食品添加剂的测定.ppt

第六章 食品添加剂的测定,1、食品添加剂定义： 指为改善食品品质和色、香、味以及为防腐和加工工艺的需要而加入食品中的化学物质或天然物质。 特点：这些物质本身不作为食用目的，也不一定有营养价值。它并不包括残留的农药、污染物和营养强化剂。 功能：保持食品营养、防止腐败变质，增强食品感官性状、满足加工工艺要求，提高食品质量。,一、概述,2、食品添加剂分类 （1）按来源分为两大类：天然食品添加剂和化学合成添加剂。 天然食品添加剂：利用动物与植物组织或分泌物及以微生物的代谢产物为原料，经过提取、加工所得到的物质。如辣椒红色素、番茄红色素等是从植物中提取出来的。天然食品添加剂一般对人体无害。 化学合成添加剂：通过一系列化学手段所得到的有机或无机物质，或多或少都有毒性，在剂量上应该严格掌握。,如按食品添加剂的功能、用途划分，我国食品添加剂使用卫生标准可分为： 酸度调节剂、抗结剂、消泡剂、抗氧化剂、漂白剂、膨胀剂、胶姆糖基础剂、着色剂、护色剂、乳化剂、酶制剂、增味剂、面粉处理剂、被膜剂、水分保持剂、营养强化剂、防腐剂、稳定剂和凝固剂、甜味剂、增稠剂、食品香料和其他类添加剂。 共22类1500种（世界现在有4000多种）。,3、食品添加剂的安全使用和管理 天然食品添加剂一般对人体无害，大多数合成添加剂对人体有毒性，要控制加入量。 关于人体每天允许食用量ADI值，可查书得到。,4、测定意义 通过检测能保证食品的卫生质量。 监督、保证和促进正确合理地使用食品添加剂，确保人民的身体健康。,5、食品添加剂的要求 对于食品添加剂首先是无毒无害和有营养价值，其次才是色、香、味、形态，另外对于添加剂的使用剂量，各国都有建议用量，可查一些手册。,6、食品添加剂的测定方法 添加剂品种繁多，所以它们的测定方法也很多，测定时和其它分析项目一样，首先需要将分析物质从复杂的混合物中分离出来，然后再测定。 分离蒸馏法、溶剂萃取法、色层分离等。 测定比色法、紫外分光光度法、TLC、HPLC等。,食品添加剂的检测内容,甜味剂的测定 防腐剂的测定 发色剂的测定 漂白剂的测定 合成着色剂的测定 抗氧化剂的测定,甜味剂：是指赋予食品甜味的食品添加剂 按其来源可分为天然甜味剂和人工合成甜味剂； 按其营养价值可分为营养型和非营养型甜味剂。,二、几种甜味剂的测定,我国GB 2760-1996批准使用的甜味剂有：糖精、甜蜜素、甜味素(阿斯巴甜)、甜菊苷、甘草、安赛蜜(AK糖)、阿力甜、异麦芽酮糖、麦芽糖醇、山梨醇、木糖醇、乳糖醇及三氯蔗糖等共15种。,（一）糖精钠的检测,糖精（钠）是应用较广的人工合成甜味剂，其学名为邻-磺酰苯甲酰亚胺。 糖精钠被摄入人体后，不能被吸收利用，不分解，不供给热能，大部分从尿中排出而且不损害肾功能。考虑到人体的安全性，1997年FAOWHO公布，将其ADI值定为05mg/kg体重。 婴幼儿食品、病人食品、主食中禁用。 果酒、露酒、黄酒、啤酒、白酒、肉类、水产类、水果蔬菜类罐头中禁止使用糖精。,1、高效液相色谱法 原理：样品经加温除去二氧化碳和乙醇后，用氨水调节pH至近中性，加水定容过滤后进高效液相色谱仪。经反相色谱分离后，根据保留时间和峰面积进行定性和定量。