倍他福林对营养性肥胖大鼠的减肥作用研究

重庆医科大学 硕士学位论文 倍他福林对营养性肥胖大鼠的减肥作用研究 姓名：刘荣 申请学位级别：硕士 专业：药理学 指导教师：董志;傅洁民 20070501 重庆医科大学硕士研究生学位论文 英文缩写 艮A R B e t a B r D 1 0 D B P F F A H D L - c H R I S O L D L c 硝P N S S B P S i b T C T G U C P 秣陋 英汉缩略语名词对照 英文全称 B 3 a d r e n e r g i cr e c e p t o r b e t a p h r i n e B r o w na d i p o s et i s s u e d i e t - r e d u c e do b e s i t y D i a s t o l i cb l o o dp r e s s u r e f r e ef a t t ya c i d H i 咖d e n s i t yl i p o p r o t e i n c h o l e s t e r o l H e a r tr a t e i s o p r o t e r e n o l L o w d e n s i t yl i p o p r o t e i n - c h o l e s t e r o l M e a na r t e r i a lb l o o d p r e s s u r e n o r m a ls a l i n es o l u t i o n S y s t o l i cb l o o dp r e s s u r e s i b u t r a m i n e T o t a lc h o l e s t e r o l t r i g l y c e r i d e u n c o u p l i n gp r o t e i n W 1 l i t ca d i p o s et i s s u e 中文全称 B 3 肾上腺素能受体 倍他福林 棕色脂肪组织 营养性肥胖 舒张压 游离脂肪酸 高密度脂蛋白胆固醇 心率 异丙肾上腺素 低密度脂蛋白胆固醇 平均动脉压 生理盐水 收缩压 西布曲明 总胆固醇 甘油三酯 解偶联蛋白 白色脂肪组织 重庆医科大学 研究生学位论文独创性声明 本人申明所呈交的论文是我本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研 究成果据我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他 人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得重庆医科大学或其他教育机构 的学位或证书而使用过的材料，与我同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已 在论文中作了明确的说明并表示谢意 申请学位论文与资料若有不实之处，本人承担一切相关责任 学位论文作者签名：士j 垂一日期：上毒互笙L 学位论文版权使用授权书 本人完全了解重庆医科大学有关保护知识产权的规定，即：研究生在攻读学 位期问论文工作的知识产权单位属重庆医科大学本人保证毕业离校后，发表论 文或使用论文工作成果时署名单位为重庆医科大学学校有权保留并向国家有关 部门或机构送交论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阕学校可以公布学 位论文的全部或部分内容( 保密内容除外) 。可以采用影印，缩印或其他手段保 存论文 论文作者签名： 指导教师签名： 日 期： 枷7 2 口 重庆医科大学硕士研究生学位论文 倍他福林对营养性肥胖大鼠的减肥作用研究 摘要 研究背景近年来发达国家和发展中国家都面临着肥胖症患者增 多的严峻形势，肥胖症已经成为世界范围的流行病，如果不及时有效 地控制，将成为严重的健康问题。现在已开发上市的减肥药主要有以 下两类：一是食欲抑制剂，这类药主要是通过调节下丘脑的摄食中枢 使人们产生厌食症状以减少对食物的摄人，如芬氟拉明( f e n f l u r a m i n e ) 和西布曲明( s i b u t r a m i n e ) 等。由于食物含有很多其他机体必需的营养成 份，长期禁食对机体必将产生非常严重的后果，加上芬氟拉明及右旋 芬氟拉明对心脏瓣膜的损伤，目前该药已于1 9 9 7 年被F D A 禁止使用； 西布曲明也因为口干，头痛，心悸，血压升高等不良反应，其应用受 到很大限制。二是脂质吸收抑制剂，如奥利司他( O r l i s t a t ) ，通过抑 制肠道的脂肪酶使脂质在肠道的吸收减少，长期使用可引起体内脂溶 性维生素等物质的缺乏，并由于有致结肠癌危险，美国消费者组织要 求奥利司他撤出市场。 目前，1 3 t A R ( p 3a d r e n e r g i cr e c e p t o r ) 激动剂作为减肥药的开发引 起众多科学家的关注，选择型I b - A R 激动剂通过激动1 3 3 - A R ，促进脂肪 分解，使体内多余的能量用于产热，尤其是高选择性的D 3 A R K 动剂， 既能达到减肥目的，又很少有激动1 3 l 和1 3 2 A R 后引起的不良反应。