课件：三立体化学与手性合成.ppt

第三章 立体化学与手性合成,Outline,引言 立体化学基本概念 手性合成,对 称 之 美,Introduction,对称 VS 不对称,不 对 称 之 美,不对称性是生物体的普遍现象，生 物的外在美和内在美，皆源于不对称性！,外在不完全对称性： 一双手、两条腿、一对耳朵、两只眼睛，左右对称！ 左脚接触地面的面积大于右脚； 有的人一只眼睛双眼皮，另一只眼睛单眼皮； 两条眉毛一高一低； 微笑时一边有酒窝，另一边却没有。 内部不对称： 心脏偏左，肝脏在右侧，脾脏在左侧； 左支气管细长，右支气管又粗又短； 左右脑结构功能的不尽相同； 左肺三个肺叶，右肺两个。,人,手,哪只手写字？哪只手拿筷子吃饭？ 生活用具多为右手而设计？（剪刀、镰刀） 两手能够在空间上完全重合吗？,如人的左右手一样，在空间上不能叠合，却能互为镜像的属性，称之为“手性”。“手性” (chirality)一词源于希腊语的“手” (cheir)，指左手与右手的差异特征。 手性是三维物体的基本属性。如果一个物体不能与其镜像重合，该物体就称为手性物体。 手是手性的。 手性及手性物质只有两类：左手性和右手性或左旋与右旋。,“手性” (chirality),从宇宙到地球，从化学到生物学，及日常生活中几乎处处都有手性、手性物质的存在。,世界是手性的，手性无处不在！,宇宙是非对称的，如果把构成太阳系的全部物体置于一面跟随着它们的镜子面前，镜子中的影像不能和实体重合。生命由非对称作用所主宰。我能预见，所有生物物种在其结构上、在其外部形态上，究其本源都是宇宙非对称性的产物。,Louis Pasteur,法国化学家巴斯顿,太阳系的所有行星自转和公转都是按照右旋方向旋转的，称为右手定则！,飓风和台风的螺旋手性特征,植物学中的手性特征,绝大部分攀缘植物是沿着主干往右缠绕的，但也有少部分是往左缠绕的。,右旋 左旋,啤酒花,金银花,昆明鸡血藤,长瓣兜兰 花两侧长瓣的螺旋是左右对称的，右侧是左旋，左侧是右旋 大麦叶子的右旋几率是左旋的17.5倍,贝类较普遍的方向是右旋 左旋几率为百万分之一,葡萄园蜗牛(vineyard snail), 右旋:左旋 = 20000:1,天然的糖（来自甘蔗或甜菜），都是右旋的。人工合成左旋糖只有甜味不产生热量，因为我们身体里的代谢酶，只接受自然界里的右旋糖。正因为机体不能消化吸收左旋糖，因此被用于糖尿病病人甜味剂。,日常生活中的手性,运动场的逆时针跑向,90的人习惯于用右手。 对于“口、日和田”字型的道路网，由左下角走到右上角，你通常会选择哪条道路呢？,弹 簧,螺 栓,艺术中的手性与对称美,有机分子中的碳原子如果连有四个不同的原子（或基团），由于具有不同的空间排列形式，存在着一对立体异构体，称为镜像异构体。就象左右手一样，看起来相似，但不能重叠，称为有机分子的手性。,(-)-乳酸 (R),(+)-乳酸 (S),有机化学中的手性,有机分子手性的发现,1848年，发现酒石酸两种不同的存在形式： 左旋酒石酸和右旋酒石酸,巴斯顿把酒石酸晶体分开成两个镜像异构体,法国化学家巴斯顿 L.Pasteur, 18221895 微生物学之父，著名化学家 巴斯顿免疫法： 炭疽病、狂犬病免疫法,酒石酸存在于葡萄酒结晶物中。巴斯顿之前有许多科学家对酒石酸盐类进行了解，包括制备、分析、鉴定晶体形状，如毕欧发现天然酒石酸具有光学活性，而人工合成的酒石酸则没有，而两者物理性质与化学性质完全相同。