,1-苯甲酸， 2-山梨酸 3-糖精钠,2、酚磺酞比色法 原理：样品中的糖精钠在酸性条件下用乙醚提取分离后，与酚和硫酸在175 作用，生成酚磺酞，再与氢氧化钠反应产生红色溶液，与标准系列比较定量。 说明： 本法受温度影响较大，要使糖精充分与酚在硫酸作用下生成酚磺酞，应严格控制在 175士2温度下反应 2小时。 苯甲酸等有机物对测定有干扰，故要通过碱性氧化铝层析柱以排除干扰。,3、薄层色谱法 原理：样品经处理除去蛋白质、果胶、CO2、酒精等杂质后，在酸性条件下，用乙醚提取食品样品中的糖精钠，经薄层层析分离后用溴甲酚绿-溴甲酚蓝混合指示剂显色后，与标准样品的斑点进行比较定性。在经薄层色谱分离、显色后与标准比较，进行半定量测定。,4、 紫外分光光度法 原理：样品经处理后，在酸性条件下用乙醚提取食品中的糖精钠，经薄层分离后，溶于碳酸氢钠溶液中，于波长270nm处测定吸光度，与标准液比较定量。,5、纳氏比色法 原理：糖精钠在酸性溶液中经有机溶剂萃取，经过消化变成铵盐，与纳氏试剂作用生成一种黄色物质，根据颜色的深浅与标准比较定量。,1、环己氨基磺酸钠(甜蜜素)的测定 原理：在酸性介质中，环己氨基磺酸钠与亚硝酸反应，生成环己醇亚硝酸酯，利用气相色谱法进行定性定量。,（二）其他几种重要甜味剂,防腐剂是指能防止食品腐败、变质，抑制食品中微生物繁殖，延长食品保存期的物质，它是人类使用最悠久、最广泛的食品添加剂。目前，我国允许使用的品种主要有苯甲酸及其钠盐、山梨酸及其钾盐、对羟基苯甲酸乙酯和丙酯、丙酸钠、丙酸钙、脱氢乙酸等。,三、防腐剂的测定,（一）苯甲酸及苯甲酸钠的测定,苯甲酸又名安息香酸。为白色有丝光的鳞片或针状结晶，微溶于水，使用不便，实际生产多用其钠盐。苯甲酸钠易溶于水和乙醇，难溶于有机溶剂，与酸作用生成苯甲酸。 苯甲酸及其钠盐主要用于酸性食品的防腐，在pH2.54其抑菌作用较强，当pH5.5时，抑茵效果明显减弱。对霉菌和酵母菌效果甚差。 苯甲酸进入人体后，大部分与甘氨酸结合形成无害的马尿酸，其余部分与葡萄糖醛酸结合生成苯甲酸葡萄糖醛酸甙从尿中排出，不在人体积累。苯甲酸的毒性较小。,1、酸碱滴定法 原理：在弱酸条件中，用乙醚将样品中的苯甲酸提取出来，将乙醚挥发后，用中性酒精或醇醚混合物溶解内容物，用酚酞做指示剂，采用0.1N标准NaOH滴定至终点，然后根据氢氧化钠消耗的体积计算苯甲酸或苯甲酸钠的含量。,（1）样品的处理 固体或半固体样品（各种果酱） 称100g样与500ml容量瓶中加200ml水加NaCl直到不溶解为止（降低苯甲酸在水中溶解度）用10%NaOH调为碱性（这时苯甲酸生成苯甲酸钠，并以苯甲酸钠状态存在）用饱和NaCl定容500ml静置2小时过滤弃去初液收集滤液, 含酒精样品（各种汽饮料等） 取250ml样于烧杯中加10%NaOH呈碱性置水浴蒸发至100ml（除去C2H5OH）移入250ml容量瓶加30gNaCl溶解后用饱和NaCl定容放置2小时过滤收集滤液 含多量脂肪样品 于上述制备好的滤液中加NaOH使之成为碱性加50ml乙醚提取静置分层后弃去醚层溶液供测定用,（2）提取 吸取滤液100ml放入500ml分液漏斗加1:1盐酸至呈酸性过量3ml 1:1盐酸分别用70、60、60ml纯乙醚抽提将有机层放出，3次的乙醚提取液汇集一起用水洗，直到最后10ml洗液不是酸性为止,（3）滴定 将乙醚提取液放入三角瓶中40的水浴上回收乙醚，至剩余少量乙醚取下，打开瓶口，用风吹干加入50ml中性乙醇加12ml水加酚酞指示剂3滴用0.05mol/L NaOH滴定至微红色为止。