临床微生物标本课件

2019/5/6,福建医科大学附属协和医院,临床微生物标本的正确采集与运送,福建医科大学附属协和医院 陈丽芬,2019/5/6,福建医科大学附属协和医院,标本采集的重要性,1正确的微生物检验始自正确的标本采集与运送； 2病原微生物能否成功检出，有一半的因素取决于标本采集与运送是否满意； 3细致采集标本和有效的运送可有效降低分离微生物的难度。,2019/5/6,福建医科大学附属协和医院,标本采集的原则,1尽早采集； 2 选择不同的采集时机和标本种类； 3 收集足够的标本量；尽可能在应用抗生素前采集标本； 4 无菌采集：无菌部位的标本应严格无菌技术操作， 5 其他标本应尽可能避免标本外细菌污染； 6正确保存和运送：标本采集后应立即送检。,2019/5/6,福建医科大学附属协和医院,病原微生物标本采集的安全性,1 具有与采集病原微生物所需要的生物安全防护水平适应的设备、包括个人防护用品、防护材料、器械和防护设施； 2 具有掌握相关专业知识和操作技能的工作人员； 3 具有有效的防止病原微生物扩散和感染的措施； 4 具有保证病原微生物样本质量的技术方法和手段（采集过程应对样本的来源、采集过程和方法等应详细记录）；,2019/5/6,福建医科大学附属协和医院,各类标本采集与运送方法,1 血液标本的采集与运送 采血指征：一般患者出现以下一种体征时可作为采血的重要指征（临床微生物学检验操作规范） 发热：38或低温：36，寒战、WBC增多（计数10.0109/L/特别有核左移时）； 皮肤粘膜出血，昏迷，多器官衰竭、BP降低，C反应蛋白升高及呼吸困难，血液病患者出现粒细胞减少，等，或同时具备上述几种体征时而临床可疑菌血症应采集血液培养； 新生儿可疑菌血症，应同时做尿液和脑脊液培养。,2019/5/6,福建医科大学附属协和医院,血液标本的采集与运送,血液标本中常见的病原菌： 血液标本中致病菌以细菌为主（需氧菌为主。厌氧菌、真菌也占相当比例），偶为支原体； 医院内感染的菌血症常见的病原菌： 金葡、表葡、肠球菌、大肠埃希菌、肺克、其他肠杆菌、铜绿假单胞菌、不动杆菌、厌氧菌、真菌等。,2019/5/6,福建医科大学附属协和医院,血液标本的采集与运送,医院外感染的菌血症常见的病原菌： 肺炎链球菌、金葡、表葡、肠球菌、草绿色链球菌、大肠埃希菌、沙门菌属、流感嗜血杆菌，厌氧菌、真菌明显少见。,2019/5/6,福建医科大学附属协和医院,血液标本的采集与运送,、皮肤消毒程序：严格执行以下三步法: 穿刺处皮肤首先用75%的酒精擦拭并待干 用1-2%碘酊作用30秒或10%的碘伏作用60秒，从穿刺点向外画圈消毒，消毒直径5cm； 75%的酒精脱碘待干。 、培养瓶消毒程序： 75%的酒精擦拭血培养瓶橡皮塞并待干60秒； 用无菌棉签清除橡皮塞表面残余酒精。,2019/5/6,福建医科大学附属协和医院,血液标本的采集与运送,采血套数及血量： 每套包括一个需氧培养瓶和一个厌氧瓶；采血量与培养基量：1：51：10为宜；成人：8-10ml/瓶；儿童： 1-5ml/瓶 采血时间： 尽可能在抗菌素使用前，在24小时采2-3套； 入院前2周内接受抗生素药物治疗的患者，连续3天，每天采2套，可选用能中和或吸附抗生素的培养基； 对间歇性寒战或发热应在寒战或体温高峰来到之前0.5-1小时采集血液，或于寒战或发热后1小时采血；,2019/5/6,福建医科大学附属协和医院,血液标本的采集与运送,特殊的全身或局部感染采血培养的建议： 可疑急性原发性菌血症、真菌菌血症、脑膜炎、骨髓炎、关节炎或肺炎应在不同部位采2-3套血标本； 不明原因发热如：隐性脓肿、伤寒热、稽留热等应先采集2-3套标本，24-36小时后估计体温升高前再采集2套以上； 可疑菌血症或真菌菌血症，但血培养持续阴性，应改变血培养方法，以获得罕见或苟养的微生物； 可疑细菌性心内膜炎，在1-2小时内采集3套血标本，24小时后阴性，再采集3套以上。,2019/5/6,福建医科大学附属协和医院,血液标本的采集与运送,、采血点：静脉采血，一个静脉点只能采一套血培养标本，采集第2套是应更换静脉穿刺点；除非怀疑CRBSLs否则不可从静脉导管或静脉留置取血。