《长期毒性试验》PPT课件.ppt

长期毒性试验,目的意义 基本内容和要求 有关问题 Mechanic? Innovative ?,目的意义,毒性剂量 Toxic dosage 安全范围 Safety margin 毒性反应 Toxic reaction: 性质、程度、量毒关系、产生时间，达峰时间, 持续时间及反复产生毒性反应时间、迟发性、蓄积性、耐受性 毒性反应靶器官 Target organ 毒性反应是否可逆 Reversibility,Procedures,Animals Housing Test article Route Dosage and group Administration duration Observation,Procedures 1- animals,rodent non-rodent rat beagle dog mouse mongrel dog monkey,基本内容和要求 - 动物,二种动物，啮齿类首选大鼠，非啮齿类用犬(Beagle犬), 必要时用猴 动物应写明供应单位及邮编，品系及生产合格证号 大鼠6-8周龄，体重差异不超过平均体重的20。3个月以上可选5-6周龄大鼠 Beagle犬4-12月龄 各半,Procedures 2- housing,Diet, T, humidity, light, ventilation Rat: 5 /cage or separated， acclimation 1w Dog: TB test, anthelmintic acclimation: 1-2w / 1m,Procedures 3- test article,test article / solvent / excipient name, batch No. , source, specification, purity, preserve condition, etc same quality criterion,基本内容和要求 - 给药途径,与临床给药途径一致 混入饲料或饮水中灌服时 保证受试药分布均匀 在配制饲料或溶于饮水后仍旧稳定 计量准确 临床iv 时, 大鼠给药周期1月，可用ip代替，im或sc应变换注射部位 必要时改变给药途径,基本内容和要求 - 剂量及分组,三个给药组, 单位: mg(ml,IU) /kg 或 /m2 以不等浓度等容量给药 低剂量组-高于有效剂量，不出现毒性反应 中剂量组-产生轻微或中等度毒性反应 高剂量组-产生明显或严重的毒性反应，或个 别动物死亡 空白对照-溶媒或其它赋形剂，若溶媒或赋形 剂有毒性时则增加正常对照组,基本内容和要求 - 剂量及分组, 5 g/kg, iv 2g/kg仍无毒性反应和死亡或仅个别有毒性反应, 可只做一个50ACD(犬用30ACD)的剂量组,Procedures 6- ad. duration,Tab. Correspond duration of clinical ad. with animal ad. clinical ad. duration animal ad. duration 13d 14d 1w 1m 4w 3m 1m 6m duration 3m ad. 6 day weekly(mon. to sat. ),Procedures 7- Observations Clinical Examinations,rodent non-rodent signs of ill health +pupil , T behavioral changes breath, sialosis reaction to treatment vomiting Dead or moribund animal: necropsy within 1h,Procedures 7- Observations Hematology,Red blood cell count(RBC) Hemoglobin(Hb) Erythrocyte indices (MCV, MCH, MCHC) Hematocrit(Hct) Platlet count White blood cell count and percent differential Coagulation time(CT) Reticulocyte count, Bone marrow smear,Procedures 7- Observations Clinical chemistry,Alanine aminotransferase (ALT) （丙） Aspartate aminotransferase (AST)（草） Alkaline phosphatase (ALP) Total bilirubin（Tbill） Blood urea nitrogen（BUN） Creatinine（Cr） Total protein（TP） Albumin（Alb） Glucose (Glu) Total cholesterol （Tch）,Procedures 7- Observations Urinalysis,Color and appearance pH glucose ketones urobilinogen blood specific gravity nitrite protein bilirubin WBC microscopy of centrifuged deposit,Procedures 7- Observations Pathology,Organ weight assessment: heart liver thyroid lobes and spleen lung parathyroids kidneys brain (lobes weighed pituitary adrenals together) ovaries testes calculate organ weights relative to body weight , paired organs weigh together,Procedures 7- Observations Pathology,Histopathological examination: heart liver spleen lung kidney brain adrenals pancreas stomach duodenum jejunum ileum colon cecum（盲） pituitary thymus spinal cord prostate testes uterus ovaries optic nerve injection site bone and marrow(sternum) urinary bladder lymph nodes(mesenteric) thyroid lobes( and parathyroids),Procedures 7- Observations Pathology,tissues (c+h embedding dead+ sectioning target) staining