,（4）计算：,（二）山梨酸及其盐的测定,测定方法： 比色法（硫代巴比妥酸比色法） 紫外分光光度法 薄层层析法 气相色谱法 高压液相色谱法,1、硫代巴比妥酸比色法 （1）原理 样品中的山梨酸在酸性溶液中，用水蒸汽蒸馏出来，然后用K2Cr2O7氧化成丙二醛和其它产物，丙二醛与硫代巴比妥酸反应，生成红色物质，颜色的深浅与山梨酸含量成正比。（530nm下测定）,（2）操作方法 样品制备 称取100g左右的样品加蒸馏水250ml在高速捣碎机上打浆定容500ml过滤收集滤液, 山梨酸的提取 准确吸取两份滤液各20ml分别放入两个250ml蒸馏瓶中一个瓶加1ml磷酸、无水硫酸钠20g、水70ml、玻璃珠3粒另一瓶加1N NaOH5ml、无水硫酸钠20g、水70ml、玻璃珠3粒蒸馏分别用装有10ml0.1N NaOH的100ml容量瓶接收馏液当馏液收集到80ml停止蒸馏，用少量水洗涤冷凝管定容分别吸10ml溶液分别置于两个100ml容量瓶用0.01N NaOH定容供样液、空白测定用, 测定 准确吸样液、空白液2ml于25ml比色管中加水3ml加2ml（K2Cr2O7+硫酸）混合液在100水浴5分钟加0.5%硫代巴比妥酸2ml沸水浴加热7分钟冷却定容于1cm比色杯在530nm处比色,2、气相色谱法 原理：样品酸化后，用乙醚提取苯甲酸、山梨酸，用带氢火焰离子化检测器的气相色谱仪进行分离测定，与标准系列比较定量。测出苯甲酸、山梨酸量后，再分别乘以适当的相对分子质量比，求出苯甲酸钠，山梨酸钾量。 说明：本法为国家标准方法，可同时测定食品中苯甲酸和山梨酸的含量，山梨酸保留时间为173秒，苯甲酸保留时间为368秒。适用于酱油、果汁、果酱，最低检出限为1ug。用于色谱分析的样品为1g时，最低检出浓度为1mg/kg 。 糖精难挥发，必须首先和甲基化试剂反应才能进行进GC。,3、高效液相色谱法 原理：样品加温除去二氧化碳和乙醇，调节pH至近中性，过滤后进高效液相色谱仪，经反相色谱分离后，根据保留时间和峰面积进行定性和定量。 说明与讨论 本法为国家标准分析方法，适用于酱油、果汁、果酱。 含二氧化碳的样品需经加热除去，含酒精的样品加氢氧化钠溶液调至碱性，于沸水浴中加热以除去酒精。 对共存物进行干扰试验表明：蔗糖在230nm处无吸收，柠檬酸吸收很少（调节出峰时间可以避免干扰），在此条件下，咖啡因和人工色素不被洗脱，因此这些共存物质不影响苯甲酸、山梨酸和糖精钠的定性、定量分析。,4、薄层色谱法原理 样品酸化后，用乙醚提取苯甲酸、山梨酸。 5、紫外分分光度法测定苯甲酸原理 样品中苯甲酸在酸性溶液中可以随水蒸气蒸馏出来，与样品中非挥发性成分分离，用碱液吸收苯甲酸，然后用重铬酸钾和硫酸溶液在加热的条件下进行激烈氧化，使除苯甲酸以外的其它有机物氧化分解，将此氧化后的溶液再次蒸馏，用碱液吸收苯甲酸，第二次所得的蒸馏液中基本不含除苯甲酸以外的其它杂质。