若必须从导管处取血，不要弃去初段血、不用抗凝剂； 、血培养瓶保存：常温保存、切勿冷藏，及时送检。,2019/5/6,福建医科大学附属协和医院,血液标本的采集与运送,、标识：多套、多点采集时培养瓶上应注明采集时间、部位，但不能将标签贴在条形码上，否则仪器无法识别。 、不合格的血培养标本： 血培养瓶与检验单申请不符；培养瓶破损 或污染；血培养标本放置12小时以上；采血量 不足。,2019/5/6,福建医科大学附属协和医院,尿液标本的采集与运送,从肾脏排除的尿液通常是无菌的，尿液内有大量微生物繁殖时为尿路感染。 上尿路感染：输尿管炎、肾盂肾炎； 下尿路感染：膀胱炎、尿道炎；,2019/5/6,福建医科大学附属协和医院,尿液标本的采集与运送, 采集指征： 有典型的尿路感染症状； 肉眼血尿或脓尿； 尿常规检查表现为WBC增高或亚硝酸盐阳性； 不明显的发热，无其他局部症状； 留置导尿管病人出现发热； 膀胱排空功能受损； 泌尿系疾病手术前。,2019/5/6,福建医科大学附属协和医院,尿液标本的采集与运送,尿培养最常见的病原菌： 大肠埃希菌约占60-80%， 其他：葡萄球菌、肠球菌、非发酵菌、变形杆菌、淋病奈瑟菌、结核杆菌、支原体、衣原体等。,2019/5/6,福建医科大学附属协和医院,尿液标本的采集与运送, 尿路感染标本收集方法： 清洁中段尿采集法；（晨尿10ml） 膀胱穿刺法； 肾盂尿采集法； 导尿法； 注意：用导尿管采集标本时，应消毒导尿管外部，按无菌操作方法用注射器穿刺导尿管吸取尿液，操作时应防止混入消毒液，不能从收集袋中采集尿液。 尿路感染也可在无菌操作下取尿道脓液或分泌物标本。,2019/5/6,福建医科大学附属协和医院,尿液标本的采集与运送, 尿标本采集时间： 未使用抗生素前； 取晨起第一次尿液送检或尿液在膀胱内应停留68小时以上； 在临床症状明显时收集。 尿标本的运送和保存： 用无菌容器盛标本； 标本应立即送检，2小时内接种； 若不能立即接种可将标本置于4-8的冰箱内保存，但不得超过8小时； 尿液中不得加入防腐剂或消毒剂。,2019/5/6,福建医科大学附属协和医院,尿液标本的采集与运送,尿液培养结果说明： 正常参考值：无细菌生长； 细菌学诊断标准： A 膀胱穿刺尿：任何数目、所有的细菌均有意义； B 清洁尿中段：菌落计数：革兰阴性菌105/ml,革兰阳性菌浓度104/ml；但如为非留置导尿管病人临床上无尿路感染表现，则要求2次尿培养的细菌数均105/ml,并为同一细菌时为病原菌； C 用导尿法采集尿标本细菌定量培养计数103/ml时有意义。,2019/5/6,福建医科大学附属协和医院,尿液标本的采集与运送,不合格尿标本： 同一种标本培养出4中以上的细菌，应认为收集或处理标本不当被污染； 送检容器不合格； 送检时间超过2小时。,2019/5/6,福建医科大学附属协和医院,粪便标本的采集与运送：,（1）标本送检指征： 粪便涂片镜检白细胞5个/HP； 重症腹泻； 体温大于38.5； 便中有脓液血液； 未经抗菌药物治疗的持续性腹泻患者； 来自疫区的患者。,2019/5/6,福建医科大学附属协和医院,粪便标本的采集与运送：,感染性腹泻的病原菌： 细菌： 真菌： 病毒：轮状病毒、星状病毒、诺瓦克样病毒、 肠型腺病毒等； 寄生虫：溶组织内阿米巴、隐孢子虫等。,2019/5/6,福建医科大学附属协和医院,粪便标本的采集与运送：,（2）标本采集的方法： 标本采集尽可能在发病早期和应用抗菌药物之前，在不同的时间采集23份标本可以提高致病菌分离率； 自然排便法：采标本时取有脓血、粘液、组织碎片的粪便13克，液体粪便则取絮状物，13ml直接装入容器或保存液或运送培养基中。,2019/5/6,福建医科大学附属协和医院,粪便标本的采集与运送：,直肠拭子法：一般用于排便困难的患者或儿童。 方法：用肥皂水将肛门周围洗净，用NS棉试子插入肛门，成人约4-5cm，儿童2-3cm 与直肠粘膜直接接触，轻旋转，必须将拭子置于培养基内送检。 食物中毒患者也可以取食物、呕吐物、胃液培养。,2019/5/6,福建医科大学附属协和医院,粪便标本的采集与运送：,（3）标本运送： 粪便标本应尽快送检，温室条件下不能超2h，不能及时送检时置运送培养基中，但不宜超过24h。 （4）不合格标本： 粪便标本放置时间超过2h； 直肠拭子未置于运送培养基内送检； 运送的标本中混有尿液； 标本已干燥。,2019/5/6,福建医科大学附属协和医院,呼吸道标本的采集与运送,部位： 上呼吸道：喉以上部位 ； 下呼吸道：气管、支气管、肺泡 下呼吸道感染送检指征： 咳嗽、咯血、呼吸困难、发热伴白细胞增高。,2019/5/6,福建医科大学附属协和医院,呼吸道标本的采集与运送,常见病原菌： 社区获得性肺炎：肺炎链球菌、流感嗜血杆菌、金葡菌、肺炎克雷伯菌、肺炎支原体、肺炎衣原体等。 医院获得性肺炎： 铜绿假单胞菌、大肠埃希菌、阴沟肠杆菌、克雷伯菌、鲍曼不动杆菌、金葡菌、假丝酵母菌等。,2019/5/6,福建医科大学附属协和医院,呼吸道标本的采集与运送,采集方法： 自然咳嗽法：以晨痰为佳，冷开水漱口或牙刷清洁口腔和牙齿，用力咳出深部的痰；咳痰困难者可用4.5%NS雾化吸入，使痰易咳出。 支气管镜采集法: 防污染毛刷采集法: 环甲膜穿刺经气管吸引法: 经胸壁穿刺吸引法； 小儿吸痰法：用弯压舌板向后压舌，将试子伸入咽部，刺激咳嗽时可将喷出肺部或气管分泌物粘在拭子上送检。,2019/5/6,福建医科大学附属协和医院,呼吸道标本的采集与运送,1 经筛选的痰液(涂片镜检鳞状上皮细胞 25个/低倍视野,或二者比例 1:2.5)连续两次分离出相同病原体。 2 痰定量培养分离到病原菌浓度106cfu/ml 3 痰或下呼吸道采样标本中分离到通常非呼吸道定植的细菌或其它特殊病原体。,2019/5/6,福建医科大学附属协和医院,1、支气管吸出物（TBAS）定量培养： 其诊断标准阳性阈值为细菌培养结105CFU/ml； 2防污染纤维支气管镜引导保护性标本毛刷技术（FOB-PSB）：细菌培养结果103CFU/ml（单导管保护），可视为致病菌，其敏感性89%、特异性94%。 FOB-PSB法获取的标本量少，应立即置于液体培养基中送检。 3、防污染加保护性肺泡灌洗液技术（BAL）常以104CFU/ml为致病菌诊断界限值，其敏感性91%、特异性78%；支气管肺泡灌洗液的阴性对确认无菌肺组织的特异性为96%，在排除VAP诊断时有重要意义 。,2019/5/6,福建医科大学附属协和医院,呼吸道标本的采集与运送,咽、鼻咽拭子标本的采集与运送 咽拭子：患者先用清水漱口，由检查者将舌向后拉，使悬雍垂尽可能向外牵引，将拭子越过舌根到咽后壁，反复涂抹数次，避免拭子接触口腔和舌粘膜。 鼻咽拭子：有鼻腔穿入鼻咽部，轻轻旋转擦拭，然后取出，再从另一鼻腔收集标本。采集过程中避免唾液污染，标本迅速送检。,2019/5/6,福建医科大学附属协和医院,呼吸道标本的采集与运送,不合格标本： 咽拭子、咳痰、吸出的分泌物厌氧菌培养无意义； 痰标本呈水样、唾液样； 送检时间超过2h； 同时同部位或同一天两份相同的检测标本。,2019/5/6,福建医科大学附属协和医院,皮肤、软组织感染的标本采集与运送,指征： 皮肤、软组织感染：皮肤感染、软组织感染、褥疮感染、烧伤感染、乳房脓疡、乳房炎、脐送检炎 采集方法： 组织块：严格消毒皮肤和手术区域，经手术或侵入性技术获得的标本最好； 尽量多采集组织；置于无菌容器或厌氧运送系统送检，标本量少使加人少量无菌NS送检。 ；,2019/5/6,福建医科大学附属协和医院,皮肤、软组织感染的标本采集与运送,脓肿； a开放性伤口：开放性伤口抽吸前用无菌NS擦去表面分泌物，以免污染，尽量抽吸深部脓液送检。 B闭合性脓肿：抽吸前用23碘酊和70酒精消毒周围皮肤，穿刺抽取脓液或分泌物送检，也可再切开排脓时采集送检。,2019/5/6,福建医科大学附属协和医院,结核病标本的采集, 根据感染部位的采集标本：痰液、尿液、胸腹水、脑脊液、胃液、气管冲洗液、脓液、关节液、粪便标本等。 痰标本的留取： 初诊病人应送3份标本（夜间痰、清晨痰、即时痰），如果没有夜间痰，在留取清晨痰后23小时在留取一份痰标本；或在送痰时留取2份即时痰。治疗中的病人按期每次送检2份痰标本（夜间痰和清晨痰）。即时痰为就诊时咳出的痰液。清晨痰为清晨咳出的痰液。夜间痰为就诊前一天晚睡前咳出的痰液。,2019/5/6,福建医科大学附属协和医院,结核病标本的采集, 合格的标本： 痰标本应以脓样、干酪样或脓性粘液样