PTEN和P27蛋白在胃癌组织中表达与临床病理特征的相关性.doc

PTEN和P27蛋白在胃癌组织中表达与临床病理特征的相关性 作者：田东 吴淑华 马振滨 徐立萍 牟清海 朱玉红 吕增华【摘要】 目的 探讨PTEN和P27蛋白在胃癌组织中的表达及与胃癌各项临床病理特征的关系，并探讨两者的相关性。方法 采用SP免疫组化方法检测PTEN和P27蛋白在65例胃癌组织和20例正常胃粘膜中的表达情况。结果 在胃癌中的PTEN蛋白阳性率(47.69%)显著低于正常胃粘膜(100%, P0.05)；PTEN蛋白表达与分化程度(r= -0.2907,P0.05)、浸润深度(r= -0.2615,P0.05)、淋巴结转移(r=-0.2597,P0.05)、临床分期(r=-0.2577,P0.05)呈负相关。在胃癌中P27蛋白阳性率(41.54)显著低于正常胃粘膜(95%, P0.05)，P27蛋白表达与分化程度(r= -0.2608,P0.05)、浸润深度(r= -0.3231,P0.05)、淋巴结转移(r= -0.2833,P0.05)、临床分期(r= -0.3031,P0.05)呈负相关。胃癌中P27蛋白表达与PTEN表达呈正相关（P0.05)。结论 在胃癌进展中PTEN蛋白表达的缺失和降低可能导致P27蛋白表达减少，使其不能有效发挥细胞周期负调控因子的抑瘤作用，使得瘤细胞具有更高的恶性程度。 【关键词】 胃肿瘤；P27蛋白；PTEN蛋白；免疫组织化学 【Abstract】 Objective To investigate the correlation of PTEN and P27 protein expression with the clinicopathological features of gastric carcinoma, and the correlation between expression of PTEN and P27 in carcinoma of the stomach.Methods PTEN and P27 protein expression was evaluated in the tissue of 65 human gastric carcinoma as well as 20 cases normal gastric mucosa using immunohistochemistry (SP method). Results The PTEN labeling frequency in gastric carcinoma (47.69%) was significantly lower than that in normal gastric mucosa(100%，P0.05). the PTEN protein expression in gastric carcinoma was positively correlated with poor differentiation(r=-0.2907,P0.05), deep invasion(r=-0.2615,P0.05), lymph node metastasis (r=-0.2597,P0.05), and clinical staging(r=-0.2577, P0.05).P27 labeling frequency in gastric carcinoma (41.54%) was significantly lower than that in normal gastric mucosa (95%,P0.05), The P27 protein expression was also correlated with poor differentiation(r=-0.2608,P0.05), deep invasion(r=-0.3231,P0.05), lymph node metastasis (r=-0.2833,P0.05), and clinical staging (r=-0.3031,P0.05). PTEN expression was positive correlated with P27 in gastric carcinoma.Conclusion The decrease of P27 protein expression caused by the deletion and descent of PTEN protein expression cannot effectively play an anti-oncogene role in negative regulation of the cell cycle,which makes the tumor cells more malignant. 