血清浆脂类及脂蛋白测定.ppt

血清（浆）脂类及脂蛋白测定,董雷鸣,血脂的组成：,甘油三酯(少量甘油二酯和甘油一酯) 磷脂 胆固醇和胆固醇酯 非酯化脂肪酸（游离脂肪酸）等,血脂的运输形式脂蛋白,1、定义： 指血浆脂质与载脂蛋白组成的可溶性的生物大分子。,磷脂 胆固醇 载脂蛋白,甘油三酯 胆固醇酯,2、结构：,脂蛋白微粒,表面,核心,3、分类,(1)按密度不同,HDL LDL IDL VLDL CM,(2)按电泳时区带的泳动位置不同, -LP 前-LP -LP CM,临床血脂测定的常见项目：,实验51：,磷钨酸-镁沉淀法测定高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）,提取HDL 测定胆固醇,实验原理：,超速离心法 层析法 电泳法 沉淀法,提取HDL的方法：,沉淀法原理：,硫酸葡聚糖-Mg2+ 肝素-Mn2+ 磷钨酸-Mg2+,多阴离子（polyanion）化合物,过氧化物酶,胆固醇 + O2 胆甾烯酮 + H2O2,H2O2 + 酚 + 4-氨基安替比林 亚胺醌 + H2O,胆固醇测定（酶法）：,试剂：,沉淀剂 酶试剂 参考血清（TC测定用的定值血清）,操作步骤：,取血清和沉淀剂各200l，充分混匀，置室温放置10min后，2500r/min，15min，吸取上清液按表进行操作。,1、提取HDL,混匀，37水浴15min；空白管调零，0.5cm比色杯，500nm比色。,2、测定胆固醇,计算：,参考值：,HDL-C (mmol/L),测定管吸光度,标准管吸光度,=,定值血清胆固醇浓度,5.17,0.92.0mmol/L,2,注意事项：,1、血清标本要及时测定 （在室温条件下，各型脂蛋白之间会发生脂质交换）； （游离的胆固醇会不断酯化）。 2、离心过程中防止温度过高（室温1525），离心后放置时间不能过长。 （温度过高使沉淀不完全）。,临床意义：,具有抗动脉粥样硬化作用，是冠心病的保护因素。,磷酸甘油氧化法测定血清甘油三酯（TG）,实验49：,甘油三酯(TG)的结构：,甘油三酯测定的方法：,化学法 酶法,化学法,（KOH）,（过碘酸）,皂化,氧化,抽提 甘油 甲醛 显色,甘油三酯,甘油,甲醛,变色酸,紫红色,甘油三酯,3-磷酸甘油 + ADP,+ ATP,O2 、H2O +,磷酸二羟丙酮 + H2O2,甘油 + 脂肪酸,+酚、4-氨基安替比,亚胺醌 + H2O,LPL,GK,GPO,POD,酶法（磷酸甘油氧化酶法）,试剂：,酶试剂,2.26mmol/L的三油酸甘油酯标准液,操作：,37水浴10min；空白管调零，0.5cm比色杯，500nm比色。,计算：,TG (mmol/L),测定管吸光度,标准管吸光度,=,标准液浓度,参考值：,0.561.70mmol/L,2.26mmol/L,临床意义：,增高: 与动脉粥样硬化关系密切、家族性的脂代谢紊乱、糖尿病等。,降低: 营养不良、消化吸收综合征、消耗性疾病等。,注意事项：,标本： 标本要求是餐后12-14h的空腹血液 （血清TG易受饮食影响）。 标本存放不宜超过3天 （避免TG水解而释放出甘油）。 试剂： 酶试剂应4避光保存，出现红色不可再用 。,免疫透射比浊法测定血清载脂蛋白A1和载脂蛋白B,实验53：,抗原,抗原抗体复合物,抗体,+,ApoA1 Apo