课件：第七章真核细胞型微生物.pptxVIP

第七章 真核细胞型微生物,第一节 真菌（Fungus）概述,真核细胞型微生物（具有细胞壁和典型细胞核，细胞结构比较完整，不含叶绿素，无根、茎、叶的分化） 广泛存在自然界，少数为单细胞（酵母） ，多数为多细胞（霉菌和蕈菌 ） 多数对人类有益，仅少数致病，也多为条件致病，称为病原性真菌。 比细菌大几倍至几十倍，用普通光学显微镜放大100-500倍就可看清。,真菌不是植物 真菌不含叶绿素，以吸收为营养方式，寄生或腐生，无根、茎、叶的分化。,具有典型的细胞结构，分单细胞和多细胞两大类。,1、单细胞真菌：圆形或卵圆形。 酵母型真菌：由母细胞以芽生方式繁殖，如新生隐球菌； 类酵母型真菌：芽生方式繁殖，有假菌丝（芽管延长不脱落），如白假丝酵母菌。,生物学性状,形态与结构,单细胞真菌形态,新生隐球菌,新生隐球菌,酵母菌出芽繁殖,芽生孢子成熟后脱落成独立个体,2、多细胞真菌：菌丝与孢子交织成团-丝状菌（霉菌,mold）。,各种丝状菌的菌丝和孢子形态不同，是鉴别真菌的重要标志。,多细胞真菌形态,spore,hypha,Penicillium,（1）菌丝 hypha,在环境适宜情况下由孢子长出芽管，逐渐延长呈丝状，称菌丝，菌丝交织成团称菌丝体。,菌丝形态多样，故菌丝形态有助于菌种鉴别,（2）孢子（spore)：是真菌的繁殖器官。由生殖菌丝产生而成，一条菌丝可长出多个孢子。在适宜条件下，孢子可发芽伸出芽管形成菌丝。,无性孢子：菌丝上的细胞分化而成，并不发生细胞融合。 大多数病原性球菌属之。 有性孢子：由同一菌体或不同菌体上的二个细胞融合形成。,孢子的形态多样，可作为鉴别及分类的依据。,大分生孢子 大小、细胞数和颜色是鉴定的重要依据,小分生孢子 真菌都能产生，诊断意义不大,芽生孢子 假菌丝,厚膜孢子,关节孢子,分生孢子,叶状孢子 由菌丝内细胞直接形成,孢子囊孢子 由菌丝末端膨大成孢子囊，内含许 多孢子，如毛霉，根霉,分生孢子由菌丝末端的细胞分裂形成，单个、成簇或链状排列,真菌孢子,一条菌丝可产生多个孢子,抵抗力较强，煮沸时间短不死,抵抗力不强，60-70C 短时间即死,是一种繁殖方式,不是繁殖方式,一个细菌只产生一个芽胞,1、,2、,3、,细菌芽胞,犬小孢子菌之大分生孢子,培养与繁殖,特点：营养要求不高 最适PH(4.0-6.0) 高湿度和氧 最适温度：22-28，深部真菌为37。 培养基：沙保弱(Sabouraud)培养基，生长缓慢，1-4周才出现典型菌落 繁殖方式： 单细胞-出芽 多细胞-孢子 菌落： 单细胞-酵母型菌落、 类酵母型菌落（假菌丝），如念珠菌 多细胞-丝状菌落 染色：小培养和乳酚棉蓝染色观察菌丝和孢子的结构和排列,酵母型菌落：单细胞真菌的菌落形式，菌落湿润，柔软而致密，形态与一般菌落相似。如隐球菌。,丝状菌落：多细胞真菌的菌落形式，由许多疏松的菌丝体构成，菌落呈棉絮状，绒毛状或粉末状。,类酵母型菌落：部分单细胞真菌在出芽繁殖后，芽管延长不与母细胞脱离，形成假菌丝，假菌丝由菌落向下生长，伸入培养基。如假丝酵母菌。,酵母型菌落,C. albicans菌落(类酵母型),曲霉属,青霉菌落,抵抗力,对干燥、日光、紫外线及一般消毒剂抵抗力强 对热敏感，601小时菌丝、孢子均被杀死 对2%石碳酸、0.1%升汞、2.5%碘酊或10%甲醛敏感 对常用于抗细菌感染的抗生素不敏感。 