【Key words】 stomach neoplasms ,P27 protein,PTEN protein,immunohistochemistry PTEN(phosphatase and tensin homolog deleted on chromosome ten)是新近发现的一种位于10号染色体(10q23)的抑癌基因，在许多肿瘤如胶质母细胞瘤、乳腺癌、前列腺癌、甲状腺癌、黑色素瘤等和肿瘤细胞株中存在该基因的突变。目前对PTEN基因蛋白的表达，尤其是胃癌组织中PTEN蛋白表达研究较少。p27为近年新发现的一种抑癌基因，其表达产物P27蛋白参与调控细胞周期和细胞凋亡，为细胞周期负性调控因子。本文利用免疫组织化学方法检测两种基因蛋白在胃癌组织中的表达，旨在探讨PTEN和P27蛋白在胃癌发生发展中的作用及临床意义。 1 材料与方法 1.1 临床资料 收集2003年12月2004年6月滨州医学院附属医院胃镜活检标本正常胃粘膜20例，同时收集同期普外科胃癌术后大体标本65例，其中男性38例，女性27例，中位年龄54岁。分化程度：高中分化腺癌24例，低分化腺癌41例；浸润深度：肌层21例，浆膜及浆膜外44例；转移情况：淋巴结转移42例；临床分期：期10例，期17例，期22例，期16例。所选胃癌病例均行胃大部切除或全胃切除加淋巴结清扫术，术前均未行化放疗，并且排除胃癌家族史。 1.2 方法 所有标本常规10%中性福尔马林固定、石蜡包埋，4 m厚连续切片，分别做HE染色和免疫组化检测，免疫组化采用SP法。小鼠抗人PTEN、P27单克隆抗体（即用型）及试剂盒均购自北京中杉金桥生物技术有限公司。用PBS代替一抗作阴性对照。 1.3 结果判断 在400倍光镜下观察，以细胞内出现棕黄色颗粒为阳性，根据着色深浅程度及阳性细胞数量进行评估。对表达强度进行半定量评估分级，即：不着色为0分，浅黄色为1分，深黄色为2分，黄褐色为3分；计数阳性细胞百分率。将两者相乘，得免疫组化值H：H 0.5(-)，0.5 H1(+)，1 H1.5(+)，1.5 H(+)。 1.4 统计学处理 用2检验法比较各组间比率的差异。全部数据均采用统计学软件SPSS10.0分析处理。 2 结果 2.1 PTEN和P27蛋白在正常胃粘膜组织和胃癌中的表达，见表1。表1 PTEN和P27蛋白在正常胃粘膜组织和胃癌中表达 PTEN蛋白着色主要定位于胞核；P27蛋白着色主要定位于细胞核，细胞质亦有部分着色；在胃癌中的PTEN蛋白阳性率为47.69%，显著低于正常胃粘膜(100%，P0.05)。胃癌中的P27蛋白阳性率为41.54%，显著低于正常胃粘膜组织95%(P0.05）。 2.2 PTEN和P27蛋白表达与胃癌各项临床病理因素的关系，见表2。表2 PTEN和P27蛋白表达与胃癌各项临床病理因素的关系PTEN与P27蛋白表达与患者年龄、性别、肿瘤大小、部位无关(P0.05)，与分化程度、浸润深度、淋巴结转移、临床分期有关（P0.05）。 2.3 PTEN与P27蛋白表达的关系，见表3。表3 胃癌中P27和PTEN蛋白表达的关系PTEN和P27蛋白在癌组织中表达存在着正相关关系，P0.05，相关系数rs=0.3827。 PTEN和P27蛋白在癌组织中表达阳性率分别为47.69%和41.54%，PTEN虽高于P27，但无统计学意义(P0.05）。 3 讨论 3.1 PTEN基因与胃癌的关系 PTEN基因于1997年首次被发现。此前已发现很多癌基因具有蛋白激酶活性，学者们推测应该存在一种抑癌基因，它所编码的蛋白质具有磷酸酶作用，PTEN的出现使这一设想得到证实，因而引起国际社会的广泛关注4。PTEN通过对3,4,5-三磷酸肌醇(PIP3)的去磷酸化作用影响PI-3K/AKT信号通道，使肿瘤细胞停滞于G1期和/或引起肿瘤细胞的凋亡；通过对焦点粘附激酶(FAK)的去磷酸化作用影响整合素介导的聚焦粘附过程，抑制肿瘤细胞的浸润和转移，从而发挥抗肿瘤作用，故PTEN基因的突变、缺失或表达产物的失活等，影响肿瘤的发生和发展。但是在胃癌中，PTEN基因的编码区突变率极低，且现在所发现的突变多位于非编码区，而PTEN蛋白的阴性表达率在20%52%之间，推测PTEN蛋白的缺失在胃癌的发生发展中起重要作用。