,手性与生命现象：氨基酸、糖、蛋白质、DNA都是手性的； 手性与人类健康：“反应停”事件与FDA手性药物指导原则，药物中近50%具有手性，开发中的有2/3以上是手性的； 手性与环境：手性技术与手性产品符合绿色化学原则； 手性与材料和信息科学：手性液晶显示、手性传感、手性分离等； 手性技术与国民经济：巨大的手性药物和手性化学品市场，2003年1600亿美元，预计20102500亿美元。国内手性化学品、手性药物及原料药销售额估计在200亿，仅占医药工业销售额2751亿的10%左右。 手性技术壁垒：手性药物安全规则与WTO范围内手性技术的知识产权问题。,有机化学手性的重要性,DNA,生命的基本单元是蛋白质，而构成蛋白质的天然氨基酸都是L型。天然的多糖和组成RNA及DNA的核糖是D型。 对称性自发破缺现象！,生物分子手性同一性,手性与生物及生命化学,右旋分子是生命的克星？,人体的左手性环境不能代谢右手性分子！我们所吃到的食物都是左手性的。 眼球黑而明亮到灰而混浊，氨基酸每年以0.15%的速度从型变成型.(生命老化之因?长生不老?),不对称性是生物体的普遍现象！,有人将对称性自发破缺现象比喻为Abdus Salam(萨拉姆，1979年诺贝尔物理奖获得者)请客。吃饭前，服务员将餐具布置于圆桌，各碟子间和相邻碟子间的筷子都严格等距离。入席时客人坐在碟子后，距两边筷子等距。假定所有客人无偏爱某只手拿筷子的习惯，因此未开桌前该圆桌体系是左右对称的。突然某人先拿起左(或右)边筷子，结果左右对称性打破了。这一过程迅速影响全桌，最后人人都拿左(或右)边筷子，结果左右对称性打破了。 对称性自发破缺具有随机性，无法解释地球上各个蛋白质和核酸都具有同一手性的事实。看来必须存在一种不对称驱动力，才有可能解决这一难题。,手性的起源：萨拉姆规则,手性起源与生命起源是同一个命题！,生命起源问题,我们从哪里来？将往哪儿去？,撞击论：地球上最初生命体的形成是由于大量撞击地球的天体给地球带来了大量的有机物，构成了地球上生命的化学基础，或者部分的手性特征通过萨拉姆规则带来了地球的手性同一性。,地外手性的发现： 1969年9月28日，在澳大利亚坠落的属于45亿年前的默奇森陨石(Murchison) 中，发现超过100种氨基酸及14000多种有机物，其中手性氨基酸主要是L 型占优。同位素标记表明，这些有机物均非来自地球。这个结果和地球生命的结构正好吻合。科学家利用异缬氨酸与两种原始地球上可能广泛存在的有机物发生反应后，产生了一种称为苏糖的糖类，其中D型的结构也占优。,米勒实验: 1953年美国芝加哥大学研究生米勒(S. L. Miller，导师尤利H.C.Urey)完成,米勒实验结果：,所得到的氨基酸都是非手性的！,Soai反应是不对称合成领域内一个很著名很重要很令人震惊的反应，日本化学家Kenso Soai首次发现而得名。1和 2发生反应得到4，由于极少量手性源的引入会导致纯手性产物的生成，因此被称为不对称自催化反应。 这些手性源可以是光学纯度极低的不对称分子、旋光性不同的手性NaClO4、石英等。,不对称自催化,最近，Soai在Science上又发表了一项新的研究结果：以合成的结构相同，分别含12C和13C的两种取代基的醇为手性源，获得光学纯产物。 地球上存在着12C的1.11%的13C，因此任何有机物都可以看成是手性化合物，通过不对称自催化而使世界充满手性。,手性与人类健康: “反应停”悲剧,沙利度胺的S-异构体可导致严重的致畸性,1957年1962年，造成数万名婴儿严重畸形。 进一步研究表明，其致畸作用是由沙利度胺其中的一个异构体（S-异构体）引起的，而R-构型即使大剂量使用，也不会引起致畸作用。,(S)-thalidomide,(R)-thalidomide,原因出自代谢产物。 