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JAP-059 氟菌唑检测方法.rar

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JAP-059 氟菌唑检测方法.rar,JAP-059 氟菌唑检测方法.rar

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氟菌唑检测方法 1分析目标化合物 氟菌唑、氟菌唑代謝物4-氯- ,-三氟- N-(1-氨基-2-丙氧基亚乙基)-o-甲苯胺 2仪器设备 带紫外分光光度检测器的高效液相色谱仪。 3试剂 除下列试剂外，使用附录2所列试剂。 柱色谱用合成硅酸镁：粒径150250m，在130加热12小时以上，转移到干燥器中冷却。加入5的水。 0.01molL碳酸盐缓冲液：在0.8mL 0.2molL碳酸钠溶液与9.2mL 0.2mol/L碳酸氢钠溶液中加水至200mL。 氟菌唑和4-氯- ,-三氟- N-(1-氨基-2-丙氧基亚乙基)-o-甲苯胺的标准溶液： 将10mg氟菌唑和10mg及4-氯- ,-三氟- N-(1-氨基-2-丙氧基亚乙基)-o-甲苯胺溶解在乙腈中，至100mL。 0.05molL磷酸缓冲溶液：在55.4mL 0.5molL磷酸二氢钾溶液和48.2mL 0.5molL磷酸氢二钠溶液中，加水至1000mL(pH6.8)。 4标准品 氟菌唑：含氟菌唑99以上，熔点为63.5。 4-氯- ,-三氟- N-(1-氨基-2-丙氧基亚乙基)-o-甲苯胺：含4-氯- ,-三氟- N-(1-氨基-2-丙氧基亚乙基)-o-甲苯胺98以上。 5试验溶液的制备 a 提取方法 谷类和种子类 将样品粉碎，过420m标准网筛后，称取其20.0g，加入40mL水，放置2小时。 加入100mL甲醇，用振荡器激烈振荡30分钟后，静置，用涂布1cm厚硅藻土的滤纸抽滤，滤液转移到500mL分液漏斗中。取出滤纸上的残留物，加入50mL甲醇，用振荡器激烈振荡30分钟后，按上述同样操作，合并滤液于上述500mL分液漏斗中。 加入200mL 5氯化钠溶液和100mL二氯甲烷(特级)，用振荡器激烈振荡5分钟后，静置，二氯甲烷层移入300mL三角瓶中。水层中加入100mL二氯甲烷(特级)，按上述同样操作，合并二氯甲烷层于上述三角瓶中。加入适量无水硫酸钠，不时摇动、混合，放置15分钟后，滤入磨口减压浓缩器中。再用20mL二氯甲烷(特级)洗涤三角瓶，以此洗液洗涤滤纸上的残留物，合并洗液到减压浓缩器中。40以下除去二氯甲烷。残留物中加入5mL丙酮：正己烷（1：19）混合溶液溶解。 水果、蔬菜和末茶 水果和蔬菜：准确称取约1kg，必要时定量加入适量水，搅碎混和均匀后，称取相当于20.0g样品的量，加入20mL 0.05molL磷酸盐缓冲液。 茶末：称取20.0g样品，加入20mL 0.05molL磷酸盐缓冲液。 加入100mL甲醇，用振荡器激烈振荡30分钟后，静置，用涂布1cm厚硅藻土的滤纸抽滤，滤液转移到500mL分液漏斗中。取出滤纸上的残留物，加入50mL甲醇，用振荡器激烈振荡30分钟后，按上述同样操作，合并滤液到上述500mL分液漏斗中。测定滤液的pH，如果偏酸性，则用0.1molL的氢氧化钠溶液调整到pH7左右。 加入200mL 5氯化钠溶液和100mL二氯甲烷(特级)，用振荡器激烈振荡5分钟后，静置，二氯甲烷层移入300mL三角瓶中。水层中加入100mL二氯甲烷(特级)，按上述同样操作，合并二氯甲烷层于上述三角瓶中。加适量无水硫酸钠，不时振摇、混合，放置15分钟后，滤入于磨口减压浓缩器中。再用20mL二氯甲烷(特级)洗涤三角瓶，以此洗液洗涤滤纸上的残留物，合并洗液于减压浓缩器中。