倍他 福林作为一种潜在的1 3 3 A R 激动剂，目前尚未见相关的在体动物减肥实 2 重庆医科大学硕士研究生学位论文 验的报道。 目的研究倍他福林对营养性肥胖大鼠的减肥作用，探讨其可能 的作用机制，并了解其可能的心血管副作用，为新型减肥药一B 3 肾上 腺素能受体激动剂的进一步开发研究提供实验依据。 方法 1 倍他福林对营养性肥胖大鼠的减肥作用 实验用刚断乳的雌、雄W i s t a r 大鼠，空白组给予基础饲料，模型 组给予营养饲料。造模7 周后，设空白组、模型组、倍他福林低、中、 高剂量组及阳性对照组。低、中、高剂量组分别灌胃给予倍他福林1 0 ， 3 0 ，9 0m g k g d ，阳性对照组灌胃给予西布曲明4m g k g d ，空白组和 模型组均灌胃给予等容积的生理盐水，连续7 周。给药期间每周测量 体重，7 周后处死大鼠，检测脂肪重量、镜下脂肪细胞面积和个数，并 测定血糖和血脂水平等指标。 2 倍他福林对在体大鼠脂肪分解作用及心血管效应 实验用雄性W i s t a r 大鼠，设为空白对照组( 等容积生理盐水 0 2 m l m i n ) 、阳性对照组( 异丙肾上腺素，O 0 1m g k g m i n ) 、倍他福林 低剂量组( O 1m g k g m i n ) 和高剂量组( 1m g k g m i n ) 。将大鼠用3 戊巴比妥钠麻醉，分离颈总动脉插管，连接压力换能器，再与多道生 理信号采集仪连接，用于测量血压和心率变化；分离股静脉，用头皮 针直接穿刺静脉，固定，用于静脉输注待测药和取静脉血。输注待测 药前记录收缩压、舒张压、平均动脉压和心率；通过股静脉用微量泵 输注待测药1 0m i n ，药物输注结束后记录血压和心率，然后立即从股静 3 减肥药排行榜 重庆医科大学硕士研究生学位论文 脉取血，测定血清游离脂肪酸水平，取血后取附睾周围脂肪组织，测 定脂肪组织游离脂肪酸。 结果 1 造模7 周后，模型组雄性大鼠体重较空白组显著增高 0 0 5 ) 。倍他福林显著减轻雄性大鼠的 体重和体重的增长值；但未减轻雅陛大鼠的体重和体重增长值。倍他 福林能显著减轻雄性和雌性大鼠的白色脂肪组织( W h i t ea d i p o s e t i s s u e ， W A T ) 和棕色脂肪组织( B r o w na d i p o s et i s s u e ，B A T ) 湿重，降低血清 游离脂肪酸( f r e ef a t t ya c i d ，F F A ) 水平，但仅降低雄性大鼠血糖和血 清甘油三酯( t r i g l y c e r i d e ，T G ) 水平。倍他福林显著减小雌雄性大鼠 的镜下脂肪细胞的面积，显著增加细胞个数。 2 雄性W i s t a r 大鼠分别静脉输注倍他福林和异丙肾上腺素10 m i n 后，各给药组血清和脂肪组织F F A 水平均较空白对照组升高；倍他福 林低剂量组中血压和心率均无统计学意义，高剂量组舒张压和平均动 脉压显著降低，收缩压和心率无统计学意义。 结论 倍他福林能有效减慢雄性营养性肥胖大鼠的体重增长速度，但不 能减慢正常体重的雌性大鼠的体重增长速度。倍他福林显著减轻了雌 性和雄性大鼠的W A T 和B A T 湿重，降低血清F F A 水平；但仅降低雄 性大鼠的血糖和血清T G 水平。静脉输注倍他福林后，血清和附睾脂肪 组织的F F A 含量较输注前升高，表明倍他福林减肥的可能的机制是促 进脂肪分解，减少脂肪组织含量。另外倍他福林对心血管系统影响小， 4 减肥药排行榜 重庆医科大学硕士研究生学位论文 安全性高，仅高剂量( 1 m g k g m i n ) 有降低血压的作用，表明该药物 适合临床开发，并且本实验结果也为其用于临床可能引起的不良反应 提供了实验依据。 关键词：倍他福林，营养性肥胖模型，减肥，1 3 3 肾上腺素能受体， 脂肪分解 减肥药排行榜 重庆医科大学硕士研究生学位论文 S T U D Yo NA N T I O B E S I T YE F F E C T So FB E T A P H R I N E I ND I ET _ I N D U C E Do B E S I T YR A T S A B S T R A C T B a c k g r o u n dD e v e l o p e da n dd e v e l o p i n g c o u n t r i e sa r ea l l c o n f r o n t e dw i t ht h es e v e r es i t u a t i o no fi n c r e a s i n gn u m b e ro fo b e s i t y O b e s i t yh a sb e c o m eaw o r l d w i d ee p i d e m i c ，a n di tw i l lb e c o m eas e v e r e h e a l t hp r o b l e mi fn o tc o n t r o l l e de f f i c i e n t l y N o wt h ea n t i - o b e s i t ya g e n t s o ns a l em a i n l yh a v et w os p e c i e s ：o n ei sa p p e t i t ei n h i b i t o rw h i c hm a i n l y w o r k sb ya c t i n go na p p e t i t ec o n t r o lc e n t e r si nt h eh y p o t h a l a m u st o d e c r e a s ea p p e t i t e 。