examination,基本内容和要求 - 检测指标 心电图导联,大动物长期毒性必须做 主要观察指标：心率、P波电压、P-R间期、R波电压、QRS时间、ST段、T波电压和Q-T间期,Procedures 7- Observations Recovery,Observation : 1/31/2 animal, 24w Late toxic reaction and reversibility Items : same as treatment period Not reversible?,Procedures 7- Observations Frequency of lab. investigations,rat 3m Non-rodent last ad. interim twice pretreatment recovery end last ad. once every 1-1.5m recovery end last ad. recovery end,基本内容和要求 - 资料整理,首页写明: 负责者的姓名、职称、实验开始及结束日期、实验承担单位、研究室负责人和资料保存单位 试验指导者、课题负责人、病理学检查、血液生化指标测定、血液学指标测定及给药观察者 第二页书写试验摘要 第三页开始写正文、引言、材料与方法、结果 合理的统计图、表 有差异的指标应进行统计处理 应客观地描述尸检及组织病理学检查结果 对各种异常现象可用半定量的方式表述，揭示量-时关系,Problems,Pretest Dosage Animal & Housing Route Duration Observation Parameters Data handling Archives,Problems 1- pretest,What depend on? Overseas pre-clinical / clinical data Acute toxicity , pharmacodynamics and pharmacokinetics or intended clinical dose How long? 2w - 1m Recombinant article: antibody?,Problems 2- dosage,LD50 MTD MBS ACD 3m 6m 1/10 1 10Cmax 50100 30 50 1/50 1/3 5Cmax 3050 1525 1/100 1/10 Cmax 1020 510 half for dog and monkey,有关问题2-剂量,表 常用动物等效剂量折算表 项 目 人 犬 猴 兔 豚鼠 大鼠 小鼠 成年时体重(kg) 70 12 4 1.5 0.4 0.2 0.02 换算常数(k) 12.3 11.6 11.8 12 10.5 10.5 10 每公斤用药量折算(mg/kg) 1 1.5 2.2 3.1 4.3 5.4 11.0 体表面积折算等效剂量比 1 0.32 0.16 0.07 0.031 0.018 0.0026 ,有关问题2-剂量,由于溶解度(注射剂)关系, 剂量无法再增加时,应允许以最大可溶浓度和最大允许容量给药 一些腔道用药、血浆代用品的高剂量也应采用类似方法 防止犬与大鼠剂量倒置 必要时增加阳性对照组,Problems 3- animal,rodent non-rodent Wistar Beagle dog(4-12m) Sprague Dewley monkey (3y) 6-8w body weight CV20% Duration 6m, natural death ( rat: 1y-15%, 1.5y-50%, 2y-70-80%),有关问题3-饲养管理,有关问题3-分组,分别随机分组 把体重过大、过小去掉，以免差异过大，开始实验时大鼠体重不应超过20 大动物则根据给药前生理生化指标测定把指标过高或过低的动物去掉,有关问题4-给药途径,与临床给药途径一致 注射剂要考虑溶液的pH、刺激性及渗透压等，以免造成注射局部损伤或坏死 大鼠iv1月，长毒可改用ip注射，im或sc可采用四肢多点轮流注射 临床有用药后加上照光(血卟啉类激光)或X-照射(CM-Na光敏剂-射线)，动物上只给药没有其他条件，观察到的毒性较加照光后的毒性低,有关问题4-给药途径,特殊情况下可改变给药途径 胆道给药溶解胆结石 肿瘤局部注射给药(肝瘤注射) 舌下给药 腔道给药(阴道、关节腔注射、硬膜或脊髓腔给药、滴耳药) 内病外治、穴位给药(肝脐贴药或其他穴位给药,)艾炙加中药 药酒治病、中药加烤电 雾化吸入 抗肝癌导向药物动脉注射 Vd可改用iv代替，反之则否,Problems 5,6- observations,Western Chinese Recombinant 34 times 2 times antibody 6m Toxic reaction: properties, degree, dose-toxicity relationship, initiating time，peak time, lasted time, late reaction toxicity, accumulating toxi-city, tolerance everyday or 6 days a week?,Problems 7- parameters,Possible Toxic Reactions pharmaco- chemical pretesting published logical effcts structure results data,Problems 7- parameters,Overloading Reticulocyte count AST ALP BUN Alb,Problems 7- parameters,Tissue: free of fat half rationed： no changes(-) 0, suspected （）0.5，mild（）， median（+）， severe （+) Local inflammation, WBC infiltration, local bleeding , haemostasis, suspected cell degeneration self-infected, sacrifice induced,有关问题7-测试方法,测试方法必须公认，有文献依据 新的测试方法要经同行专家认可 对于某一指标的不同测试方法，应交待清楚选择的理由 方法选择原则是简便、快速、灵敏、准确,有关问题7-测试次数,能反映动态变化 一般行为活动宜每天观察记录 食量宜每天称重 大鼠体重宜每周一次，按体重给药 其它生理指标每半月至月一次 大动物心电图用II导联，至少给药前、给药期间、给药后及停药结束各测一次 发现有阳性指标应加大观察密度,有关问题7-测试次数,大动物生化检测，给药前2次、给药期间-次，停药时及实验结束各1次，这样就可看出动态变化，并能了解是否可逆，不仅可以进行组间比较，也可进行自身对照 大鼠长毒未强调动态观察，只是指出必要时给药期可测一次