根据苯甲酸钠在225nm有最大吸收，故测定吸光度可计算出苯甲酸含量。,（三）其他防腐剂的检测（略）,1、食品中对羟基苯甲酸乙酯、丙酯的检测 对羟基苯甲酸乙酯、丙酯分别又名尼泊金乙酯、丙酯，均为苯甲酸的衍生物，都是结晶性粉末，无臭或有轻微的特殊香气，味微苦，灼麻。在水中难溶，但易溶于丙酮、乙醇。因其是酯类，不易受pH的影响。在pH48内防腐效果很好（存在的理由！）。其毒性低于苯甲酸，而高于山梨酸。FAOWHO联合食品添加剂专家委员会于1994年规定对羟基苯甲酸乙酯与丙酯的ADI值均为010mg/kg体重。 RP-HPLC法测定：样品中的对羟基苯甲酸酯类，用乙腈提取后，经过滤后进液相色谱仪进行测定，与标准比较定性、定量。对羟基苯甲酸甲酯、丙酯保留时间为4.2min、7.6min。,2、食品中脱氢醋酸的检测 脱氢醋酸及其钠盐属于广谱防腐剂，特别对霉菌和酵母的抑制能力强，为苯甲酸钠的210倍。日本1973年曾报道，该类防腐剂有导致肾结石等问题，因此其安全性受到怀疑。目前日本已经限制使用该类防腐剂。欧共体也禁止使用。我国年生产能力约200吨，主要用于饲料。但也用于袋装酱菜防腐，用0.02浓度约60天无霉变。 测定方法：RP-HPLC：样品中脱氢乙酸加热溶解后，离心分离，经过滤后直接进液相色谱仪中分离测定，与标准品比较定量。,发色剂也称护色剂或呈色剂，主要指一些能够使肉与肉制品呈现良好色泽的物质。 硝酸盐和亚硝酸盐是肉制品生产中最常使用的发色剂。 发色剂在食品中的作用：(1)可发色作用；(2)抑菌作用；(3)产生风味。,四、发色剂的测定,我国食品添加使用卫生标准(GB27601996)规定：亚硝酸盐用于腌制肉类、肉类罐头、肉制品时的最大使用量为0.15g/kg，硝酸钠最大使用量为0.5g/kg，残留量(以亚硝酸钠计)肉类罐头不得超过0.05g/kg，肉制品不得超过0.03g/kg。,1、亚硝酸盐的测定(盐酸萘乙二胺法) （1）原理 样品经沉淀蛋白质、除去脂肪后，在弱酸性条件下，亚硝酸盐与对氨基苯磺酸重氮化，产生重氮盐，此重氮盐再与偶合试剂(盐酸萘乙二胺)偶合形成紫红色染料，其最大吸收波长为550nm，测定其吸光度后，可与标准比较定量。,（2）样品处理 肉制品 原样捣碎取匀样加入硼砂液沸水浴15分钟加ZnSO4（沉淀蛋白质）定容撇去脂肪层过滤（弃去不溶物）滤液待测 果蔬类样品 均样+水捣碎加果蔬提取剂（50gBaCl2+CdCl2加1000ml重蒸馏水中，用浓HCl调PH为1）振荡1小时用2.5N NaOH调至中性定容过滤滤液应无色透明,（3）样品测定 吸滤液 40ml于50ml比色管按标准曲线操作580nm测定以标准曲线上查样品的含量 （4）结果计算 （5）说明及注意事项 硫酸锌溶液作为蛋白质沉淀剂使用，也可用亚铁氰化钾和乙酸锌的混合溶液，利用产生的亚铁氰化锌与蛋白质共沉淀；实验中使用重蒸水可以减少试验误差。,2、硝酸盐的检测 （1）镉柱法 原理：样品经沉淀蛋白质、去除脂肪后，得到提取液，将提取液通过镉柱，在pH9.69.7的氨缓冲液中，使其中的硝酸根还原为亚硝酸根，然后利用盐酸萘乙二胺法测定亚硝酸盐的总量，由总量减去还原前亚硝酸盐含量即为由硝酸盐还原产生的亚硝酸盐含量。