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JAP-170 因灭汀检测方法.rar

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JAP-170 因灭汀检测方法.rar,JAP-170 因灭汀检测方法.rar

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因灭汀检测方法 分析目标化合物 因灭汀苯甲酸盐（B1a 和B1b）、因灭汀（B1a 和B1b）、因灭汀氨基物（B1a和B1b）、因灭汀甲酰基氨基物（B1a 和B1b）、因灭汀N甲基甲酰基氨基物（B1a 和B1b）、8,9Z因灭汀（B1a） 2仪器设备 带荧光检测器的高效液相色谱仪 （HPLC（FL）和液相色谱-质谱仪 （LC/MS） 3器具 甲硅烷基化具塞试验管 在15mL 具塞试验管中，加满5(vv)二氯二甲基硅烷的甲苯溶液，塞紧。在40水浴中放置10 分钟后，弃去5(vv) 二氯二甲基硅烷的甲苯溶液，用10mL甲苯和10mL甲醇重复洗涤2次。接着，加满甲醇，塞紧，在40水浴中放置10分钟，弃去甲醇，充分干燥。 4试剂 除下列试剂外，使用附录2所列试剂。 荧光衍生物用乙腈：将乙腈用适量分子筛脱水。 荧光衍生物用乙酸乙酯：将乙酸乙酯用适量分子筛脱水。 5标准品 因灭汀苯甲酸盐：含因灭汀苯甲酸盐92以上(因灭汀苯B1a 甲酸盐和因灭汀B1b 苯甲酸盐的混合物)，熔点为141146。 4” 外氨基4”脱氧除虫菌素B1(以下称“氨基物”。氨基物B1a 和氨基物B1b 的混合物) ：含氨基物91以上，熔点为146148。 4” 脱氧4” 外( N甲酰基)氨基除虫菌素B1(以下称 “甲酰基氨基物” 。甲酰基氨基物B1a 和甲酰基氨基物B1b的混合物)：含甲酰基氨基物82以上，熔点为177180。 4” 脱氧4”外( N甲酰基N甲基) 氨基除虫菌素B1(以下称“N甲基甲酰基氨基物”。N甲基甲酰基氨基物B1a和N甲基甲酰基氨基物B1b的混合物)： 含甲酰基氨基物85以上，熔点为163169。 6试验溶液的制备 a 提取方法 蔬菜 准确称取约1 kg样品，必要时定量加入适量水，搅碎混合均匀后，称取相当于20.0g样品的量。 加入100 mL丙酮，搅拌3分钟后，用滤纸抽滤于300 mL磨口减压浓缩器中。取出滤纸上的残留物，加入50mL丙酮，搅拌3分钟后，按上述同样操作，合并滤液于磨口减压浓缩器中，40以下浓缩至约30mL。 茶叶 将样品粉碎，通过420m的标准网筛后，称取其1.00g于25mL聚乙烯离心管中。加入20mL丙酮，用振荡器激烈振荡3分钟后，以7,500g离心分离3 分钟，丙酮层移入磨口减压浓缩器中。离心管的残留物中加入10mL丙酮，按上述同样操作， 合并丙酮层于上述磨口减压浓缩器中， 40以下除去丙酮。 残留物中加入2mL甲醇溶解。 b 净化方法 萝卜以外的作物 在十八烷基甲硅烷基化硅胶小柱(1,000mg)中，注入a 提取方法中所得的溶液。再用5mL水：甲醇(19：1)混合溶液洗涤磨口减压浓缩器，注入小柱，重复操作2次后，将小柱离心分离(500g)吸除柱中水分。 接着，在十八烷基甲硅烷基化硅胶小柱上连接酰胺丙基甲硅烷基化硅胶小柱。用5mL甲醇洗涤磨口减压浓缩器，注入连接的小柱，重复操作2次后，再注入10mL甲醇，合并流出液于100mL磨口减压浓缩器中。再取下弃去十八烷基甲硅烷基化硅胶小柱。酰胺丙基甲硅烷基化硅胶小柱中注入10mL乙醇，合并流出液于上述磨口减压浓缩器中，40以下除去甲醇和乙醇。 残留物中加入2mL乙酸乙酯：甲醇(1：1)混合溶液溶解，移入15mL甲硅烷基化具塞试验管中，重复操作2次后，40以下减压除去乙酸乙酯和甲醇，再在40以下通氮气至完全干燥。 萝卜 在十八烷基甲硅烷基化硅胶小柱(1,000mg)中，注入a 提取方法中所得的溶液。用5mL水：甲醇(19：1)混合溶液洗涤磨口减压浓缩器，注入小柱，重复操作2次，将小柱离心分离(500g)吸除柱中水分。 接着，在十八烷基甲硅烷基化硅胶小柱(1,000mg)上顺次连接丙磺酰基甲硅烷基化硅胶小柱和酰胺丙基甲硅烷基化硅胶小柱。