免疫组化知识普及、二抗免疫组化试剂盒.ppt

免疫组化知识普及、二抗免疫组化试剂盒 优宁维缪娓,直接法,直接法是将酶（如HRP）标记在特异性一抗上，然后用酶标记抗体直接与相应抗原特异性结合，形成抗原-抗体-HRP复合物，最后用酶底物显色。 优点：简单、步骤少、省时、特异性高。 缺点：敏感性差,间接法,我这边的讲的间接法就是酶标记在二抗上，再与一抗反应，然后进行显色反应。 优点:较直接法敏感性增强,旁边的图很形象的对比出了间接法的优点。如抗原上每个分子结合3-5个分子抗体，当此抗体作为抗原时又可结合3-5个分子的酶标二抗，所以最后显色的时候敏感性更高,亲和素-生物素-过氧化物酶复合物法ABC法,亲和素（avidin）和小分子生物素具有极高的亲和力，每个亲和素具有4个生物素结合位点。 ABC法试剂盒里一般包含的有，生物素标记的二抗、亲和素、生物素标记的HRP等。 ABC复合物就是生物素标记的HRP与过量的亲和素反应制备。,ABC法示意图 亲和素分子有四个生物素结合部位，可以多价形式同时结合生物素化的大分子衍生物和酶标记物，使得更多的HRP聚合在一起后底物显色，敏感性高、信号强,跟ABC法差不多的就是S-P法或者叫LSAB法或SABC法。 试剂盒里一般包含有生物素标记的二抗、链霉亲和素/HRP的结合物等等。 链霉亲和素（streptavidin）和亲和素一样，也有四个生物素结合位点，亲和力更高，且它很少有低聚糖残余成分，可保持中性等电点，避免了组织中的非特异性染色。和亲和素相比，链霉亲和素更为完美。,多聚螯合物酶法,上面讲到的ABC法抑或S-P法都有很大的信号放大效果，但是他们有一个致命的缺点就是内源性生物素的干扰导致非特异性染色、有背景。这就有了多聚螯合物酶法的出现。 我们Labvision的UV Quanto及Dako的Envision都是属于此类试剂盒,相对于亲和素/生物素的高亲和力的多级放大效果，我们的UV Quanto的用的是以某试剂为骨架的多聚螯合物酶，通俗点说就是HRP的多聚合物。这个HRP的聚合物既有信号放大的效果、敏感性高，又避免了生物素化系统的内源性生物素的干扰，从而达到更干净的背景。,卖点 微聚合系统，避免了生物素系统带来的内源性背景，提高染色对比度 信号放大物，有效节省一抗的用量，降低成本 一抗、二抗更短的孵育时间，提高效率,小包装免疫组化试剂盒闪亮登场,本试剂盒是ThermoFisher旗下Labvision/Neomarker公司原液分装的小包装免疫组化试剂盒，基于聚合物技术的最新一代免疫组化二抗非生物素检测系统，信号更强、操作更加简单。 试剂盒特点 即用型，无需进行稀释度优化 兔、小鼠通用 有效节省一抗的用量 更清晰的显色，更干净的背景 孵育时间短，一般室温20分钟 所有辅助免组试剂打包在内（封闭液、DAB显色）,试剂盒组成,UltraVision Quanto HRP-兔、鼠通用免组试剂盒,UltraVision Quanto Detection System Anti-Mouse, Anti-Rabbit Storage: 2-8,18months,DAB Quanto 优势: Long stability 稳定性强，混合后可在室温保 存一周， 2-8 度保存2 周,1,DAB Quanto 和DAB Plus 与UV LP 联合使用的对比 : 减少底物和色原配置混合的次数，进而减少浪费，避免误差，提 高实验的可重复性 . 2,DAB Quanto DAB Quanto 1 DAB Plus 2,卖点： 用于人标本检测，增强鼠来源一抗的显色强度 用于啮齿类标本的检测，对兔来源一抗有效,H2O2 Block 10min,R i,s n,s,e,UV Block 5min,R i,s n,s,e,Antibody 30min,R i,s n,s,e,Rabbit anti- mouse enhancer,10min,R i,s n,s,e,Anti-rabbit Polymer,10min,R i,s n,s,e,DAB Quanto/Plus,5min,R i,s n,s,e,Counterstain,UV LP UV LP HRP-Protocol,UltraVision Quanto MOM Detection System-一抗检测种属及宿主都是鼠,啮齿类动物封闭液，封闭同源交叉反应，减少非特异着色 微聚合物系统，避免生物素系统带来的内源性背景,UltraVision Quanto MOM Detection System,H2O2 Block 10min,R,i s n,s e,R,i Rodent Block s 30min n,s e,Antibody 20min,R,i s n,s e,MOM Polymer 10min,R,i s n,s e,DAB Quanto 5min,R,i s n,s e,Counterstain,UV Quanto MOM HRP-Protocol,IHC Staining-MOM Detection System,竞争产品Pan CK 染色（ CloneAE1/AE3 ） 竞争产品 阴性片产生的背景,Quanto MOM Pan CK染色（CloneAE1/AE3 ） Quanto MOM 阴性片几乎无背景,MultiVision Detection Kit-兔、鼠双染试剂盒 微聚合物二抗混合液，明显降低显色背景 使用简单，染色对比明显,UltraVision Quanto Counterstain Kit-改良苏木素复染试剂盒,试剂盒里包含 Mayers Modified Hematoxylin Bluing Reagent Mounting Medium,15,Proprietary & Confidential,MultiVision Detection Kit,H2O2 Block 10min,R i,s n,s e,UV Block 10min,R i,s n,s e,Antibody Cocktail,30min,R i,s n,s e,MultiVision Polymer,10min,R i,s n,s e,LV Blue 10min,R i,s n,s e,LV R