水粪大肠菌数检测ppt课件

09工业环保与安全技术,水总大肠菌群检测,,Company Logo,工作流程,,Company Logo,工作流程,提交报告,,Company Logo,当环境受到污染后，环境的 物理性质 化学性质 生物学特性 如： 重金属离子、NO3- 浓度增加； 水体污染变质，水生生物种类减少，甚至灭绝；,发生变化,理论知识,,Company Logo,如何监测？,化学方法：快速、定性定量反映污染物浓度，但为瞬时值； 生物学方法：利用生物种类、数量的变化，生物学特性的改变来监测污染物对环境的影响。 可监测到污染物对环境的综合影响，但不易精确反映污染物的性质、浓度和数量。,,Company Logo,生活饮用水卫生标准,2006年12月29日，卫生部、国家标准化委员会发布2006年第12号文件，批准发布生活饮用水卫生标准及检测方法国家标准。标准自2007年7月1日起实施，其中生活饮用水卫生标准中非常规指标的实施项目和日期由省级人民政府根据当地实际情况确定。 全部指标最迟于2012年7月1日实施。,,Company Logo,检品 胆盐乳糖发酵管 伊红美兰平板 大肠杆菌菌落纯培养 乳糖复发酵管（-） 乳糖复发酵管（）,大肠菌群的检测流程,,Company Logo,总大肠菌群,当饮用水受到粪便等污染，就有可能带有沙门氏菌、志贺氏菌、弧菌、肠道病毒等，且它们均可以水为媒介引起肠道传染病。 总大肠菌群含量可表明水体被污染的程度，并且间接地表明肠道病菌存在的可能，以及对人体健康具有潜在危险性。,,Company Logo,粪大肠菌群,粪大肠菌为总大肠菌群的一个亚种；直接来自粪便，除了它耐热，在44-44.5的高温条件下仍可生长繁殖并将色氨酸代谢成吲哚，其他特性均与总大肠菌群相同。 由于总大肠菌群既包括粪便污染，同时也包括非粪便污染的大肠菌总数，因此，有必要在饮用水标准中增加粪大肠菌群这个指标，以便直接反映出水体是否受到粪便污染的信息，进一步确保流行病学的安全。,,Company Logo,粪大肠菌群检测方法注解,总大肠菌群中的细菌除生活在肠道中外，在自然环境中的水与土壤中也经常存在，但此等在自然环境中生活的大肠菌群培养的最合适温度为25左右，如在37培养则仍可生长，但如将培养温度再升高至44.5，则不再生长，而直接来自粪便的大肠菌群细菌，习惯于37左右生长，如将培养温度升高至44.5仍可继续生长。 因此，可用提高培养温度方法将自然环境中的大肠菌群与粪便中的大肠菌群区分。在37培养生长的大肠菌群，包括在粪便内生长的大肠菌群称为“总大肠菌群”(Total coliform)；在44.5仍能生长的大肠菌群，称为“粪大肠菌群”(Fecal coliform)，粪大肠菌群细菌在卫生学上具有重要的意义。,,Company Logo,目的：,1.学习水样的采取方法和水样总大肠菌菌群测定的方法； 2.了解水源水的平板菌落计数的原则。,,Company Logo,水中总大肠菌群的测定,一、测定意义,作为水体受粪便污染的指标。,二、总大肠菌群的特征,在37 48h之内发酵乳糖产酸产气,是革兰氏阴性无芽孢杆菌,在特殊培养基上能够长出具有典型特征的菌落,,Company Logo,实验原理：,目前检测大肠菌群的标准分析法是多管发酵法。 多管发酵法包括初步发酵试验，平板划线分离和复发酵试验三部分。,,Company Logo,水中总大肠菌群的测定,总大肠菌群:指那些能在37 48h之内发酵乳糖产酸产气的、需氧及兼性厌氧的革兰氏阴性的无芽孢杆菌。 主要包括有埃希氏菌属、柠檬酸杆菌属、肠杆菌属、克雷伯氏菌属等菌属的细菌。,生活饮用水的总大肠菌群数每升不得超过3个,,Company Logo,水中总大肠菌群的测定,一、多管发酵法,(1) 生活饮用水, 初发酵试验, 平板分离, 复发酵试验,阳性管接种在伊红美兰培养基上，37培养1824h，挑选典型特征的菌落，涂片、革兰氏染色、镜检,,Company Logo,(2) 水源水：将水样作1：10稀释,水源水大肠菌群的测定,,Company Logo,(3) 地表水和废水：水样应作1:10，1:100，1:1000或更高的稀释,MPN值=MPN指数,水源水大肠菌群的测定,,Company Logo,水源水大肠菌群的测定,1.