高效液相色谱法测定参芪健胃颗粒中芍药苷的含量.doc

高效液相色谱法测定参芪健胃颗粒中芍药苷的含量 作者：余树珍，张红梅，陆春燕【关键词】 参芪健胃颗粒；,芍药苷；,高效液相色谱法摘要：目的测定参芪健胃颗粒中芍药苷的含量。方法采用高效液相色谱法（HPLC）测定含量，色谱柱：Kromasil 1005 C18柱（4.6 mm250 mm）。流动相：甲醇水(3862)，检测波长：230 nm，流速：0.7 ml/min，柱温：30。结果该条件下芍药苷与其它组分分离良好，芍药苷在050 g/ml呈良好的线性关系，r=0.999 2，平均回收率为97.90%，RSD=1.186%。3批供试品含芍药苷分别为0.024 2%，0.027 4%，0.021 7%，平均为0.024 4%。结论HPLC法可用于参芪健胃颗粒的质量控制。关键词：参芪健胃颗粒； 芍药苷； 高效液相色谱法Determination of Paeoniflorin in Shenqijianwei Granule by HPLCAbstract：ObjectiveTo establish the determination method of Shenqijianwei Granule. MethodsHPLC was adopted with Kromasil 100-5 C18(4.6 mm250 mm).The mobile phase corsrsted of acetonitrile：Methanolwater（3862）. The detection wavelength was at 230 nm. The flow rate was 0.7 ml/min, and the column temperature was at 30.ResultsThe linearity of this method was well with a good seperation . The calibration curve was linear (r=0.999)in the range of 050g/ml for Paeoniflorin. The average recovery was 97.90%，RSD=1.186%. The contents of paeoniflorin were 0.0242%，0.0274%，0.02166% in three batch of sample product respectively,and the average content of paeoniflorin was 0.024 43%，ConclusionThe method can be used for the quality control of Shenqijianwei Granule.Key words： Shenqijianwei Granule； Paeoniflorin； HPLC 参芪健胃颗粒用于治疗脾胃虚寒型的慢性萎缩性胃炎，适用于胃脘胀痛，痞闷不适，喜热喜按，嗳气呃逆等症。其处方是以中医理论为指导，由白芍、当归、山楂、黄芪、茯苓、土木香等14味中药提取制成。白芍有效成分芍药苷(paeoniflorin)具有镇静、镇痛、解痉、抗炎等作用1。为了控制本品质量，保证疗效，采用高效液相法测定参芪健胃颗粒中芍药苷的含量，用于该颗粒剂的质量控制。1 仪器与试剂1.1 试剂甲醇为色谱纯，水为纯化水，芍药苷对照品由中国药品生物制品检定所提供（批号：0736-200118）。参芪健胃颗粒（江苏中兴药业有限公司，批号：20060201，20060202，20060203），阴性供试品由江苏中兴药业有限公司自制。1.2 仪器高效液相色谱仪。 1.3 色谱条件JASCO PU-1580泵，JASCO UV-1575检测器（日本），N2000色谱数据处理工作站；JASCO V-530紫外可见分光光度计（日本）；BP211D电子分析天平（德国）； KQ-100DB型数控超声波清洗器（江苏昆山市超声波仪器厂）。色谱柱：Kromasil 100-5 C18柱（4.6 mm250 mm）。流动相：甲醇水（3862），流量：0.7 ml/min；检测波长：230 nm；柱温：30；进样量：10 l；理论板数按芍药苷峰计算应不低于2 0002。2 方法与结果2.1 溶液的配制2.1.1 对照品溶液的制备3精密称取在五氧化二磷减压干燥器中干燥36h的芍药苷对照品10.13 mg，置100 ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，作为贮备液。精密吸取2 ml，置10 ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得。2.1.2 供试品溶液的制备取本品，研细，取约2 g，精密称定，置50 ml容量瓶中，加50%甲醇35 ml，超声处理（功率250W，频率50 kHz）30 min4，放冷，加50%甲醇至刻度，摇匀，取上清液，滤过。精密吸取续滤液5ml，置水浴上蒸干，残渣用5 ml流动相溶解，转移于10 ml容量瓶中，加流动相稀释至刻度，用微孔滤膜（0.45 m）滤过，取续滤液作为供试品溶液。2.1.3 缺白芍阴性供试品溶液的制备配制缺白芍药材的阴性供试品，照供试品溶液制备项下操作，即得。2.2 系统适用性实验分别吸取对照品溶液、供试品溶液、阴性溶液注入色谱仪，记录色谱图，结果见图1。a芍药苷对照品 b供试品 c缺白芍阴性供试品图1 HPLC系统适用性色谱图（略）由图1可见，芍药苷峰保留时间约为8.7min，阴性对照色谱在芍药苷峰位置无假阳性峰，表明其它组分对测定无干扰，芍药苷峰与其它组分的分离度为4.7，理论塔板数以芍药苷峰计算为8163。2.3 线性关系考察精密吸取对照品贮备液0，0.5，1.0，2.0，3.0，4.0，5.0 ml，分别置10 ml量瓶中，加50%甲醇至刻度，摇匀，分别精密吸取10 l，注入色谱仪。以芍药苷的进样量（X）为横坐标，峰面积（Y）为纵坐标，进行线性回归，得回归方程：Y=4.414 6106X - 1.017 2104。2.4 精密度实验精密吸取同一芍药苷对照品溶液（20 g/ml），重复进样5次，各10 l，测定峰面积，结果RSD=0.689%。2.5 稳定性实验对同一供试品溶液在0，1，2，4，8，12 h进样，测定峰面积，结果芍药苷峰面积RSD=0.724%。2.6 重现性实验取同一批供试品（批号：20060201），分别制备5份供试品溶液，测定参芪健胃颗粒的含量，结果表明本法重现性良好，RSD=1.25%。2.7 加样回收率实验 取同批供试品（批号：20060201）6份，每份约1 g，精密称定，分别精密加入2，2.5，3 ml的芍药苷对照品贮备液各2份，按供试品制备与测定方法操作，测定结果见表1。测定结果表明，本方法回收率好，方法可靠。表1 加样回收率实验结果（略）2.8 供试品的测定分别精密吸取对照品与供试品溶液各10 l，注入液相色谱仪，依法测定，以外标注法计算供试品中芍药苷含量。结果见表2。表2 供试品含量测定结果（略）*为每袋中含量3 讨论当以滤液直接进样时，出现峰形不佳，因此将滤液蒸干，用流动相作溶剂，峰形效果大为改善。因参芪健胃颗粒含14味药材，其它成分对芍药苷的干扰比较大。按中国药典2005版白芍的含量测定，以乙腈0.1%磷酸溶液（1486）为流动相，分离效果较好，但保留时间在19 min左右。当加大乙腈比例（1585），其它成分干扰偏大。在选择甲醇水（3862）时，保留时间在9 min左右，干扰少，分离效果理想，因此选择甲醇水（3862）为流动相。参考文献：1 曾水云，杨四海.HPLC测定消糖灵