《维生素的测定》PPT课件.ppt

维生素的测定,一、维生素概述 二、VC及其测定 三、VA及其测定,学习目标,1、了解维生素的基本理论知识 2、理解维生素C的生理学功效 3、掌握维生素C氧化还原滴定的原理、方 法 4、了解维生素A的生理学功效 5、掌握维生素A的三氯化锑比色法测定的原理和方法,Vitamin 维他命 维生素 人体中微量存在（mg，g）， 但不可缺少，具有重要的生理调节功能,水溶性维生素：Vc B族维生素,脂溶性维生素：VA VD VE VK,维生素概述,表1 维生素的俗名和营养功能,维生素的特点： 外源性：人体自身不可合成，需要通过食物 补充； 微量性：人体需要量很少，以毫克(mg)或微克(g)计 调节性：维生素能够调节人体新陈代谢或能量转变； 特异性：缺乏了某种维生素后，人体将呈现特有的病态。,一、维生素C的营养学功效,1、VC的发现,早期的海上旅行引起了人们对坏血病的重视，船队离开港口34个月，船员往往会 患上坏血病，这是由于海上旅行缺乏新鲜蔬菜和水果的缘故。 1932年英国军医从柠檬汁中分离出具有抗坏血病的晶状物质，1933年瑞士科学家合成了维生素C，又叫做抗坏血酸。,2、VC的生理功能 (1)提高人体的免疫力; (2)预防坏血病; (3) 促进牙齿和骨骼的生长，防止牙床出血；,(4)治疗贫血; (5)促进骨胶原的生物合成，利于伤口的更快愈合 ; (6)减少色素沉着，美白,3、VC的缺乏症,4、VC的食物来源,二、VC的测定,Vc的性质 1、结构中的烯二醇，具有较强的还原性 2、分子结构中具有共轭双键，在稀盐酸溶液中，在243nm有最大吸收，在中性或碱性条件下，波长红移至265nm,1、氧化还原滴定法：2，6-二氯靛酚法 2、分光光度法 : 2，4-二硝基苯肼法 3、高效液相色谱 4、荧光法,（一） 2，6-二氯靛酚法,1、实验原理： 抗坏血酸与2，6-二氯靛酚（红色染料）发生氧化还原反应，本身被氧化成脱氢抗坏血酸，在没有杂质干扰时，一定量的样品提取液还原标准2,6-二氯靛酚的量与样品中所含维生素C的量成正比，当样品中的VC被作用完之后，稍过量的染料使溶液变为粉红色，即为滴定终点。根据2，6-二氯靛酚消耗的量计算样品中所含维生素C的含量。,2、实验试剂： (1)草酸溶液：溶解20g草酸结晶于200mL水中，然后稀释至1000mL。 (2)抗坏血酸标准溶液：准确称取20mg抗坏血酸，溶于1草酸溶液中，移入lOmL量瓶中，并用1草酸溶液稀释至100mL，混匀，置冰箱中保存。 使用时吸取上述抗坏血酸5mL，置于50mL容量瓶中，用1草酸溶液定容。此标准使用液每毫升含0.02mg维生素C。 (3)2，6-二氯靛酚溶液：称取碳酸氢钠52mg， 溶于200mL沸水中,然后称取2.6-二氯靛酚50mg， 溶解在上述碳酸氢钠的溶液中， 置于冰箱中过夜， 次日过滤置于250mL量瓶中，定容至刻度。 此液应贮于棕色瓶中并冷藏， 每星期至少标定1次。,3、标准溶液的标定 标定方法：取5mL已知浓度的抗坏血酸标准溶液，加入1草酸溶液5mL，摇匀，用上述配制的标准溶液滴定至溶液呈粉红色,15秒不褪色为止 每毫升标准溶液相当于Vc的毫克数=滴定度(T) CV1M T=- V2 式中： C; 抗坏血酸的浓度(molmL) Vl：抗坏血酸的体积(mL) V2：消耗标准溶液体积(mL) M: 抗坏血酸的摩尔质量(g/mol),4、实验步骤： （1）样品制备：称取适量(50.0-100.0g)样品，加等量的1草酸溶液，倒入组织捣碎机中捣成匀浆。过滤于锥形瓶中备用。 （2）滴定：迅速吸取5-l0mL滤液，置于50mL三角烧瓶中，用标定的2,6-二氯靛酚标准溶液滴定,直至溶液呈粉红色,15秒内不褪色为止。,5、结果计算： 每百克样品中抗坏血酸毫克数 Vc（mg/100g） 式中 V：滴定时所耗去标准溶液的体积(mL)； T：lmL标准溶液相当于抗坏血酸标准溶液的质量 m：滴定时所取的滤液中含样品量(g) 100以每100g样品计。,注意事项: 1、加入草酸的作用 2、整个操作过程要迅速，防止还原型抗坏血酸被氧化 3、若样品滤液无色，可直接测定，若样液具有颜色，用白陶土(应选择脱色力强但对抗坏血酸无损失的白陶土)去色 食品分析的特点 4、测定样品溶液时，要同时做一空白对照， 计算时，样品滴定的体积数须扣除空白液滴定 的体积数。,实验原理： 用酸处理过的活性炭把还原型的抗坏血酸氧化为脱氢型抗坏血酸,再与2,4-二硝基苯肼偶联生成红色的络合物。其呈色的强度与维生素C的浓度成正比，可以比色定量。 