本研究利用免疫组化检测PTEN蛋白表达，结果显示胃癌中PTEN蛋白表达明显低于正常胃粘膜，且在胃癌进展过程中，PTEN阳性率逐渐降低，结果提示，PTEN为胃癌负相关因子，胃癌的发生与PTEN蛋白表达水平下调可能有一定关系。 PTEN蛋白的表达与恶性肿瘤的生物学行为及部分临床资料有密切的关系，尤其对中晚期肿瘤，对此文献有较一致的认识5。本研究显示PTEN蛋白表达水平与性别、年龄、肿瘤大小、部位无相关性(P0.05)，与分化程度、浸润深度、淋巴结转移及临床分期有关，提示其在胃癌的发生及演进过程具有重要作用，这与其他癌中观察到的一致6。因此PTEN作为一个新发现的抑癌基因在胃癌的进展、转移、预后中有重要的评价作用，其蛋白表达水平可作为判断胃癌病程和预后的重要参考指标。 3.2 p27基因与胃癌的关系 p27是1994年发现与细胞周期调控有关的抑癌基因3,7，其主要功能是抑制G1期复合物cyclin-CDK的活性，阻止细胞周期G1/S转换，从而抑制细胞增殖。目前已有的研究结果却发现p27基因的缺失、突变与重排在人类肿瘤细胞中是罕见现象，因此，p27与肿瘤关系的研究重点放在其蛋白水平改变上。本实验显示胃癌组织中P27蛋白表达相对于正常胃粘膜组织呈明显下降，且与分化程度、浸润深度、淋巴结转移、临床分期有关（P0.05)。综合实验结果及文献报道，可以认为P27蛋白是胃癌的负相关因子，其蛋白的表达可作为胃癌发生、进展和恶性程度的指标。 3.3 PTEN与p27基因在胃癌中的关系 p27位于PTEN下游，PTEN的表达能诱导p27的表达，进而负性调控细胞周期。文献报道，在脑胶质瘤及甲状腺癌细胞系中，野生型的PTEN可诱导P27蛋白表达增加8。Mamillapalli 等9的研究认为过表达PTEN可以特异性的诱导细胞内P27蛋白表达的上调，PTEN蛋白上调P27蛋白表达的机制与PTEN抑制PIP3激酶途径下调Skp2有关。有研究表明在子宫内膜癌中PTEN表达改变与P27表达下调有关10，而Kurose等11报道在卵巢癌中PTEN和P27表达无相关性。 本研究显示，在胃癌组织中，两者表达有明显的正相关(rs=0.3827)，提示在胃癌进展过程中，PTEN蛋白表达的缺失和降低可能导致P27蛋白表达减少，使其不能有效发挥细胞周期负调控因子的抑瘤作用，使瘤细胞具有更高的恶性程度。【参考文献】 Pennisi E. New tumor suppressor found-twiceJ. Science. 1997,275 (5308):1876-1878.Li J, Yen C, Liaw D, et al. PTEN, a putative protein tyrosine phosphatase gene mutated in human brain, breast, and prostate cancer. Science，1997,275(5308):1943-1947.Polyak K, Kato JY, Solomon MJ, et al. p27Kip1, a cyclin-Cdk inhibitor, links transforming growth factor-beta and contact inhibition to cell cycle arrest. Genes Dev，1994,8(1):9-22.Hopkin K. A surprising function for the PTEN tumor suppressor. Science，1998, 282(5391):1027,1029-.Sano T, Lin H, Chen X,et al. Differential expression of MMAC/PTEN in glioblastoma multiforme: relationship to localization and prognosis. Cancer Res, 1999, 59(8): 1820-.6 Rustia A, Wierzbicki V, Marrocco L,et al. Is exon 5 of the PTEN/MMAC1 gene a prognostic marker in anaplastic glioma J？Neurosurg Rev, 2001, 24(2-3):97-102.7 郭光红，马振滨，边瑞民，等.p27在胃癌中的表达及意义J.滨州医学院学报,2006，29（1）：6-8.8Zhu X, Kwon CH, Schlosshauer PW, et al. 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