《疫学技术》PPT课件.ppt

第七章 免疫学技术,免疫,主动免疫 被动免疫,主动免疫与被动免疫的比较,常用的生物制剂,1、活疫苗 2、灭活疫苗 3、抗血清/蛋黄抗体 4、诊断试剂,活疫苗和灭活疫苗的比较,特异性抗体,1、抗血清 2、蛋黄抗体,新型疫苗,1、亚单位疫苗 2、合成疫苗 3、基因工程疫苗 4、口服疫苗 5、DNA疫苗,免疫调节剂(immunomodulator),增强、促进和调节机体免疫功能的一类生物或非生物制剂。该种制剂的调节作用通常表现为对机体的正常免疫功能不产生影响，而对异常的免疫功能具有双向调节作用，即在一定范围内对过低的免疫应答起促进作用，对过高的免疫应答起抑制作用。,免疫调节剂的种类,1、微生物制剂 2、免疫组织提取物 3、细胞因子 4、化学合成制剂,微生物制剂,1、卡介苗(牛型结核杆菌减毒活疫苗) 2、棒状杆菌(革兰氏阳性短小棒状杆菌) 3、脂磷壁酸(溶血型链球菌菌体表面具 有免疫增强作用的成分) 4、胞壁酰二肽(分枝杆菌细胞壁中的一种具有免疫增强和佐剂作用的成分) 5、细菌脂多糖,微生物制剂的主要作用,1、激活单核吞噬细胞，增强其吞噬杀菌和细胞毒作用。 2、诱导单核细胞释放细胞因子(IL-1、IL-2、IFN、CSF等)，促进和调节免疫应答。 3、促进TH细胞发生分裂，诱导TH细胞产生IL-2、4、6，TNF和IFN等多种细胞因子，促进或调节免疫应答。 4、增强NK细胞杀伤能力，促进造血干细胞成熟。,免疫组织提取物胸腺激素,从动物胸腺中提取的一组可溶性多肽混合物，主要包括：胸腺素、胸腺生成素、胸腺刺激素。 能够促进胸腺中未成熟的T细胞发育分化为具有免疫活性的T细胞，并可选择性地作用于T细胞分化的某些环节，增强T细胞的免疫功能。,细胞因子,相对分子量较低的蛋白或糖蛋白，主要由活化的免疫细胞或其他非免疫细胞产生，常以自分泌或旁分泌方式在局部发挥免疫调节作用。 IL-2 IFN TNF,化学合成制剂,1、左旋咪唑：第一个化学结构明确的免疫调节剂，对机体细胞免疫功能有明显的调节作用。 2、合成多聚核苷酸：人工合成的多聚核苷酸的双链共聚物，主要包括poly I:C和poly A:U。 poly I:C具有免疫佐剂作用，是作用最强的干扰素诱生剂，能刺激机体产生干扰素。,常用的家禽免疫程序（三黄鸡）,三黄鸡参考免疫程序,常用的家禽免疫程序(种、蛋鸡),常用的家禽免疫程序(种、蛋鸡),疾病诊断中的免疫学技术,1、抗原-抗体特异性结合反应 2、判定细胞免疫功能状态,免疫球蛋白的结构,抗原-抗体结合的结构基础,1、VL和VH在具有不同抗原特异性的各种抗体中是多种多样的，而主要的变异发生在高变区。 2、高变区形成暴露在抗体表面的外展环形结构，并能以此与抗原相互作用。 3、高变区的氨基酸序列决定抗原结合的特异性，高变区发生的突变，可以改变抗原结合特异性。,抗原抗体反应的一般规律和特点,1、高度特异性 2、表面可逆性结合 3、适当的浓度和比例 4、特异性结合的两个阶段 (1)特异性结合阶段：反应快、肉眼不可见。 (2)可见阶段：所需时间长，肉眼可见。,影响抗原抗体反应的主要因素,1、电解质：0.85%NaCl溶液。 2、温度：37C是最适温度。 3、酸碱度：pH6-8。,抗原抗体反应的基本类型,1、沉淀反应 2、凝集反应 3、中和试验 4、免疫标记技术,免疫沉淀反应,免疫沉淀反应是建立在可溶性抗原和抗体在液相中特异结合的反应。这种结合分两个阶段： 1、抗原-抗体特异性结合阶段，从几秒中到几分钟之内完成，形成可溶性的小复合物。 2、第二阶段形成大的、可见的免疫复合物，约需几十分钟到数小时。,琼脂扩散试验,属于免疫沉淀技术的一种，常用的是双向扩散试验。以琼脂凝胶为介质，在琼脂内抗原和抗体各自向对方扩散，在最恰当的比例处形成抗原-抗体沉淀线。观察这种沉淀线的位置、形状以及对比关系，可作出抗原或抗体的定性分析。