s u c ha sf e n f l u r a m i n ea n ds i b u t r a m i n e H o w e v e r , f o o d c o n t a i n sl o t so fn e c e s s a r yn u t r i e n ts u b s t a n c e s 1 0 n g - t e r mf a s t i n gw i l ld o g r e a t h a r mt oh u m a nh e a l t h W h a t S m o r e ，f e n f l u r a m i n ea n d d e x f e n f l u r a m i n ec a ni n j u r ec a r d i a cv a l v e s ，w h i c hw e r ef o r b i d d e nb yF D A i n1 9 9 7 T h e p l e n t y o fa d v e r s ee f f e c t so fS i b u t r a m i n es u c ha s m o u t h d r y m g ，h e a d a c h e ，p a l p i t a t i o n a n db l o o d p r e s s u r e e l e v a t i o n r e s t r i c t e di t su s ea sa l la n t i - o b e s i t ya g e n t n eo t h e ri si n h i b i t o ro fd i e t a r y f a ta b s o r p t i o n O r l i s t a t , w h i c hi n h i b i tl i l ：I a s ei ni n t e s t i n a lt r a c tt od e c r e a s e l i p i da b s o r p t i o n I nv i e wo fu s i n gi t f o ral o n gt i m ec o u l dc a u s et h e d e f i c i e n c yo fl i p i d - s o l u b l ev i t a m i n ，a n di n c r e a s et h er i s ko fc o l o n c a r c i n o m a , A m e r i c a nc o n s u m e ro r g a n i z a t i o nr e q u e s t st ow i t h d r a wi tf r o m 6 减肥药排行榜 重庆医科大学硕士研究生学位论文 m a r k e t M a n ye x p e r t sf o c u so ne x p l o i t i n gp 3 - A R ( 1 3 3a d r e n e r g i er e c e p t o r ) a g o n i s ta saa n t i o b e s i t ya g e n tn o w S e l e c t i v e1 3 3 - A Ra g o n i s t sc a ns t i m u l a t e p 3 一珉p r o m o t el i p i dm o b i l i z a t i o na n dm a k em o r ee n e r g yp r o d u c eh e a t ， E s p e c i a l l yh i 曲s e l e c t i v ep 3 - A Ra g o n i s t sC a nn o to n l yr e d u c eb o d yw e i g h t , b u ta l s oh a v el e s sa d v e r s ee f f e c t sc a u s e db ys t i m u l a t i n gp la n dp 2 _ A R T h e r e l a t e dr e p o r t sa b o u ta n i m a la n t i o b e s i t ye x p e r i m e n t so fb e t a p h f i n ea sa p o t e n t i a l1 3 3 - A Ra g o n i s th a v e n o tb e e ns e e na tp r e s e n t o