对灰黄霉素、解霉菌素、二性霉素B、制霉菌素、咪康唑、克霉唑、酮康唑、氟康唑和伊曲康唑敏感,真菌的毒力 37生长 粘附因子 酵母相菌丝相转换 侵袭性酶类如蛋白酶、磷脂酶 荚膜（隐球菌）,致病性和免疫性,致病性感染： 浅部真菌感染，如皮肤癣真菌病，这些真菌有嗜角质性，在皮肤局部大量繁殖后，通过机械刺激和代谢产物的作用，引起局部炎症和病变。深部感染真菌遭吞噬细胞吞噬后，不被杀死而能在细胞内繁殖，引起组织慢性肉芽肿性炎症和组织坏死溃疡形成。,条件致病性感染： 内源性真菌感染, 机体免疫力低下时发生，如白假丝酵母菌、曲霉、毛霉等引起。,超敏反应： 敏感患者吸如孢子或菌丝,引起超敏反应 如荨麻疹、哮喘、变应性鼻炎等。,真菌性中毒： 粮食受潮霉变，摄入真菌或其产生的毒素后可引起急、慢性中毒称为真菌中毒症（mycotoxicosis) 。主要有：黄曲霉毒素和镰刀菌毒素 地区性、季节性、无传染性,免疫性,1.天然免疫 免疫力与机体免疫状态有关 皮肤粘膜屏障作用（皮脂腺分泌不饱和脂肪酸） 正常菌群的拮抗作用如白色念珠菌 吞噬细胞的作用：中性粒细胞和巨噬细胞在抗真菌感染中起重要作用，真菌的孢子或酵母相的真菌易被其吞噬。近年来发现tuftsin（促癣吞噬肽）可增强中性粒细胞的吞噬和杀菌作用,免疫性,2.获得性免疫,真菌感染的痊愈与细胞免疫有关细胞免疫，Th1细胞产生IFN-IL-2等激活巨噬细胞，Th1细胞还可诱发迟发型超敏反应，控制真菌感染的扩散 特异性抗体可通过中和作用抑制真菌吸附，通过调理作用增强吞噬细胞的吞噬，但抗体与补体对真菌的溶菌作用不明显，可能与其胞壁较厚有关,2019/8/6,29,可编辑,微生物学检查法,标本 浅部感染真菌 毛发、皮屑、指甲 深部感染真菌 痰、血液、脑脊液等 直接镜检： 浅部标本-KOH处理后镜检，通常不染色 假丝酵母菌-革兰染色（芽生孢子、假菌丝） 隐球菌-墨汁负染（厚荚膜） 其他多细胞真菌-特殊染色如乳酚棉兰染色，镜检,分离培养 常用于直接镜检不能确定有无及种类，常用沙氏培养基，培养方法常用试管法和小培养。菌落特征是鉴定的重要依据。 组织病理学检查 血清学检查 浅部感染真菌不作血清学检查，深部感染真菌可检测其特异性抗原 皮试 如皮肤癣菌素、孢子丝菌素假丝酵母菌抗原，类似于PPD皮试,防治原则,皮肤癣菌的传播主要靠孢子 深部感染真菌大多是一些条件致病菌，预防的关键是提高机体抵抗力 局部感染治疗：外用药有酮康唑、咪康唑和克霉唑 系统感染治疗：口服有两性霉素B、伊曲康唑及咪唑类抗真菌药等,第二节 常见的病原性真菌,一、皮肤癣真菌 （Dermatophytes）,引起皮肤浅部感染 嗜角质蛋白，侵犯部位：角化的表皮，毛发，指（趾）甲 病理变化：由真菌增殖及代谢产物刺激宿主引起,一种皮肤癣菌可在不同部位引起病变 相同部位的病变也可由不同的皮肤癣菌引起,指（趾）甲 皮肤 毛发 毛癣菌 + + + 表皮癣菌属 + + - 小孢子癣菌属 - + +,脚癣 灰指甲,临床意义,皮肤癣菌易侵犯人体皮肤、指甲、毛发的 角蛋白组织并生长繁殖致病，是因为其能 产生角质溶解酶。