HIV抗体筛查试验室内质控品制备和日常检测典型案例分析.ppt

1,北京大学人民医院 纪和平 北京市疾病预防控制中心 辛若雷,HIV抗体筛查试验室内质控品制备和应用及日常检测案例分析,2,室内质控品,抗体检测的统计学室内质量控制 非试剂盒组份的外部质控品，是为了监控检测的重复性而设置的，包括强阳性、弱阳性和阴性质控血清； 只设置一个弱阳性质控，以该试剂盒临界值（Cut-off）的23倍为宜。 外部质控品的作用是，判断该批临床样品检测的有效性，因此，每次实验必须包含室内质控品，其结果无效，必须重新试验。 室内质控品可以是商品或实验室自行制备。,3,室内质控品的使用和质量要求,每一次实验必须使用室内质控品，以便监控实验的重复性。 同时可以了解各批试剂盒的批间或孔间差异。室内质控品的管间或瓶间变异必须小于监测系统预期的变异（cv20%）； 并且质控品应稳定、无菌，且不含有影响试剂反应的防腐剂。,4,北京大学人民医院,肝病研究所承担HIV抗体检测任务： 首选试剂：生物梅里埃（3代）；备用试剂：万泰3代； 2011年检测样本量：筛查阳性样本数26例（0.3）；其中，确证试验阳性样本13例，不确定4例，阴性9例； 2012年1-4月，筛查阳性15（1 ），阳性9例。 2012年，检验科开始用雅培化学发光进行初筛，初筛阳性送肝病研究所进行复检。,5,调制针对生物梅里埃（3代）_1,材料 抗-HIV阳性灭活血清（可用梅里埃试剂盒中的阳性对照替代）； 抗-HIV阴性的血清（可用梅里埃试剂盒中的阴性对照）或20%小牛血清； 2 mL冻存管； 生物安全柜； 酶免仪、微量进样器、15-50 mL离心管；,6,调制针对生物梅里埃（3代）_2,基本操作流程 先将抗-HIV阳性灭活血清混合进行常规检测，读取OD值。 将抗-HIV阳性灭活血清用抗-HIV阴性的血清、或20%小牛血清稀释至所需浓度（4-6倍），一般为阴性对照OD值的3-4倍。 将配置好的质控血清分装到2 mL冻存管中，1 mL/管，置-20冰箱保存。 按照室内质控要求计算出此批次质控血清的SD值、CV值，并绘出质控图，标明批号备用。,7,2012年2月质控图,8,2011-2质控考评质控图,9,ELISA检测HIV抗体室内质控血清的制备,目的 实验室自制外部质控血清，绘制质控图，满足全国艾滋病检测技术规范要求和考评要求。 方法 利用试剂盒内的阳性对照血清，用健康人的血清按一定量混合稀释成弱阳性，筛选出合适混合比例，分装冷冻保存使用。 结果 试剂盒内的阳性对照血清与健康人的血清1：10左右混合比例比较适合。 结论 自制质控血清性能稳定，经济、方便，便于推广使用。,韦雪芳（广西壮族自治区横县疾病预防控制中心HIV初筛实验室530300）； 检验医学与临床，2011；8:2527-2528.,10,HIV抗体阳性血清梯度稀释系列用于实验室质控和试剂评价探讨（1）,方法 用阴性血清梯度稀释HIV抗体确认阳性血清，用第三代ELISA检测试剂进行检测，寻找稀释度与OD 值间的关系，然后应用于实验室质控和试剂评价。 HIV 抗体阳性混合血清： WB确证阳性样本：WB全条带（gp160、gp120、p66、p55/p51、gp41、p31、p24、p17）； HIV 抗体阴性混合血清：筛查试验阴性； 用阴性血清稀释阳性混合血清，筛查试验确定最高稀释度稀释倍数：103-105； -20保存；,李红星（商丘市卫生防疫站）； 河南预防医学杂志，2005；16:133-135.,11,HIV抗体阳性血清梯度稀释系列用于实验室质控和试剂评价探讨（2）,结果 在一定稀释度范围内-log稀释度与OD 值呈线性关系。实验系列用于质控，各实验室均正确报出样品的阴阳性结果，但灵敏度（回归曲线斜率/ 残差标准差）不同，依此对实验室进行排序。 结论 HIV 抗体阳性血清梯度稀释系列可用于实验室质控和试剂评价。但灵敏度的合适范围还需继续探讨。,李红星（商丘市卫生防疫站）； 河南预防医学杂志，2005；16:133-135.,12,北京大学人民医院肝病研究所联系电话：88325729,13,化学发光试剂应用案例1,韩，山东青岛人,19岁，MSM 2012年3月初，到北京大学人民医院呼吸科，以发烧、腹泻住院治疗； 检验科雅培化学发光：S/CO值29；送肝病研究所复核阴性（梅里埃、万泰，三代）； 主治医生比较负责任，采血继续送检，梅里埃（1.9）、万泰（0.3），均阳性；CD4细胞计数和CD4/CD8比值偏低； 地坛医院皮肤科就诊，送检确证。,14,化学发光试剂应用案例1（续）,北京大学人民医院&地坛医院 韩，山东青岛人,19岁，MSM,15,化学发光试剂应用案例2,东直门医院&性艾所 贾，33岁，MSM,16,雅培：2.51 万泰4：0.013,一个月后， 梅里埃4：1.81 万泰4：1.49,17,部分单位送检样本确证结果分析,18,2012年罗氏和雅培化学发光确证结果的比较,根据病例属性情况，选择适宜的筛查试剂； 没有最好的试剂，要选择最适合的试剂。,统计数据截止到2012-4-10,19,HIV抗体不确定病例排查,HIV抗体不确定病例(特殊病例)的排查，可以通过核酸检测予以辅助诊断，尤其是手术病例； 可