b j e e t i v e s T h i ss t u d yW a si n i t i a t e dt oi n v e s t i g a t et h ea n t i o b e s i t y e f f e c t so fb e t a p h r i n ei nd i e t - r e d u c e do b e s i t yr a t s ( D I O ) ，t oe x p l o r ei t s p o s s i b l ea c t i o nm e c h a n i s mo f t h ew e i g h tl o s se f f e c ta n dh a v eap r e l i m i n a r y k n o w l e d g eo f i t sc a r d i o v a s c u l a ra d v e r s ee f f e c t s T h i ss t u d ym a y p r o v i d ea p r e l i m i n a r ye x p e r i m e n t a lb a s i sf o rd e v e l o p i n gan e wa n t i o b e s i t ya g e n t M e t h o d s C h a p t e r1 E f f e c to f b e t a p h r i n eo nd i e t - r e d u c e do b e s i t ym o d e l s D I Om o d e l sw e r ee s t a b l i s h e db yt h ej u s ta b l a c t a t i n gm a l ea n df e m a l e W i s t a rr a t sf e dh i g l la l i m e n t a r yd i e tf o r7w e e k s ，t h e nt h em o d e lr a t sw e r e r a n d o m i z e di n t of i v eg r o u p sb yi n t r a g a s t r i ea d m i n i s t r a t i o nw i t hs i b u l r a m i n e 4m g k g d ，b e t a p h r i n e10 ，3 0 ，9 0m g k g da st h es a m ev o l u m e 舔n o r m a l s a l i n es o l u t i o nf N S ) i nc o n t r o lg r o u pa n dm o d e lg r o u pf o r7w e e k s ， r e s p e c t i v e l y D u r i n gt h et h e r a p y , w em e a s u r e db o d yw e i g h te v e r yw e e k A l l o ft h ea n i m a l sw e r es a c r i f i c e db e f o r em e a s u r i n gt h ew e i g h to fa d i p o s e 7 减肥药排行榜 重庆医科大学硕士研究生学位论文 t i s s u e ，t h ea r e a sa n dn u m b e r so fa d i p o c i t y , t h el e v e lo fb l o o dg l u c o s ea n d s e r u ml i p i da tt h ee n do f t h ee x p e r i m e n t C h a p t e r 2E f f e c t so f b e t a p h r i n e o n l i p i d m o b i l i z i n g a n d c a r d i o v a s c u l a re f f e c t s ( i nV i V i nr a t s W ec h o s eW i s t a rr a t sa n dr a n d o m i z e dt h e mi n t of o u rg r o u p s ，t h e n a d m i n i s t r a t e di s o p r o t e r e n o l ( i s o ) 0 0 1 m g k g m i n ，b e t a p h r i n eO 1 ，1 m g k e d m i nr e s p e c t i v e l yb yi n t r a v e n o u si n j e c t i o n ，a st h es a m ev o l u m ea s n o r m a ls a l i n es o l u t i o n ( N S ) i nc o n t r o lg r o u p A f t e ra n e s t h e t i z e db y p e n t o b a r b i t