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文档简介

,（补充知识）基因的结构 1、原核细胞的基因结构,与RNA聚合酶结合位点,终止子,RNA聚合酶能够识别调控序列中的结合位点，并与其结合。,转录开始后，RNA聚合酶沿DNA分子移动，并以DNA分子的一条链为模板合成RNA。,转录完毕后，RNA链释放出来，紧接着RNA聚合酶也从DNA模板链上脱落下来。,2、真核细胞的基因结构,编码区,与RNA聚合酶 结合位点,启动子,终止子,编码区上游,编码区下游,有调控作用的核苷酸序列，包括位于编码区上游的RNA聚合酶结合位点。,1.2基因工程的 基本操作程序,为什么要获得目的基因,为什么要把目的基因 与载体结合,受体细胞是指什么,为什么要进行检测,基因文库的构建模式图,通过对 受体菌的 培养而 储存基因,,由mRNA反转录形成cDNA,mRNA DNA单链 DNA单链 RNA DNA杂交分子 RNA DNA杂交分子 单链DNA 单链DNA 双链DNA,逆转录,使RNA降解,复制,核酸酶H,?,?,形成氢键,第一步：获取目的基因 方法：,1.从基因文库中获取目的基因。 2.利用PCR技术合成DNA,PCR:聚合酶链式反应.是以DNA变性、复制的 某些特性为原理设计的. 前提条件是必须对目的基因有一定的了解， 需要设计引物。,PCR原理图,PCR的过程,（1）以DNA 片段作模板，在 90 高温下，分开成 为 单链DNA。 （2）以DNA 小段寡聚核苷酸做引物，在 50 的温度下，找到可以配对的正链和负链，形成互补结合 （3）在 70 高温下，合成一条与模板 DNA 单链（正链或负链）互补结合的DNA新链。 （4）以上三个步骤周而复始，即反应体系的温度从 90oC- 50oC- 75oC，目的基因的量不断增加 反应体系中经历：变性淬火合成重复 。 结果：目的基因的量成指数形式扩增（2n),高温的作用是？,引物是怎样获得的？,四种脱氧核苷三磷酸（4 X dNTP),酶,高温 DNA 聚合酶 （Taq 酶），,原料,第二步： 基因表达载体的构建,核心,目的基因与载体结合成为重组基因,需要 哪两种 工具,总结：表达载体需由哪几部分组
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