40以下除去二氯甲烷。残留物中加入5mL丙酮：正己烷（1：19）混合溶液溶解。 末茶以外的茶 将4.00g样品浸泡在240mL 100的水中，室温下放置5分钟后，过滤。 十八烷基甲硅烷基化硅胶小柱(360mg)中注入5mL乙腈和5mL水， 弃去流出液。 柱中注入30mL上述滤液后， 注入10mL水， 10mL乙腈：水(3：7)混合溶液，弃去流出液。接着注入5mL乙腈：水(4：1)混合溶液，收集流出液，此为试验溶液(必要时按b 净化方法进行净化。)。 b 净化方法 在内径15mm，长300mm的色谱管中注入10g悬浮在丙酮：正己烷(1：19)混合溶液中的柱色谱用合成硅酸镁，其上端再填入约5g无水硫酸钠，放出丙酮：正己烷(1：19)混合容液至柱上端留有少量丙酮：正己烷(1：19)混合溶液。柱中注入a 提取方法所得的溶液后， 注入50mL丙酮： 正己烷(1： 19)混合溶液， 弃去流出液。 再注入100mL丙酮：正己烷(1：9)混合溶液，收集40mL最初的流出液于200mL三角瓶(I)中，收集随后的60mL流出液于另一200mL三角瓶(II)中。 各流出液分别转移到磨口减压浓缩器中，40以下除去丙酮和正己烷。残留物中分别加乙腈溶解，准确至10mL，前者作为4-氯- ,-三氟- N-(1-氨基-2-丙氧基亚乙基)-o-甲苯胺的试验溶液，后者作为氟菌唑的试验溶液。 4-氯- ,-三氟- N-(1-氨基-2-丙氧基亚乙基)-o-甲苯胺的试验溶液按6 操作方法中a 定性试验进行测定， 当存在杂质干扰使测定困難时按以下操作进行。 收集在三角瓶(I)中流出液的残留物中加入100mL二氯甲烷溶解，转移到300mL分液漏斗(I)中。加入50mL 1molL盐酸溶液，振荡混匀后，静置，水层移到300mL分液漏斗(II)中。二氯甲烷层中加入50mL 1molL盐酸，按上述同样操作，合并水层于分液漏斗(II)中。 加入11mL 10molL氢氧化钠溶液， 再加50mL二氯甲烷 （特级） ，振荡混匀后，静置，二氯甲烷层移入200mL三角瓶中。水层中加入50mL二氯甲烷，按上述同样操作，合并二氯甲烷层到上述200mL三角瓶中。加适量无水硫酸钠，不时振摇、混合，放置15分钟后，滤入磨口减压浓缩器中。再用少量二氯甲烷（特级）洗涤三角瓶，合并洗液到减压浓缩器中，40以下除去二氯甲烷。残留物中加入乙腈溶解，准确至10mL，作为4-氯- ,-三氟- N-(1-氨基-2-丙氧基亚乙基)-o-甲苯胺的试验溶液。 6操作方法 a 定性试验 按下列操作条件进行试验，试验结果应与标准品的一致。 操作条件 柱填充剂：十八烷基甲硅烷基化硅胶（粒径5m）。 柱：内径25mm，长200500mm的不锈钢管。 柱温：40。 检测器：波长238nm。 流动相：乙腈：0.01mol/L碳酸盐缓冲液：水（7：1：2）混合溶液，用4%磷酸调整pH9.0， 测定氟菌唑时调整流速使氟菌唑约10分钟流出。 测定4-氯- ,-三氟- N-(1-氨基-2-丙氧基亚乙基)-o-甲苯胺时，调整流速使4-氯- ,-三氟- N-(1-氨基-2-丙氧基亚乙基)-o-甲苯胺约6分钟流出。 b 定量试验 根据与a 定性试验相同操作条件所得的试验结果，用峰高法或峰面积法分别对氟菌唑和4-氯- ,-三氟- N-(1-氨基-2-丙氧基亚乙基)-o-甲苯胺进行定量，按下式求得包括4-氯- ,-三氟- N-(1-氨基-2-丙氧基亚乙基)-o-甲苯胺的氟菌唑含量。 氟菌唑（包括4-氯- ,-三氟- N-(1-氨基-2-丙氧基亚乙基)-o-甲苯胺）的含量（mg/kg） AB1.17 A：氟菌唑的含量（mg/kg） B：4-氯- ,-三氟- N-(1-氨基-2-丙氧基亚乙基)-o-甲苯胺的含量（m