max=540nm 定量方法：工作曲线法,（二） 2，4-二硝基苯肼法,1、样品处理 2、配制一系列不同浓度的标准溶液 3、分别测定标准溶液的吸光度 4、以浓度为横坐标，吸光度为纵坐标绘制工作曲线 5、相同条件下，测定待测样品的吸光度 6、工作曲线上计算待测样品中Vc的含量,一、维生素A的营养学功效,1、维生素A的性质 维生素A又称视黄醇，是一个具有酯环的不饱和一元醇 为淡黄色油溶液， 性质不稳定，在空气中易氧化，遇光易变色，易被紫外光裂解。 包括维生素A1、A2 两种，主要存在于动物体内 深色蔬菜中的胡萝卜素在体内可以转化为VA,2、维生素A的生理功能 1）维持视觉正常 2）促进生长发育,3）加强免疫能力 4）清除自由基,5） 维持上皮结构的完整与健全 维生素A可以调节上皮组织细胞的生长，维持上皮组织的正常形态与功能。 保持皮肤湿润，防止皮肤黏膜干燥角质化，不易受细菌伤害，有助于对粉刺、脓包、皮肤表面溃疡等症的治疗,3、维生素A的缺乏症 1)、暗适应能力下降、夜盲及干眼病 2)、粘膜、上皮改变 3)、生长发育受阻 4)、其他 味觉、嗅觉减弱，食欲下降。,4、维生素A的食物来源,表2 几种食物的维生素或胡萝卜素含量 单位：ug/g,二、维生素A的测定,三氯化锑比色法 在氯仿溶液中，维生素A与三氯化锑可相互作用，生成蓝色可溶性配合物，其颜色深浅与溶液中所含维生素A的含量成正比。该物质在620nm波长处有最大吸收峰，其吸光度与维生素A的含量在一定的范围内成正比，故可比色测定。,本法适用于维生素A含量较高的各种样品（含量高于510g/g），对低含量样品，因受其他脂溶性物质的干扰，不易比色测定。 该法的主要缺点是生成的蓝色配合物的稳定性差，比色测定必须在6S内完成，否则蓝色会迅速消退，将造成极大误差。, 无水硫酸钠 不吸附维生素A 乙酸酐 无水乙醚 无水乙醇 三氯甲烷 250gL三氯化锑一三氯甲烷溶液 1：1氢氧化钾溶液 0.5molL氢氧化钾溶液 维生素A标准溶液 酚酞指示剂,试剂,操作步骤 样品处理 因含有维生素A的样品，多为脂肪含量高的油脂或动物性食品，故必须首先除去脂肪，把维生素A从脂肪中分离出来。常规的去脂方法是采用皂化法和研磨法。,皂化法适用于维生素A含量不高的样品，可减少脂溶性物质的干扰，但全部试验过程费时，且易导致维生素A的损失。 操作方法： 1、皂化：称取0.55g经组织捣碎机捣碎或充分混匀的样品于三角瓶中，加入l0ml 1：1氢氧化钾及2040ml乙醇，在电热板上回流30min。加入10m1水，稍稍振摇。若无浑浊现象，表示皂化完全。 2、提取：乙醚回流提取 3、浓缩： 用水浴蒸馏，回收乙醚。待瓶中剩约5ml乙醚时取下。减压抽干，立即准确加入一定量三氯甲烷（约5ml左右），使溶液中维生素A含量在适宜浓度范围内（35g）。,A、皂化法,研磨法 适用于每克样品维生素A的含量大于510g样品的测定，如猪肝的分析。步骤简单、省时，结果准确 操作方法： 1、研磨： 精确称取25g样品，放入盛有35 倍样品质量的无水硫酸钠研钵中，研磨至样品中水分完全被吸收，并均质化。 2、提取：乙醚提取，使样品中的维生素A全部溶于乙醚中； 3、浓缩： 取澄清提取乙醚液25m1，放入比色管中，在7080水浴上抽气蒸干；然后立即加入lml三氯甲烷溶解残渣。,B、研磨法, 标准曲线的绘制 准确吸取维生素A标准溶液0，0.l，0.2，0.3，0.4，0.5ml于 6个10ml容量瓶中，用三氯甲烷定容，得标准系列使用液。 取6个3cm比色管顺次移入标准系列使用液各 lml，每个比色管中加乙酸酐1滴，制成标准比色列。于620nm波长处，以 10ml三氯甲烷加 1滴乙酸酐调节吸光度至零点；迅速加入9ml三氯化锑显色，于6s内测定吸光度 以维生素A含量为横坐标，以吸光度为纵坐标绘制曲线。, 样品测定 取两个3cm比色管，分别加入1ml三氯甲烷（样品空白液）和lml样品溶液，各加1滴乙酸酐。其余步骤同标准曲线的制备，分别测定样品空白液和样品溶液的吸光度 从标准曲线中查出相应的维生素A含量。,结果计算 每百克样品中维生素A的毫克数 VA（mg/100g） 式中 : c由标准曲线上查得样品溶液中维生素A的含量，g/ml； c0由标准曲线上查得样品空白液中维生素A的含量，g/ml； V样品提取后加入三氯甲烷定容之体积，ml； m样品质量，g； 100以每100g样品计。,注意事项 维生素A极易被光破坏，实验操作应在微弱光线下进行，或使用棕色玻璃仪器。 所用氯仿中不应含有水分，因三氯化锑遇水会出现沉淀，干扰比色测定。 由于三氯化锑与维生素A所产生的蓝色