再乘以换算系数，即得硝酸盐含量。,（2）离子选择性电极法硝酸根离子选择性电极 （3）GC法 样品中亚硝酸盐与硫酸二甲酯溶液在一定条件下发生甲基化反应，生成了电负性很强的硝基甲烷。 用电子捕获检测器（ECD）的气相色谱仪测定顶空硝基甲烷。因硝基甲烷色谱响应值与亚硝酸盐浓度成正比，从而计算出亚硝酸盐含量。,漂白剂是指可使食品中的有色物质经化学作用分解转变为无色物质，或使其褪色的一类食品添加剂。可分为还原型和氧化型两类。目前，我国使用的大都是以亚硫酸类化合物为主的还原型漂白剂，通过产生SO2的还原作用而使食品漂白。,五、漂白剂的测定,我国食品添加使用卫生标准(GB27601996)规定：亚硫酸用于葡萄酒、果酒时的用量为0.25gkg，残留量(以SO2计)不超过0.5gkg。在蜜饯、葡萄糖、食糖、冰糖、糖果、液体葡萄糖、竹笋、蘑菇及其罐头的最大使用量为0.40.6gkg；薯类淀粉为0.20gkg；残留量(以SO2计)竹笋、蘑菇及其罐头不超过0.04gkg；液体葡萄糖不超过0.2gkg；蜜饯、葡萄糖不超过0.05gkg；薯类淀粉不超过0.03gkg。,1、亚硫酸盐的测定(盐酸副玫瑰苯胺法) （1）原理 亚硫酸盐与四氯汞钠反应生成稳定的络合物，再与甲醛和盐酸副玫瑰苯胺作用，经分子重排，生成紫红色配合物，于550nm处有最大吸收，测定其吸光度以定量。,（2）操作步骤 样品处理 a.水溶性固体样品的处理（各种罐头类样品） 取捣碎均匀样10g用少量水溶解后转移到100ml容量瓶中加0.5N NaOH 4ml摇匀加0.5N H2SO4 4ml加Na2HgCl4 20ml定容100ml过滤备用,b.淀粉类样品的处理（粉条、粉皮等） 称取粉碎均匀样10g少量水溶解转移到100ml容量瓶中加Na2HgCl4 20ml浸泡4小时以上（若上层液不澄清，要加入亚铁氰化钾及乙酸锌溶液各2.5ml）用水定容过滤备用 c.液体样品处理 吸取样液10ml于100ml容量瓶中加Na2HgCl4 20ml定容过滤备用, 样品分析 吸滤液5ml比色管中加吸收液5ml加0.2%甲醛1ml显色剂1ml混匀定容静置15分钟于580nm测定根据样品的波长从标准曲线查相应SO2含量。,（3）结果计算 式中：X样品中二氧化硫的含量，gkg； m1测定用样品液中二氧化硫的含量，g； V 测定用样液的体积，mL； 100 样品液总体积，mL； m 样品质量，g。,（4）注意事项 此反应的最适反应温度为20-25，温度低灵敏度低，并保证标准系列管和样品在相同温度下显色； 反应温度如果为15-16，静置时间需延长为20分钟； 盐酸副玫瑰苯胺中的盐酸用量对显色有影响，加入盐酸量多，显色浅；加入量少，显色深，所以配制试剂时一定要按操作进行；,甲醛浓度在0.15-0.25%时，颜色稳定，所以应选择0.2%甲醛溶液； 测定样品颜色较深的样品，可用10%活性炭脱色； 样品加入Na2HgCl4吸收液于100ml容量瓶中加水至刻度，摇匀，此液在24小时内很稳定，否则于4可使用一周； 此法测SO2采用HgCl2毒性很强，故实验时应注意安全。,2、蒸馏滴定法 样品中的二氧化硫包括游离的和结合的，加人氢氧化钾使之破坏其结合状态，并使之固定。