a ls o d i u m ，c o m n l o nc a r o t i da r t e r i e so fr a t sw e r es e p a r a t e da n d i n s e r t e dw i t hc a t h e t e r sl i n k e dw i t h p r e s s u r e t r a n s d u c e rw h i c hW a s c o n n e c t e dw i t hd e t e c t i n gi n s t r u m e n t ；t h e nf e m o r a lv e i n sw e r es e p a r a t e d a n dp u n c t u r e dd i r e c t l yb ys c a l pa c u p u n c t u r e s ，f r o mw h i c ht h ea g e n t sw e r e i n f u s e da n db l o o ds a m p l e sw e r eo b t a i n e d S y s t o l i cb l o o dp r e s s u r e ( S B P ) ， d i a s t o l i cb l o o dp r e s s u r e ( D B P ) ，m e a na r t e r i a lb l o o dp r e s s u r e ( M A P ) a n d h e a r tr a t e w e r et e s t e db e f o r ea n da f t e ri n f u s i o nr e s p e c t i v e l y , t h e n b l o o ds a m p l e sa n de p i d i d y m a la d i p o s et i s s u ew e r eo b t a i n e da f t e r10 m i n u t e st e r m i n a t i n gi n f u s i o nf o rt h em e a s u r eo ft h ec o n c e n t r a t i o no ft h e f r e ef a t t ya c i d ( F F A ) R e s u l t s A tt h ee n do f7w e e k so fe s t a b l i s h i n gm o d e l ，t h eb o d yw e i g h to ft h e m a l er a t si nm o d e lg r o u pw e r eh i g h e rt h a nc o n t r o lg r o u ps i g n i f i c a n t l y o 0 5 ) 8 减肥药排行榜 重庆医科大学硕士研究生学位论文 B e t a p h r i n er e d u c e db o d yw e i g h to f o b e s em a l er a t sa n db o d yw e i g h tg a i n s i g n i f i c a n t l y , b u ti th a d o ne f f e c t so nb o d yw e i g h ta n db o d yw e i g h tg a i no f f e m a l er a t s I nad o s e d e p e n d e n tm a n n e r , b e t a p h r i n ed e c r e a s e dt h ew e i g h t o fW A Ta n dB A To fm a l ea n df e m a l er a t s B e t a p h r i n ed e c r e a s e dt h el e v e l o fs e r u n lf r e ef a t t ya c i d ( F F A ) o fm a l ea n df e m a l er a t ss i g n i f i c a n t l y , b u t o n l yd e c r e a s e dt h el e v e lo fb l o o dg l u c o s e ，s e r u mt r i g I y e r i d e ( T G ) o f m a l e r a t s B e t a p h r i n ed e c r e a s e da d i p o c y t ea r e a sa n di n c r e a s e dt h en u m b e r so f a d i p o c y t eo f m a l ea n df e m a l er a t ss i g n i f i c a n t l y A R e r1 0m i ni n f u s i o no fb e t a p h r i n ea n di s o p r o t e r e n o l ，r e s p e c t