用5mL甲醇洗涤磨口减压浓缩器， 注入连接的小柱， 重复操作2次后， 再注入10mL甲醇， 合并这些流出液于100mL磨口减压浓缩器中。取下弃去十八烷基甲硅烷基化硅胶小柱。在丙磺酰基甲硅烷基化硅胶小柱和酰胺丙基甲硅烷基化硅胶小柱的连接柱中注入20mL 1乙酸铵(wv)甲醇溶液，合并流出液于上述磨口减压浓缩器中。再取下弃去丙磺酰基甲硅烷基化硅胶小柱。酰胺丙基甲硅烷基化硅胶小柱中注入10mL乙醇，合并流出液于上述磨口减压浓缩器中，40以下除去甲醇和乙醇。 残留物中加入5mL水，注入十八烷基甲硅烷基化硅胶小柱(360mg)中，重复操作2次，注入洗液，重复操作2次后，再注入10mL水洗净。吸除柱中水分后，用2mL甲醇洗涤上述磨口减压浓缩器，注入小柱，重复操作2次后，注入10mL甲醇，收集流出液于50mL磨口减压浓缩器中，在40以下减压除去甲醇。 残留物溶解2mL乙酸乙酯：甲醇(1：1)混合溶液中，移入15mL甲硅烷基化具塞试验管中，重复操作2次，40以下减压除去乙酸乙酯和甲醇，再在40以下通氮气至完全干燥。 茶叶 在十八烷基甲硅烷基化硅胶小柱(1,000mg)下面连接酰胺丙基甲硅烷基化硅胶小柱，注入a 提取方法中所得的溶液。用2mL甲醇洗涤磨口减压浓缩器，注入洗液后，再注入10mL甲醇，合并流出液于磨口减压浓缩器中。取下弃去十八烷基甲硅烷基化硅胶小柱。酰胺丙基甲硅烷基化硅胶小柱中注入10mL乙醇，合并流出液于上述减压浓缩器中，40以下除去甲醇和乙醇。残留物溶解在2mL乙酸乙酯：甲醇(1：1)混合溶液中，移入15mL甲硅烷基化具塞试验管，重复操作2次，40以下减压除去乙酸乙酯和甲醇，再在40以下通氮气至完全干燥。 c 荧光衍生物 用0.2mL荧光衍生物用乙酸乙酯和1mL荧光衍生物用乙腈溶解b 净化方法所得的残留物。再加入0.1mL 1甲基咪唑，混合均匀后，塞紧，冰冷10 分钟。接着，加入0.3mL现配的无水三氟乙酸：乙腈（1：2)混合溶液，混合均匀，塞紧，在20放置10 分钟后，加乙腈准确至2.0mL，此为试验溶液。 d 标准曲线 将因灭汀苯甲酸盐、氨基物、甲酰基氨基物和N甲基甲酰基氨基物的标准曲线用标准溶液配制成乙腈溶液， 将移入甲硅烷基化具塞试验管中标准溶液的乙腈完全除去后，按c 荧光衍生物同样操作。 7、操作方法。 a 定性试验 按下列操作条件进行试验，试验结果应与因灭汀苯甲酸盐、氨基物、甲酰基氨基物和N甲基甲酰基氨基物的标准品按6 试验溶液的制备中c 荧光衍生物化同样操作所得的结果一致。 操作条件 柱填充剂：十八烷基甲硅烷基化硅胶 （粒径 3m） 柱：内径 4.6 mm、长150 mm的不锈钢管。 柱温： 50 检测器： 激发波长 365 nm、发射波长 470 nm 流动相：A：乙腈，B：水。调整流速使因灭汀B1a约19分钟流出。 浓度梯度：在A 80%送液5分钟后，5分钟内由A80变为90的浓度梯度送液。再在20分钟内由A90变为93的浓度梯度送液后， 2分钟内由A93变为100的浓度梯度送液。再用A100%送液5分钟后，2分钟内由A100变为80的浓度梯度送液。 b 定量试验 根据与a定性试验相同的试验条件所得的试验结果，用峰面积法分别对因灭汀苯甲酸盐、氨基物、甲酰基氨基物和N甲基甲酰基氨基物进行定量，求出因灭汀苯甲酸盐、氨基物、甲酰基氨基物和N甲基甲酰基氨基物的含量。按下式换算成因灭汀苯甲酸盐的含量。 因灭汀苯甲酸盐的換算含量(mg/kg)AB1.16C1.12D1.10 A：因灭汀苯甲酸盐的含量(mg/kg) B：氨基物的含量(mg/kg) C：甲酰基氨基物的含量(mg/kg) D：N甲基甲酰基氨基物的含量(mg/kg) c 确证试验 按照下列试验条件，对6试验溶液的制备中b 净化方法所得的试验溶液用液相色谱-质谱仪测定。试验结果应与标准品的一致。此外，必要时用峰面积法进行定量。 操作条件 柱填充剂：十八烷基甲硅烷基化硅胶（粒径 3m）。 柱：内径2.0 mm、长 150mm的不锈钢管。 柱温： 50 流动相 A：乙腈：乙酸(100：0.2)混合溶液；B：乙腈：水(0.2：100)混合溶液。调整流速使因灭汀B1a约20分钟流出。 浓度梯度：