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文档简介

PCR技术在医学检验中应用,主要内容： 1.PCR的定义； 2.PCR的基本原理； 3.,一、PCR的定义：,PCR（polymerase chain reaction) ：聚合酶链式反应，又称体外DNA扩增技术。是近年来发展起来的一种体外扩增特异DNA片段的新技术。,PCR技术：1985年由美国的Kary Mullis 首创，可以将微量目的DNA片段扩增一百万倍以上。 优点：敏感度高、特异性强、产率高、重复性好以及快速简便等，广泛应用于微生物学、考古学、法医学及体育等领域，并已普及到许多普通实验室，大大简化了传统的分子克隆技术，从而比较容易地对目的基因进行分析、鉴定。,二、PCR的原理：,用于扩增位于两段已知序列之间的DNA片段，类似于天然DNA的复制过程。 以拟扩增的DNA分子为模板，以一对分别与模板5末端和3末端互补的寡核苷酸片段为引物，在DNA聚合酶的作用下，按照半保留复制的机制沿着模板链延伸直至完成新的DNA合成，重复这一过程，即可使目的DNA片段得到扩增。,扩增的特异性取决于引物与模板DNA的特异性结合，一个典型的PCR反应包括，“变性-退火-延伸”的多个循环,其一般反应过程为： 1. 变性 (Denaturation)： 将体系加热至(95， 30)使模板DNA互补双链间的氢键断而解离成为两条单链DNA，以便他与引物结合，为下轮反应做准备。,2. 退火 (复性) (Annealling): 将体系温度突然将温度降至（55 左右）后寡核苷酸引物与模板DNA单链上的互补序列杂交（按碱基互补配对原则结合）。同时，体系中的部分DNA聚合酶被激活，一旦引物与模板杂交，DNA聚合酶就结合到杂交序列上使引物开始沿着模板DNA延伸。这一步对扩增产物特异性有重要的决定作用；,3. 延伸 (Extension): 将反应体系温度升至DNA聚合酶的最佳扩增温度（72 ），与模板DNA结合的引物在DNA聚合酶的作用下，以 dNTP作为反应原料，以引物的 3 端开始，按碱基配对与半保留复制原理，合成一条与模板DNA链互补的新DNA链。,上述 3 步为一个循环，每经过一个循环，样本中的DNA量应该增加一倍，新形成的链又可成为新一轮循环的模板，重复以上3步，根据需要的量，经过2540个循环，DNA可扩增106 109 倍。 在PCR反应中，每一个循环都以前一循环完成后的所有产物为模板，因此，扩增产物是以指数方式增长的（2n）。,25-40个循环,三 PCR反应体系的组
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