i v e l y , t h el e v e lo fs e r u l la n da d i p o s et i s s u ec o n c e n t r a t i o no fF F Aw e r e i n c r e a s e di na l ld o s eg r o u p sc o m p a r e dw i t ht h o s eo fc o n t r o lg r o u p ；S B P 、 D B P 、M A Pa n dH Ri nl o w - d o s eg r o u pw e r en o tc h a n g e d ；b u tD B Pa n d M A Pi nh i g h - d o s eg r o u pw e r ed e c r e a s e ds i g n i f i c a n t l y ( p O 0 5 。“p o 0 5 ”p o 0 5 ，“p O 0 5 ，”删0 5 ，”p O 0 5 ，“p o 0 5 ，“p 0 0 5 ，“p o 0 5 ”p 0 0 5 ，p O 0 5 ，“p 0 0 5 ，“p O 0 5 ，“p o 0 5 ”p o 0 5 ，”p o 0 5 ，“p o 0 5 ，“p o 0 5 ”p O 0 5 ，”p O 0 1V SS i b 邡 肿 脚 脚 劢 肿 娜 肿 3 3 2 2 l L n n a，Iogv皇gEo 重庆医科大学硕士研究生学位论文 3 5 倍他福林对镜下附睾周围脂肪细胞的影响雌雄大鼠模型组脂肪细 胞面积和个数与空白组比较有显著意义( p o 0 1 ) ；中、高剂量组和西布曲明组脂 肪细胞面积较模型组显著减小，细胞个数较模型组显著增加( p o 0 5 ，“p o 0 5 ，“p o 0 5 ，“p o 0 5 “p O 0 5 ，+ “p o 0 1V SS i b 4 5 0 0 4 0 0 0 肿 3 5 0 0 o o 3 0 0 哪 1 5 舯 1 0 吡 5 0 n o o 0 c o n t r o lm o d e lB e t a - l o wB e t a - B e t a - h l g h S i b n 胡d k 图5 1 倍他福林对营养性肥胖大鼠脂肪细胞面积的影响( ；士s D ，n = 田 F i g5 - 1I n f l u e n c eo fb e t a p h r i n e0 1 1a r e a so fa d i p o c i t yo f W i s t a rr a t s 6 舢0 5 ，址呻0 5 ，“p O 0 5 ，”p o 0 5 ，p o 0 5 ”p o 0 5 ，“p o 0 5 ，丛p o 0 5 ，辨p O 0 5 ”p o 0 5 ，”p 0 0 1V SS i b 4 小结 采用2 l 天刚离乳雌雄W i s t a r 大鼠，饲以营养性饲料7 周后，造模组雄性大鼠 体重较空白组显著性增高( p o 0 1 ) ，成功得到雄性营养性肥胖大鼠模型；雌性大 鼠体重与空白组无统计学意义。实验结束时测定动物血脂和血糖，雄性大鼠血清 T G 、T C 和F F A 水平较空白组显著性升高( p o 0 5 ) ，提示出现血脂代谢紊乱；雌 雄性大鼠血糖均较空白组显著性升高( p o 0 5 ) ，提示血糖代谢异常，雌性大鼠血 清T G 、L D L c 和H D L c 水平较空白组显著性降低( p o 0 5 ) ，可能是雌性激素引 起的血脂异常。 倍他福林各剂量组较模型组显著减轻了雄性大鼠体重和体重的增长值，表明 倍他福林能有效减慢雄心大鼠的体重增长速度，倍他福林低剂量组抑制体重增长 的作用弱于西布曲明组，中剂量组作用与西布曲明组相当，高剂量组第7 周时作 用强于西布曲明组；但倍他福林未减轻雌性大鼠体重和体重增长值，表明不能减 慢雌性大鼠的体重增长速度。倍他福林显著地减轻了雄性大鼠和雌性大鼠的W A T 3 1 如 鲫 们 加 如 们 们 加 普Q o 霉j Z 重庆医科大学硕士研究生学位论文 和B A T 湿重，降低了血清F F A 水平，但仅降低了雄性大鼠的血糖和血清1 G 水平。 倍他福林减小了雌雄大鼠镜下脂肪细胞的面积，增加了脂肪细胞个数。 重庆医科大学硕士研究生学位论文 第二部分 倍他福林对在体大鼠的脂肪分解作用和心血管效应 1 材料 1 1 试验药品 盐酸异丙肾上腺素注射液( 批号6 E 2 0 0 0 2 )上海禾丰制药有限公司 倍他福林( 原料药)美国盛代国际有限公司 肝素钠注射液( 批号2 0 0 3 0 6 0 7 )天津市生物化学制剂厂 1 2 试验器材 C P 6 4 型电子天平 R M 6 2 8 0 C 多道生理信号采集处理系统 Y P l 0 0 型压力换能器 W S Q - A 型微量输液器 Z S 8 3 1 型内切式组织匀浆机 A U 5 4 0 0 型全自动生化分析仪 D L - 5 B 型低速大容量离心机 K K 2 2 E o O n 西门子冰箱 M D F U 5 4 “立式低温冰箱 1 3 试验试剂 游离脂肪酸测定试剂盒 1 4 试验动物 德国s a r t o r i u s 公司 成都仪器厂 高碑店市新航机电设备有限公司 江苏沙洲实验仪器厂 浙西机械厂 日本O 胁口U S 公司 上海安亭科学仪器厂 德国西门子公司 日本三洋 四川省迈克科技有限责任公司 清洁级雄性W i s t a r 大鼠，2 0 0 - 2 5 0 9 ，共2 4 只，由重庆中药研究院实验动物中 心提供，合格证号：S C X K ( 渝) 2 0 0 2 0 0 0 4 ，实验动物在S P F 条件下饲养，实验动 3 3 重庆医科大学硕士研究生学位论文 物使用许可证号：S Y X K ( 渝) 2 0 0 2 0 0 1 。 