NY-T404-2000脱毒生姜种姜(苗)病毒检测技术规程.pdf

B 1 51 /中 华 人 民 共 和 国 农 业 行 业 标 准N Y / T 4 0 4 -2 0 0 0脱毒生姜种姜( 苗) 病毒检测技术规程Ru l e s f o r v i r u s d e t e c t i o n o f v i r u s - f r e e s e e d ( s e e d l i n g ) g i n g e r2 0 0 0 一 0 9 一 2 2 发布2 0 0 0 一 1 2 一 0 1 实施中华人民共和国农业部发 布N Y/ T 4 0 4 -2 0 0 0前言 为了有效地实施对脱毒生姜种姜质量检验和管理， 规范脱毒生姜 种姜市场， 促 进生姜脱毒技术的 推广， 实现脱毒生 姜种姜( 苗) 病毒检测的规范 化、 标准化， 特制定本规程。 本规程在参照国内外生姜病毒检测技术最新研究进展的基础上， 结合当前国内生产实际， 力求达到快速、 准确、 可操作性强的检测要求。检测对象主要选择生产上发生分布范围广、 危害性大的病毒。检测方法主要采用斑点酶联免疫吸附检测 。 本规程内容包括脱毒生姜种姜( 苗) 病毒检测的适用范围、 检测对象、 抽样方法、 检测方法和质量要求。 本标准由中 华人民共和国农业部提出。 本标准主要起草单位: 农业部植物脱毒种苗质量监督 检验测试中心( 济南) 、 山东省植物保护总站。 本标准主要起草人: 孙作文、 任宝珍、 李明立、 杨勤民、 王同伟、 商明清。中 华 人 民 共 和 国 农 业 行 业 标 准脱毒生姜种姜( 苗) 病毒检测技术规程N Y / T 4 0 4 -2 0 0 0Ru l e s f o r v i r u s d e t e c t i o n o f v i r u s - f r e e s e e d ( s e e d l in g) g i n g e r1 范围 本标准规定了脱毒生姜种姜( 苗) 的病毒检测方法和操作规程。 本标准适用于脱毒生姜种姜( 苗) 的 病毒检测。2 引用标准 下列标准所包含的条文， 通过在本标准中引用而构成为本标准的条文。本标准出版时， 所示版本均为有效。所有标准都会被修订， 使用本标准的各方应探讨使用下列标准最新版本的可能性。 N Y / T 4 0 2 -2 0 0 0 脱毒甘薯种薯( 苗) 病毒检测技术规程3 定义 本标准采用下列定义。3 . 1 脱毒苗 应用茎尖组织培养技术获得的 再生试管苗， 经检测确认不带烟草花叶 病毒( T MV ) 、 黄瓜花叶病毒( C M V ) ， 才确认是脱毒苗。3 . 2 脱毒种姜 从繁殖脱毒苗开始， 经逐代繁殖增加种姜数量的种姜生产体系生产出 来的。 分原原种、 原种、 生产用种三个级别。3 . 2 . 1 原原种 p r e - e l it e 用脱毒苗在防虫网室、 温室条件下生产出的符合质量标准的种姜。3 . 2 . 2 原种e l i t e 用原原种作种姜， 在良好隔离条件下生产出的符合质量标准的种姜。3 . 2 . 3 生产用种。 e r t if i e d s e e d 用原种作种姜， 在隔离条件下生产出的符合质量标准的种姜。3 . 3 病毒病株允许率 脱毒种姜繁殖田 中病毒病株的 允许比率。4 检测对象 烟草花叶 病毒( T o b a c c o m o s a i c v i r u s , T MV ) ; 黄瓜花叶 病毒( C u c u m b e r m o s a ic v ir u s , C MV ) ,5 抽样5 门组培苗抽样中华人民共和国农业部2 0 0 0 一 0 9 一 2 2 批准2 0 0 0 一 1 2 一 0 1 实施 IN Y / T 4 0 4 -2 0 0 05 . 1 . ， 脱毒核心材料: 每株必须检测。5 . 1 . 2 扩繁苗: 随机抽取 I Y o -2 %的扩繁苗检测。5 . 2 田间抽样5 . 2 . 1 原原种和原种抽样: 生姜生长前期、 中期和后期， 在目 测全田的 基础上， 采用五点取样法， 抽样数量为。 . 1 h m 2 以下2 0 0 株; 0 . 1 1 1 h m 2 5 0 0 株; 超出1 h m ， 面积， 划出另一检验区， 按本规程规定的面积取样。 每株取叶片1 -5 g ， 低温保湿存放， 2 4 h内 检测。5 . 2 . 2 生产用种抽样: 子姜膨大期， 在目测全田的基础上， 采用随机取样法， 0 . 1 h m， 以下检验 2点， 每点1 0 0株; 0 . 1 1 1 h m 2 检验 5 点， 每点 1 0 0 株; 1 . 1 -5 h m2 检验1 0 点， 每点1 0 0 株; 超出5 h m 2 面积， 划出另一检验区， 按本规程规定的面积取样。 取样方法及 样品 保存同5 . 2 . 1 ,53 商品种姜抽样 没有经过田间检验的种姜必须进行商品种姜检验。5 . 3 . 1 根据生姜种姜不同存放方式， 采用分层设点或随机取样的方法， 抽样量见表 I . 表 1 种姜抽样数量标准表种姜总量， k g抽样百分率. %抽样最低数量, k g蕊 1 0 0 0 06 - 1 01 0 0 1 0 0 0 03 - 5注: 不足抽样最低数量的全部作为混合样品。5 . 3 . 2 将第一次抽取的样品 混合 后， 进行二次抽样， 随机抽取1 0 %的 混合样品检测。6 检测方法 斑点酶联免疫吸附( D o t - E L I S A