细菌的血清学及分子生物学检测.ppt

细菌感染的非培养检测方法,华中科技大学同济医院检验科,主要方法,免疫学检测 分子生物学检测 细菌毒素检测 动物实验,免疫学检测,Ag+Ab AgAb 用已知抗体或抗原来检测未知抗原抗体,抗体检测,已知抗体检测未知抗原：效价（或滴度）的升高 诊断血清 多价血清 单价血清 因子血清,抗原检测,凝集试验 玻片凝集试验 乳胶凝集试验 反向间接凝集试验 SPA协同凝集试验 免疫荧光技术 ELISA,含A蛋白 的金葡菌,IgG类抗体,结合IgG的金葡菌,抗 原,凝集,协同凝集试验,细菌毒素的检测,内毒素的检测：G-细菌感染 外毒素的检测：待检菌的鉴定，并区分产毒株与非产毒株,动物实验,分离和鉴定病原微生物 测定细菌的毒力 制备免疫血清 建立致病动物模型 取动物的血清配制培养基 用于生物制品或一些药物的安全、毒性、疗效检验,细菌感染的分子生物学检测,分子诊断极大的节约时间,针对传染病的分子诊断技术被国际权威的自然、科学杂志列为改善发展中国家人民健康的十大生物技术之首！,细菌感染的分子生物学检测,核酸杂交 聚合酶链反应（PCR） 生物芯片技术,核酸杂交,核酸探针：带有标记物的、能与特定核酸序列发生特异性互补的已知序列核酸片段。 核酸杂交方法： 1.斑点杂交 2.菌落原位杂交 3.Southern印迹 4.Northern印迹,核酸杂交在临床微生物检测中的应用,细菌分类鉴定 细菌快速鉴定 细菌耐药性的检测 细菌毒素的检测 细菌流行病学调查,聚合酶链反应（polymerase chain reaction,PCR）,PCR扩增产物的分析,凝胶电泳分析法 斑点杂交法 酶谱分析法 序列分析法,PCR在临床微生物检验中的应用,细菌的快速检测 细菌毒素的检测 细菌的耐药性的检测 细菌流行病学调查,基因芯片技术,最早的生物芯片,概念源于计算机芯片,基本原理：微阵列技术，核苷酸固定到固体支持物上，将处理好的样品与其进行杂交，以实现对所测样品基因的大规模检验。,特点：高通量、高集成、微型化、平行化、多样化和自动化,1998年度世界10大科技进展之一,发展迅速，应用日益广泛,基因芯片应用存在的问题,不同实验室结果的比较,芯片价格，实验成本,微阵列质量控制MAQC,蛋白质芯片的强势挑战,自身存在的技术缺陷,蛋白质芯片技术,双向凝胶电泳(2-DE)和质谱(MS)分析鉴定技术为蛋白质组学研究的两大核心技术,蛋白质芯片是指以蛋白质分子作为配基,将其固定在固相载体的表面,形成的蛋白质微阵列,分类：生物化学型芯片、化学型芯片和缩微芯片,蛋白质芯片技术是继基因芯片之后，被称为横扫生物科学和医学界的一次“迷你”革命,分子诊断的质量控制,标准化操作程序（SOP) 标准化实验室 室内质控和室间质评,The FDA is Coming!,方法原理、实验步骤、使用指征、报告格式，结果、标本、临床有效性等因素,传统方法目前不可替代 快速简便的分子诊断技术越来越普及 Jan Weile & Cornelius Knabbe；Current applications and future trends of molecular diagnostics in clinical bacteriology；Anal Bioanal Chem (2009) 394:731742,本章要求掌握的内容,细菌感染的病原学诊断方法有哪些？ 细菌形态学检查包括：不染色标本检查法和染色标本检查法 细菌染色常用染料：碱性染料、酸性染料、复合染料 常用染色方法：革兰染色、抗酸染色和荧光染色,本章要求掌握的内容,常用