在密闭容器中对样品进行酸化并加热蒸馏，蒸出二氧化硫，然后用乙酸铅溶液吸收，用浓盐酸酸化，再用碘标准溶液滴定。根据碘标准溶液消耗量计算出样品中二氧化硫的含量。,3、离子色谱法原理 样品中的亚硫酸盐在弱酸性条件下加热溢出，用pH6的水承接，然后以淀粉作指示剂，用碘标准溶液滴定至终点，根据碘标准溶液消耗量计算出样品中二氧化硫的含量。,食品中合成着色剂主要是以人工方法进行化学合成的有机色素类，按其化学结构不同可分为偶氮类色素和非偶氮类色素，偶氮类色素按溶解性不同又可分为油溶性和水溶性两类。合成类色素中还包括色淀。 食品中合成着色剂的种类很多，国际上允许使用的有30余种，我国允许使用的主要有苋菜红、胭脂红、赤藓红、新红、玫瑰红、柠檬黄、日落黄、亮蓝、靛蓝、牢固绿等。,六、合成着色剂的测定,1、高效液相色谱法 原理 食品中的合成着色剂经聚酰胺吸附法或液一液分配法提取后，制成水溶液，注入高效液相色谱仪，经反相色谱分离，根据保留时间定性和与峰面积比较进行定量。,操作步骤： （1）样品处理： 饮料类：吸取样液50mL于100mL烧杯中（含CO2的加热排除CO2） 配制酒：吸取样液100mL于200mL烧杯中，加热排出乙醇，加热前放几片碎瓷片。 淀粉、软糖、硬糖、蜜饯类：称取粉碎样品510g加水30mL，加热溶解，用20柠檬酸溶液调PH至4左右。,奶糖：称取样品 10g粉碎，加 30mL乙醇一氨溶液溶解，置水 浴上加热浓缩到20mL左右，立即用1:10硫酸调至微酸性（用PH 试纸测定），再继续滴加 1mL1:10硫酸，再加 1mL10钨酸钠溶液使 蛋白质沉淀，过滤、用少量水洗涤，收集滤液备用。 蛋糕类：称取样品10g，粉碎，加放少量海砂或无水硫酸钠，混匀，用电吹风吹干，加入30mL石油醚搅拌静置片刻，倾出石油醚，如此重复23次以除去油脂，再吹干研细，然后转入漏斗中，用乙醇一氨溶液提取色素直至色素提取完全，以下按（4）自“置水浴上加热浓缩至20mL左右”起依法操作。,（2）色素提取： 聚酰胺吸附法：样品溶液加 20%柠檬酸调pH为46，加热至60 ，将1g聚酰胺粉加少许水调成糊状，倒入样品溶液中，搅拌片刻，以G3垂融漏斗抽滤，用60 PH4的水洗涤35次，然后用甲醇甲酸混合液洗涤35次（含赤藓红的样品不能洗），再用水洗至中性，用乙醇氨水水混合液解吸35次，每次5mL，收集解吸液，加乙酸中和，蒸发至近干，加水溶解，定容至5mL。经滤膜（0.45m）过滤，取10 L进高效液相色谱仪。, 液一液分配法（适用于含赤藓红的样品）：将制备好的样品溶液放入分液漏斗中，加 2mL盐酸，三正辛胺十正丁醇溶液（5十95）1020mL，振摇，提取，分取有机相，重复此操作，合并有机相，用饱和硫酸钠溶液洗2次，每次10mL分取有机相，放蒸发皿中，水浴加热浓缩至 10mL，转移到分液漏斗中，加 60mL正己烷，混匀， 加氨水（298）提取23次，每次5ml，合并氨水层（含水溶性 酸性色素），用正己烷洗2次，氨水层加乙酸调成中性，水浴加蒸发至近干，加水溶解，定容至5mL。经滤膜（ 0.45m ）过滤，取10 L进高效液相色谱仪。,（3）高效液相色谱分析参考条件： 柱：4.6mmX250mm 10m，C18不锈钢柱。 