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文档简介
第六章 细菌和噬菌体的遗传重组,第一节 细菌杂交的关键因子,1、F因子(致育因子)的结构与功能,三个基因丛: 原点 插入基因 转移基因 负责DNA的转移 与细菌结合有关 与性繖毛的形成有关 复制基因 trp复制蛋白 inc决定不相容基因 oriv复制起点,2、F因子在Ecoli中的存在形式,整合(成为染色体的一部分) 高频重组品系(Hfr品系) 与F-菌株杂交时,重组子出现的频率几乎比F+高上1000倍。 F- F+ Hfr F因子整合过程(P226) F因子的切离,游离(与染色体相独立) F- F+,第二节 细菌的连锁图 把细菌染色体的相对基因位子标识出来,中断杂交 重组作图,1、中断杂交,F因子的转移,接合(核酸内切酶),断链向F- cell转移并复制,转移的链在F-中合成双链,DNA转移和合成完成, 连接酶封闭缺口,Hfr F- Thr+leu+azirtonrlac+gal+strs (2x107) X thr-leu-azistonslac-gal-strr (4x108) 肉汤培养液中通气培养 定期取样(隔二分钟一次) 组织捣碎器搅拌,2 4 6 8 10 12 (鉴定菌落的基因型),MM+STR,Hfr中非选择性标记进入F所需时间,转移Hfr基因 时间 0 9 azir 9 azirtonr 11 azirtonrlac+ 18 azirtonrlac+galr 25,越早出现,越接近原点。,不是以1重组值为图距,而是以时间为图距。,混合两种亲本后的时间,2、重组作图,供体仅仅提供一个染色体片段,而受体提供完整的染色体。,(1)特点,只有偶次交换才能进行稳定的重组。 一次重组仅得一种重组子。,(2)作图,重组值重组子总菌落数 X 100 lac-ade+(lac+ade+)+(lac-ade+) X 100% 22%,Hfr品系不同主要是由于F因子插入的位置,方向不同,导致与F-杂交的起点不同。,第三节 噬菌体的遗传重组,(一)遗传重组现象,噬菌体T2的两对性状,h:寄主范围 h+ E.coli B(B/2) 噬菌斑半透明 突变型h E.coli B(B/2) 噬菌斑透明,r: 噬菌斑形态 r+ 小噬菌斑,周围有朦胧光环 突变型r 大噬菌斑,边缘清晰,hr+ X h+r (放在E.coliB平板上生长混合感染) E.coliB 子代噬菌体混合平板(E.coliB 和E.coliB /2)四种噬菌斑,重组值 重组噬菌斑数总数 X 100 (h+r+ + hr)总噬菌斑数,(二)噬菌体作图,不同
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