《阎实验六生理生化》PPT课件.ppt

（一 ）化学因素对微生物生长的影响 （二）细菌的生理生化反应,实验六,实验目的： 了解常用化学消毒剂对微生物的作用,实验一 化学因素对微生物生长的影响,常用的化学消毒剂主要有重金属及其盐类、有机溶剂（酚、醇、醛等）、卤族元素及其化合物、染色剂和表面活性剂等。,实验原理： 1 氧化剂：通过强烈的氧化作用杀死微生物。 碘的杀菌力强，37碘溶于7083的乙醇中 成碘酒。 2 重金属盐类：使蛋白质变性、沉淀，使酶失活。 00202HgCl2（升汞）溶液对大多数细菌有致死作用。,3 有机溶剂：使蛋白质及核酸变性、破坏细胞膜透性，抑制脱氢酶，氧化酶活性。 乙醇（70%） 4 表面活性剂：具有降低表面张力效应的物质，可抑菌或杀菌。 甲酚杀菌力最强 煤酚皂液（来苏尔）为甲酚和肥皂的混合液。 新洁尔灭：破坏细胞的渗透性,实验材料,1 菌种： 大肠杆菌 2 培养基： 牛肉膏蛋白胨培养基 3 消毒剂： 2.5%碘酒，0.5%石碳酸，75%乙醇， 100%乙醇，1%来苏尔， 0.25%新洁尔灭，无菌生理盐水,实验步骤,1 倒牛肉膏蛋白胨平板 2 取0.2ml大肠杆菌菌液加入平板中，涂布均匀。 3 将平板(皿底）划分为6等份，分别将浸有各种消毒剂的小圆滤纸片贴在平板的每一等份中。 4 将贴好滤纸片的含菌平板，置37倒置培养24-48h。 5 测量并记录抑菌圈的直径，根据其直径的大小，可初步确定测试药品的抑菌效能。（自带尺子）,实验结果,思考题 书p97思考题第11题,实验二：细菌的生理生化反应 （IMViC 与硫化氢试验） 吲哚（I）、甲基红（M）、V.P.试验（Vi）、柠檬酸盐利用（C）试验。用以将大肠杆菌与其形状十分相近的肠杆菌属的细菌鉴别开来。 实验目的： 1 学习几种主要微生物的生理代谢试验及检验方法 认识微生物代谢类型的多样性。 2 了解IMViC反应在肠道菌鉴定中的意义和方法,实验原理： 1 吲哚试验 ： 用来检测吲哚的产生，有些细菌能产生色氨酸酶，分解蛋白胨中的色氨酸产生吲哚和丙氨酸。 吲哚 + 对二甲基氨基苯甲醛 红色的玫瑰吲哚,色氨酸吲哚玫瑰吲哚 吲哚试剂,2 甲基红试验（M.R） ： 大肠杆菌与产气肠杆菌在利用葡萄糖进行发酵时，前者可产生大量的混合酸，使pH4.5；后者则产生大量的中性化合物丁二醇，pH4.5，因此在发酵液中加入甲基红试剂时，前者呈红色，后者呈黄色。,葡萄糖 乳酸 丙酮酸 乙醛 乙酰CoA 甲酸 乙醇 乙酰乳酸 二乙酰 3-羟基丁酮 2,3-丁二醇,CO2 H2,-乙酰乳酸合成酶,-乙酰乳酸脱羧酶,2,3-丁二醇脱氢酶,一些细菌具有-乙酰乳酸合成酶系而进行丁二醇发酵。,EMP,产气杆菌,大肠杆菌,大肠杆菌,3 V.P.试验,碱性条件 氧,红色化合物 （与培养基中精氨酸的胍基结合）,发酵途径：,葡萄糖丙酮酸乙酰甲基甲醇 二乙酰红色化合物 + 胍基化合物 葡萄糖丙酮酸,大肠杆菌 产气杆菌,4 柠檬酸盐利用试验：,有些细菌如产气肠杆菌能利用柠檬酸盐作为碳源，产生碱性化合物，使培养基的 pH 升高，当加入溴麝香草酚蓝指示剂时，培养基会由绿色变为深蓝色。,I M Vi C试验,VP test,Citrate utilization test,Indol test,Methyl test,常用于肠道杆菌的鉴定,5 硫化氢试验：,有些细菌能分解含硫的氨基酸，产生硫化氢，当其遇到培养基中的铅或铁盐时，形成黑色的沉淀物。,实验材料,菌种： 大肠杆菌 、产气杆菌、变形杆菌 培养基： 蛋白胨水培养基（吲哚试验） 葡萄糖蛋白胨水培养基（甲基红试验和伏普试验） 柠檬酸盐斜面培养基、 醋酸铅培养基（硫化氢试验）,实验步骤,一 接种与培养 1 用接种针将大肠杆菌 、变形杆菌分别穿刺接入2支醋酸铅培养基 2 将大肠杆菌、产气杆菌分别接种于2支蛋白胨水培养基（吲哚试验）、 4支葡萄糖蛋白胨水培养基（甲基红试验和V.P.试验）中，置37培养24 -48h 。 3 柠檬酸盐斜面培养基 4 对照（所有同学共用） 二 结果观察(时间),2、学生按实验书所介绍的操作方法进行生化反应试验，将实验 结果填入下表中（六人一组结果共享）,3 思考题：见书p120思考题第1题,硫化氢试验 培养24h后观察黑色硫化铁的产生。 吲哚试验 在培养24h后的蛋白胨水培养基中加入3-4滴乙醚，摇动数次，静置1-3min，待乙醚上升后，沿试管徐徐加入2滴吲哚试剂，在乙醚和培养物之间产生红色环状物为阳性反应。 甲基红试验 在培养24h后的葡萄糖蛋白胨水培养基内加入甲基红试剂2滴，培养基变红者为阳性，变黄者为阴性。（注意：甲基红试剂加得过多，可出现假阳性现象。） 伏普试验 在培养24h后的葡萄糖蛋白胨水培养基内加入510滴40KOH，然后加入等量的5-萘酚溶液，用力振荡，再放入37温箱中保温1530分钟。反应物呈红色者，为伏普反应阳性。