,双向免疫扩散基本图形,Ag,Ab,凝集试验,细菌和红细胞等颗粒抗原，与相应抗体结合后，可出现肉眼可见的凝集现象。凝集反应的发生分两个阶段： 1、抗原-抗体的特异性结合； 2、出现可见的颗粒凝集。 特点：灵敏度高，操作简便。,直接凝集反应,细菌、螺旋体、红细胞等颗粒抗原，在适当电解质参与下，可直接与相应抗体结合出现凝聚现象，称为直接凝集反应。反应中的抗原叫作凝集原，抗体称为凝集素。常用的有玻片法和试管法。,玻片凝集示意图,不凝集（）,凝集（+）,肉眼所见,镜下所见,直接凝集反应试管法,试管法为定量试验，多用于检测抗体。先将备检血清在试管内用生理盐水作连续2倍稀释，然后于各管内加入等量已知抗原，经一定时间后观察凝集的程度，判定血清中抗体的效价，以表示血清中抗体的相对含量。,间接凝集反应,将可溶性抗原（或抗体）先吸附于适当大小的颗粒性载体的表面，然后与相应抗体（或抗原）作用，在适当电解质存在的条件下，出现的特异性凝集现象，叫作间接凝集反应，或被动凝集反应。,间接凝集反应示意图,载体颗粒,可溶性抗原,致敏颗粒,抗体,致敏颗粒凝聚,中和试验,毒素、酶、激素和病毒等与相应抗体结合，使之丧失生物学活性的现象。引起中和反应的抗体称为中和抗体。中和试验主要包括病毒中和试验和毒素中和试验。,病毒中和试验,病毒在细胞培养中被特异性抗体中和而失去感染性的一种试验，用来检测血清中相应中和抗体的滴度，也可用来鉴定病毒。,标记免疫技术,免疫技术是利用抗原抗体反应进行的检测方法，即以制备好的特异性抗原或抗体作为试剂，以检测标本中的相应抗体或抗原。如果将试剂抗原或试剂抗体用可以微量测定的标记物（放射性同位素、荧光素、酶）进行标记，则在与标本中的抗体或抗原反应后，不必测定抗原抗体复合物本身，而是测定复合物中的标记物，通过标记物的放大作用，进一步提高了免疫技术的灵敏度，这种方法成为标记免疫技术。,酶免疫分析技术与放射免疫分析的比较,1、EIA没有放射性污染，但某些底物具有致癌作用。 2、EIA分析仪器简单、价格便宜。 3、酶标底物保存时间长。 4、酶标记物应用范围广。 5、EIA与RIA灵敏度相当。,细胞免疫检测技术,1、T细胞及其亚群的鉴定和检测 (1)E玫瑰花环形成试验 (2)T细胞单克隆抗体对T细胞及其亚群的检测 2、B细胞鉴定和检测 3、T细胞功能检测 (1)淋巴细胞转化试验 (2)淋巴细胞参与的细胞毒性试验 4、B细胞功能检测,E玫瑰花环形成试验,可用于T细胞的检测和鉴定。外周血T淋巴细胞表面具有绵羊（鸡、马等）红细胞受体，将红细胞与外周血淋巴细胞按一定比例混合，在4C条件下放置12小时，可形成以T细胞为中心、周围环绕(绵羊)红细胞的花环样细胞集团。可形成E玫瑰花环的细胞为T细胞。,T细胞单克隆抗体对T细胞及其亚群的检测,T细胞单克隆抗体可用于T细胞及其亚群的检测和鉴定，所用的单克隆抗体主要有CD3 McAb、 CD4 McAb和 CD8 McAb。 通常采用免疫荧光间接法测定。,T细胞单克隆抗体对T细胞及其亚群的检测,淋巴细胞中，被CD3 McAb着染荧光的细胞为总T细胞，包括TH、TH1、TH2、TC和TS细胞。被CD4 McAb着染荧光的细胞为TH、TH1、TH2，被CD8 McAb着染荧光的细胞为TC和TS细胞。 结果表示为： CD3+T细胞=？ CD4+T细胞=？ CD8+T细胞=？,B细胞鉴定和检测,SmIgM/D是B细胞表面特有的标志，通过对该种标志的检测，可对B细胞进行鉴定和检测。 通常采用免疫荧光直接法进行测定。即用荧光素标记的(兔)抗IgM/D抗体对外周血淋巴细胞进行直接免疫荧光染色，着染荧光的细胞为B细胞。,淋巴细胞转化试验,T细胞在体外受到特异性抗原或非特异性有丝分裂原刺激后，能转化为体积较大、代谢旺盛并能分裂的淋巴母细胞。根据其转化程度和转化率，可测定机体细胞免疫功能状态。,淋巴细胞转化试验非特异性转化试验,用植物凝集素(PHA)或刀豆球蛋白A(ConA)等有丝分裂原刺激多克隆T细胞，使其发生母细