2 方法 2 1 分组 实验设空白对照组( 等体积生理盐水0 2 m l m i n ) ，阳性对照组( 异丙肾上腺素 O 0 1m g k g m i n ) ，倍他福林组低剂量组( B e t a p h r i n e ，0 1m g k g m i n ) ，高剂量组 ( B e t a p h r i n e ，1m g k g m i n ) 。 2 2 方法 实验用雄性W i s t a r 大鼠，将大鼠用3 戊巴比妥钠麻醉，分离颈总动脉，用充 满肝素溶液的导管插管，导管另一端连接压力换能器，换能器再与多道生理信号 采集仪连接，用于测量血压和心率变化；分离股静脉，用头皮针直接穿刺静脉， 固定，用于静脉输注待测药和取血。输注待测药前记录收缩压、舒张压、平均动 脉压和心率；通过股静脉用微量泵输注待测药1 0r a i n ，药物输注完后记录血压和 心率，然后立即从股静脉取血测定血清游离脂肪酸，取附睾周围脂肪组织测定组 织游离脂肪酸 2 2 1 。 2 3 检测指标 脂肪组织F F A 浓度：准确称取组织湿重，按重量体积比1 ：4 ( g ：m 1 ) 的比例加 入生理盐水，冰浴中进行匀浆，然后3 0 0 0 转分离心1 0 分钟，取上清液进行测定。 血清F F A 浓度、收缩压、舒张压、平均动脉压、心率 2 4 统计方法 全部统计分析采用用S P S S l 0 0 统计软件进行，选择p 0 0 5 为有统计学意义； 计量资料以均数4 - 标准差( x 士S D ) 表示；实验组各组与对照组各项指标中的计量 资料采用单因素方差分析和q 检验分析组间差异。 3 结果 重庆医科大学硕士研究生学位论文 3 1 倍他福林对血压和心率的影响 倍他福林低剂量组在输注前后，收缩压、舒张压、平均动脉压和心率均无统 计学意义；高剂量组输注后舒张压和平均动脉压均较输注前显著降低，但收缩压 和心率无统计学意义。倍他福林对血压和心率的影响见表6 1 、6 2 、6 3 、6 - 4 和图 6 1 、6 - 2 、6 3 、6 - 4 。 表6 - 1 倍他福林时麻醉大鼠收缩压的影响( ；士s D ，n = 6 ) T a b6 - 1I n f l u e n c eo f b e t a p h r i n eo ns y s t o l i cb l o o dp r e s s u r eo f m a l eW i s t a rr a t s 2 i 一1 5 0 0 兽 l n 0 0 o 0 0 6 P O 0 5 ，“P 0 0 5 ，“v O 0 5 ，A A p o 0 5 ，“p o O iV Sa f t e ri n f u s i o n 3 5 重庆医科大学硕士研究生学位论文 表6 - 2 倍他福林对麻醉大鼠舒i 长压的影响( ；士s D ，n - - 6 ) T a b 6 - 2 I n f l u e n c eo f b e t a p h r i n e O nd i a s t o l i c b l o o d p r e s s u r eo f m a l e W i s t a r r a t s 6 p O 0 5 ，“p 0 0 5 ，“p o 0 5 ，A A p o 0 5 ，mp O 0 5 ，“删0 5 ，“p 0 0 5 ，“p o 0 5 ，p 0 0 5 ，“p 0 0 5 ，“p o 0 5 ，“p o 0 5 ，“p 0 0 5 ，“p O 0 5 ，“p 0 0 5 ，“刚0 5 ，“p 0 0 5 ，丛p o 0 5 ，“刚0 1V Sc o n t r o | 4 小结 倍他福林低剂量组对舒张压、收缩压、平均动脉压和心率无统计学意义，高 剂量显著降低了舒张压和平均动脉压，对收缩压和心率无统计学意义。阳性对照 组和倍他福林高、低剂量组的血清及脂肪组织游离脂肪酸水平均较空白组升高， 表明倍他福林促进了脂肪细胞的分解。 加 他 瞄 吆 o I，Io量u)啊：I。j器召冀odlpv 重庆医科大学硕士研究生学位论文 讨论 1 营养性肥胖模型评价 目前最常用来研究的肥胖模型是营养性肥胖大鼠( 即食源性肥胖大鼠， D i e t - i n d u c e do b e s i t yr a t , D I O ) 模型，因为与人类饮食引起的肥胖症有很多相似的 特征，故目前被广泛应用于肥胖症和减肥药的试验研究c 2 3 驯。目前国内外均没有 统一的造模标准，本实验将模型组和空白组体重有统计学意义视为造模成功【2 5 1 。 单纯性肥胖大鼠模型的复制方法简便易行，由于摄食高脂肪高营养饲料，产 生热量超过体内各种代谢过程的需要，过多的热量转化为脂肪积聚起来而引起肥 胖。