛋白水平不一致是否与RNA选择性剪接或microRNA有关，我们将在今后的研究中做深入探讨。 参考文献 1 Shen WD, Ji Y, Liu PF, et al. Correlation of E-cadherin and CD44v6 expression with clinical pathology in esophageal carcinoma. Huang B J.Wu S.Mol Med Report，2012，5(3):817-821. 2 Cheng XX, Wang ZC, Chen XY,et al. Frequent loss of membranous E-cadherin in gastric cancers: A cross-talk with Wnt in determining the fate of beta-cateninJ. Clin Exp Metastasis，2005，22(1):85-93. 3 Brzozowska A, Sodolski T, Duma D,et al. Evaluation of prognostic parameters of E-cadherin status in breast cancer treatment.J. Ann Agric Environ Med，2012，19(3):541-546. 4 Berx G, Staes K,