皮肤癣菌是接触传染， 只要反复接触患者均有可能被感染。在同 一病人有不同的临床表现，如毛癣菌属可 引起发癣、体癣、甲癣；而相同部位的病 可由不同皮肤癣菌引起，如甲癣(俗称灰指 甲)可由毛癣菌属和表皮癣菌属引起 。,微生物检验,1标本采集 采集新发生的皮肤损害边缘皮屑；指甲近尖端下面甲屑；拔取无光泽病发，黄癣采集黄癣痂。将标本盛于清洁纸袋，鳞屑要用黑纸包好。,2直接显微镜检查 皮屑标本用10KOH液制成湿片，指甲用25KOH或25NaOH含 5甘油处理。镜检可见透明、有隔，常有分支的菌丝及成链的关节孢子，三个癣菌属难以鉴别。毛癣菌属感染病发有发外型和发内型孢子，而小孢子菌属只有发外型孢子。,3分离培养与鉴定,皮屑、甲屑和病发标本，先用70乙醇或在青、链霉素混合液内处理 5min，再用生理盐水洗3次，然后接种沙氏琼脂斜面，25培养，每周观察菌落形态及颜色，直至第四周。挑取菌落镜检菌丝和孢子，也可作棉兰染色后镜检或作小培养后镜检。必要时作其他鉴定如毛发穿孔试验、脲酶试验和特殊营养需要试验等来鉴定皮肤癣菌。,毛发穿孔试验,是将头发发剪成lcm长，置于已加入25ml 蒸馏水和23滴10酵母浸膏液的平皿内， 高压灭菌。将待检皮肤真菌接种于平皿内， 置25孵育四周，每周检查一次，每次取 数根毛发置载玻片上，经乳酚棉蓝染色后， 置低倍镜下观察。若毛发有裂口或陷凹者 为阳性，否则为阴性。,4药物敏感试验,皮肤癣菌对灰黄霉素、伊曲康唑等 药物敏感。,防治方法： 预防主要靠注意清洁卫生，避免接触，保持鞋袜干燥等； 治疗采用抗真菌药，灰黄霉素，制霉菌素等 目前尚无有效疫苗预防皮肤癣病。,二、白色念珠菌 是假丝酵母菌属中最常见的病原菌。 念珠菌病是最常见条件致病性真菌。,生物学性状 1、形态与结构： 圆形或卵圆形，革兰氏阳性，但染色均； 在组织内形成芽生孢子和假菌丝；培养后可形 成厚膜孢子。 2、培养特性： 在普通琼脂培养基、血平板及沙保弱琼脂 培养基上均生长良好；37培养23天后可出 现典型的类酵母菌落。 在玉米粉琼脂培养基上可形成假菌丝，并产 生厚膜孢子。,致病性,皮肤粘膜念珠菌病 ： 鹅口疮，口角糜烂等 内脏念珠菌病 ：念珠菌性肠炎、肺炎及脑膜炎 泌尿生殖道念珠菌病：女性，阴道炎、尿道炎 男性，龟头包皮炎等,微生物学检查：,直接镜检 假菌丝和厚膜孢子可帮助诊断,1、除去危险因素如潮湿、停止长期应用抗生素等； 2、鹅口疮及皮肤黏膜念珠菌病治疗可局部涂敷制霉菌素、龙胆紫、酮康唑等； 3、深部感染可用两性霉素B治疗或与口服氟胞嘧啶合用； 4、目前尚未建立起有效的预防措施。,防治原则,三、新生隐球菌 在自然界分布广泛； 也存在于人体 的体表、口腔和粪便中； 大量存在于干燥的鸽粪中,生物学性状 1、形态与结构： 圆形的酵母样细胞，菌体外周有一层肥厚的荚 膜。一般染色法不易着色，故称隐球菌。用墨汁负染色后可见黑色的背景中见到圆形或卵圆形透亮菌体。 菌体可见出芽，但不形成假菌丝。 2、培养特性： 在血平板及沙保弱琼脂培养基上25 37培养数天后可出现酵母型菌落；,致病性,外源性感染，肺是主要入侵途径，多数症状不明显，能自愈；有的引起支气管肺炎；严重肺呈暴发性感染，死亡。 经血行传播至中枢神经及其它组织，引起