本实验采用雌雄两种性别的大鼠造模，发现相同的造模条件，性别差异对造 模的影响很大。本研究采用2 l 天刚离乳雌雄W i s t a r 大鼠，饲以营养性饲料7 周后， 造模组雄性大鼠体重较空白组显著性增高( p o 0 1 ) ，成功得到雄性营养性肥胖大 鼠模型；而模型组雌性大鼠体重与空白组接近( p o 0 5 ) 。实验结束时处死动物， 测定血脂和血糖，模型组雄性大鼠血清T G 、T C 和F F A 水平较空白组升高，出现 血脂代谢紊乱；而雌性大鼠T G 、L D L - c 水平降低，可能是雌性激素引起的血脂异 常。具体的原因有待进一步研究。 2 药效学剂量的确定与评价 目前倍他福林尚未见在体动物减肥实验报道，给药剂量很难确定。现仅有 S y n t e c h ( S S P F ) 公司报道的该物质的成人最大用量为1 0m g k d ( 根据动物和人标 准体表面积换算的大鼠用量为7 2m g k g d 2 6 1 ) ，和急性毒性实验报道的口服L D S 0 为8 9 6 3 m g k g ，因此结合上述两点和新药( 西药) 临床前研究指导原则将用药剂 量设为低、中、高剂量组，分别为l O m g k d ，3 0 m g a c g d ，9 0 m g k g d 。在减慢体 重增长速度作用中，低剂量倍他福林作用弱于西布曲明，中剂量组与西布曲明相 当，高剂量组的作用则强于西部曲明。 3 倍他福林的减肥作用 倍他福林是8 3 A R 激动剂奥克帕胺的半合成衍生物，结构与肾上腺素能受体 激动剂( 如肾上腺素，异丙肾上腺素等) 非常相似，因此其作用与交感神经兴奋 时所产生的效应相似。肾上腺素能受体激动剂作用同交感兴奋时一样，有着广泛 4 1 重庆医科大学硕士研究生学位论文 的心血管、平滑肌、脂肪分解和糖代谢效应，倍他福林作为潜在的肪A R 激动剂， 需要做相关的实验以了解其确切的作用效果，可能的作用机制及相关的副作用， 为一种新型的减肥药的开发提供实验依据。 本实验用营养性肥胖大鼠模型验证了倍他福林的减肥作用。结果显示：倍他 福林各剂量组较模型组显著减轻了雄性大鼠体重和体重的增长值，表明倍他福林 能有效减慢体重的增长速度，倍他福林低剂量组抑制体重增长的作用弱于西布曲 明组，中剂量组作用与西布曲明组相当，高剂量组第7 周时作用强于西布曲明组； 但倍他福林未减轻雌性大鼠体重和体重增长值，表明不能减慢雌性大鼠的体重增 长速度。倍他福林能显著地减轻了雄性大鼠和雌性大鼠的W A T 和B A T 湿重，降 低F F A 水平，但仅降低了雄性大鼠的血糖和血清T G 水平。倍他福林减小了雌雄 大鼠镜下脂肪细胞的面积，增加了脂肪细胞个数。倍他福林对雌性大鼠与雄性大 鼠作用的差异的可能原因是雌性营养性肥胖大鼠造模不成功，体重较轻，高血脂 水平没有形成。 上述实验中倍他福林显著降低了雄性大鼠的血糖水平，说明倍他福林有一定 的抗糖尿病作用。尚枷t 激动剂降糖作用的具体机制尚未完全阐明，国内外许多学 者对其进行了深入的探讨，其可能机制现有：其一是增强胰岛素敏感性 2 7 1 ，可能 主要是由于选择性减少内脏脂肪，降低外周组织的胰岛素抵抗，抑制了内源性葡 萄糖的产生所致，从而纠正糖耐量异常和血脂异常；其二是提高G L U T 4 水平嗍， 有研究发现髓- A R 激动剂可提高W A T 和B A T 中的G L U T 4 水平，而肌肉中的 G L U T 4 水平未见改变，对葡萄糖摄取最多的组织是脂肪组织，而并不是以往所认 为的肌肉组织，但肌肉组织对葡萄糖的摄取也有所增加，后者可能是通过组织中 存在的艮_ A R 来介导的。因此，认为肥胖动物高血糖和高胰岛素血症的改善除了 与胰岛素受体数目增加及脂肪组织的减少有关，同时也与W A T 和B A T 中G L U T 4 含量的增加、肌肉组织摄取葡萄糖能力的提高密切相关；其三是促进胰岛素分泌 1 2 9 , 3 0 ，目前认为该作用是通过刺激W A T 中B 3 - A R 来介导的，或B A T 和W A T 协同 作用所实现的，W A T 通过脂肪分解产生游离脂肪酸( F F A ) 或其他信号物质，直接或 间接改变胰岛1 3 细胞功能。 4 倍他福林对在体大鼠脂肪分解作用 倍他福林对在体大鼠脂肪分解作用实验中，高、低剂量组均升高了血清和脂 4 2 重庆医科大学硕士研究生学位论文 肪组织游离脂肪酸水平，同异丙肾上腺素( t o o ) 作用一致，说明可能具有肾上腺素 能样的促进脂肪分解作用，但本实验中高、低剂量组无剂量依赖性，可能是输注 时间太短，未达到最大脂肪分解效应。B 3 A R 与1 3 1 - A g 和f h - A R 均属于O 蛋白偶 联受体超家族，G 蛋白贯通膜7 次，并通过配位体与受体结合，激活脂肪细胞内 腺苷酸环化酶，增强环磷酰胺激活蛋白磷酸激酶( P K A ) 的功效。P K A 能激活激素敏 感性脂肪酶的磷酸化过程，活化的激素敏感性脂肪酶( H S L ) 具有分解甘油三酯生 成游离脂肪酸和甘油的功能。p 3 - A R m R N A 主要分布在W A T 和B A T 上，尚- A R 激 动剂作用于脂肪组织p 3 - A R ，促进脂肪分解，减少脂肪组织含量，进而减轻体重。 5 倍他福林对在体大鼠心血管效应 倍他福林