初发酵试验,,Company Logo,2.复发酵试验,阳性管接到EC培养液中。在37温度下培养24h2h，立即观察，发酵管产气则证实为大肠菌群阳性,3.计算和报告结果,查MPN表，按总大肠菌群的计算方法计算每升水中粪大肠菌群细菌的MPN值,水源水大肠菌群的测定,,Company Logo,检测操作方法,,Company Logo,检品取样,1.水体取样： 应取距水面1015cm的深层水样。先将灭菌的带玻璃塞瓶，瓶口向下浸入水中，然后翻转过来，除去玻璃塞，水立即流入瓶中，盛满后，将瓶塞盖好，再从水中取出。 2. 自来水取样： 打开自来水龙头，让水流流出1min左右，用烧杯接取自来水。,,Company Logo,3. 将河水水样分别稀释成10-1、10-2、10-3三个连续稀释浓度（注意：在稀释前后一定要充分混匀）、自来水样不稀释。 注意：河水样的稀释，取1个灭菌空试管，加入9mL灭 菌水。用取过灭菌水的移液管取1mL河水样，放入试管中，振荡试管混合均匀。,检品取样,,Company Logo,培养基配制,,Company Logo,品红亚硫酸钠培养基（Endo Agar）（远藤琼脂培养基）,,Company Logo,品红亚硫酸钠培养基平板及典型菌落,,Company Logo,伊红美蓝培养基,蛋白胨 10g 乳糖 10g 磷酸氢二钾 2g 琼脂 2030g 蒸馏水 1000ml 2%伊红水溶液 20ml 0.5 %美蓝水溶液 13ml,,Company Logo,灭菌与消毒,,Company Logo,1.加热已经配制好的固体培养基（牛肉膏蛋白胨琼脂培养基），使固体培养基溶化。 2.倒制平板：每个空平皿中倒约20mL的培养基，放置桌面待其凝固。 3.用移液管吸取0.1mL水样，滴于平板中；将玻璃涂布棒于酒精灯的外焰上加热，杀死表面微生物，待其冷却后用涂布棒将水滴均匀的涂满整个平板表面，尽量将水涂干。 5. 倒置于37度培养箱中培养24h。,涂布平板接种法：,,Company Logo,涂布平板接种法：,,Company Logo,1.挑取无片状菌苔生长的平板作为计数平板，若片状菌苔的大小不到平板的一半，而其余的一半菌落分布很均匀时，可将此一半的菌落数乘2以代表全平板的菌落数。 2.选择平均菌落数在30-300之间的平板来计算该水样的菌落总数。如果所有的平板的菌落总数都不在30-300范围之内，则取最靠近30-300的平板进行计数 3. 如果有两个稀释浓度的总菌落数落在了30-300范围之内，则先计算两个浓度下每ml水体中细菌总数，如果两个数值的比值大于2则取小的浓度，如若小于2则取两值的平均值。,菌落计数,,Company Logo,,Company Logo,试一试,,Company Logo,计算和报告计数结果,,Company Logo,计算,根据证实有大肠菌群存在的阳性发酵管，查MPN检索表，求出每100ml水样中的大肠菌群数。 MPN表见P192,,Company Logo,大肠菌群测定 国家标准采用三步法,大肠菌群 需氧及兼性厌氧、在37能分解乳糖产酸产气的革 兰氏阴性无芽胞杆菌。,,Company Logo,较清洁样品的三步法图示,,Company Logo,三步法图示,,Company Logo,大肠菌群测定,计算方法,挑选菌落特征：黑紫色、有光泽或无光泽菌落； 红色、粉红色菌落。,抑制剂：胆盐、煌绿、十二烷基硫酸钠。,产酸判断：紫色培养液变成黄色,产气判断：发酵导管内有小气泡，如轻轻打动试管有气泡沿管壁 上浮，应考虑可能有气体产生，需进一步试验。,,Company Logo,美国FDA标准方法,行业标准采用两步法：,用于对出口食品中大肠菌群进行检验,,Company Logo,如对一自来水厂出水进行检验，初发酵一般在10支小发酵管和两支大发酵瓶内进行，复发酵在5支小发酵管内进行。以300mL进行初发酵实验，其中100mL的水样2份（分