流动相：甲醇、0.02mol/L乙酸铵溶液（pH4） 梯度洗脱： 开始：甲醇 乙酸铵溶液为20 80； 5min后：甲醇 乙酸铵溶液为35 65 10min后：甲醇 乙酸铵溶液为98 2，继续6min 流速：1mLmin。 检测器；紫外检测器，波长254nm。 根据保留时间定性，外标峰面积法定量。,计算： A样样品的峰面积 A标标样的峰面积 C标标样的浓度 V样样品的定容体积 m样样品的质量,说明及注意事项 样品在加入聚酰胺粉吸附色素之前，要用20柠檬酸调至PH至4左右，因为聚酰胺粉在偏酸性（PH46）条件下对色素吸附力较强，吸附较完全。 如样品色素浓度太高，要用水适当稀释，因为在浓溶液中，色素钠盐的钠离子不容易解离，不利于聚酰胺粉吸附。 样液中的色素被聚酰胺粉吸附后，当用热水洗涤聚酰胺粉以便 除去可溶性杂质时，要求水偏酸性，防止吸附的色素被洗脱下来，使定量结果偏低。 在提纯的样品溶液进行蒸发浓缩时，要控制水浴温度在70 80 ，使其缓慢蒸发，勿溅出皿外，另外，要经常摇动蒸发皿，防止色素干结在蒸发皿的壁上。 用HPLC测定时，测定一个样品后，将流动相中的甲醇浓度恢复至20%，使之稳定20min后，再开始测定第二个样品。,2、薄层色谱法及纸色谱法 原理：水溶性酸性合成着色剂在酸性条件下，被聚酰胺吸附后与食品中的其他成分分离，经过滤、洗涤及在碱性溶液(乙醇一氨)中解吸附，再经薄层色谱法或纸色谱法纯化、洗脱后，用分光光度法进行测定，可与标准比较定性、定量。 胭脂红510nm，苋菜红520nm，柠檬黄430nm，日落黄482nm，亮蓝627nm），测定吸光度，分别绘制标准曲线比较或与标准色列目测比较。,抗氧化剂是指能阻止或推迟食品氧化变质，提高食品稳定性和延长储存期的食品添加剂。 按其作用可分为天然抗氧化剂和人工合成抗氧化剂。如按其溶解性则可分为油溶性抗氧化剂和水溶性抗氧化剂。 常用的抗氧化剂有叔丁基羟基茴香醚(BHA)、2，6一二叔丁基对甲酚(BHT)、没食子酸丙酯(PG)、TBHQ、茶多酚(TP)等，主要用于油脂及高油脂类食品中，以延缓食品的氧化变质。,七、抗氧化剂的测定,我国食品添加使用卫生标准(GB27601996)规定，BHA与BHT单独在食品中最大使用量为0.2gkg。PG在食品中单独最大使用量为0.1gkg，与BHA和BHT混合使用时，不得超过0.1gkg。,（一）抗氧化剂BHA、BHT的测定（GC法）,性质： BHA：对热稳定,在弱碱性条件下不容易被破坏，所以经常作为焙烤食品用的抗氧化剂，这种抗氧化剂在日本是禁止使用的 BHT：在果仁、精油、含脂食品中有较好的稳定性，但在高温下不稳定，如在油炸和小吃食品中可丧失90%，饼干中可丧失35%，但如与BHA合并使用可明显提高抗氧化效果，抗氧化性强于BHA；毒性大于BHA。,气相色谱法测定食品中叔丁基羟基茴香醚(BHA)与2，6-二叔丁基对甲酚(BHT) 1、原理 样品中的叔丁基羟基茴香醚(BHA)和2，6-二叔丁基对甲酚(BHT)用石油醚提取，通过层析柱使BHA与BHT净化，浓缩后，经气相色谱分离后用氢火焰离子化检测器检测，根据样品峰高与标准峰高比较定量。,2、仪器： 气相色谱仪（带氢火