S-(-)-沙立度胺的二酰亚胺进行酶促水解，生成邻苯二甲酰亚胺基戊二酸，后者可渗入胎盘，干扰胎儿的谷氨酸类物质转变为叶酸的生化反应，从而干扰胎儿发育，造成畸胎。而R-(+)-异构体不易与代谢水解的酶结合，不会产生相同的代谢产物。,在农药使用上，手性农药的使用可以达到减少剂量，提高药效的作用；并且减少不良和无效对映体的可能造成的环境污染。如除草剂Metolachlor（金都尔）以消旋体的形式问世以来，每年以2万多吨的产量投放市场，1997年后以手性的替代消旋体，使用量减少了40，这相当于每年少向环境中排放八千多吨化学物质。,手性与环境：手性技术与手性产品符合绿色化学原则,手性技术与国民经济：手性药物与化学品市场, 1999年,全球手性药物市场销售额第一次超过1000亿美元, 达到1150亿美元,比1998年增长16 2002年全球500种畅销药物中手性药物有289种，占59。 2003年世界手性药物的总销售额超1600亿美元。 2005年世界手性药物的总销售额达1720亿美元 2010年超过2500亿美元 国内手性化学品、手性药物及原料药销售额估计在200亿，仅占医药工业销售额2751亿的10%左右。,手性药物是指由具有药理活性的手性化合物组成的药物。 手性药物的两个对映体往往在生物体内的药理活性、代谢过程、代谢速率及毒性等存在显著的差异。 各国药政部门规定在申报具手性的新药时，需同时呈报各对映体及消旋体的药理学、毒理学、药物动力学资料。,手性药物, 目前，我国SFDA对于申请新的外消旋药物，要求对两个对映体都必须提供详细的生理活性和毒理数据，而不得作为相同物质对待。,巴比妥类药物 S-体镇静药，R-体惊厥剂,左旋咪唑（levamisole）有驱虫和免疫刺激作用 右旋咪唑（dextramisole）具有抗抑郁作用,右丙氧芬，镇痛; 左丙氧芬，镇咳;,虽然产生这种手性的确切机理、起源和过程仍是科学上的未解之谜，但有一点是明确的：这些分子的作用以至于生命过程均与手性有关。 对映体的不同生理性质是由于它们的分子的立体结构在生物体内引起不同的分子识别造成的这个现象称为“手性识别”。这种识别可比喻为手与手套的关系，右手能套进右手套，而左手就套不进右手套。,手套与左右手的相互关系,手 性 识 别,临床药物 1850种,天然和半合成药物 523种,化学合成药物 1327种,非手性6种,手性517种,非手性799种,手性528种,以单个对映体给药509种,以外消旋体给药8种,以单个对映体给药61种,以外消旋体给药467种,手性化合物的种类：,手性技术:不对称催化,获得手性化合物的途径：,I） 天然方法（从动、植物体内分离提取） II） 外消旋体的拆分（一般化学合成方法得到外消旋体产物） III）化学计量的不对称反应（采用当量的手性源） IV）不对称催化合成 催化不对称反应，它是用少量手性催化剂，将大量的前手性底物以非均等的方式、对映体选择性地转化为特定的构型的手性产物，实现手性放大，手性倍增。,不对称催化（包括化学催化和生物催化）是唯一具有手性放大作用的手性合成方法，具有最好的“手性经济性”，这是其受到重视的根本原因！,一、异构体的分类,第二节：立体化学基本概念,立体异构体：分子由同数目和同类型的原子组成，具有相同的连接方式但构型或构象不同。,构型指分子内原子与原子团在空间“固定”的排列关系，如旋光异构、顺反异构。 构象指具有一定构型的分子由于单键的旋转或扭曲使分子内原子与原子 团在空间产生不同的排列现象。,二、分子的对称性和手性,1、对称因素 (1) 对称面： 假如有一个平面可以把分子分割成两部分，而一部分正好是另一部分的镜像，这个平面就是分子的对称面。,(2) 对称中心 若分子中有一点，通过该点画任何直线，如果在离此点等距离的两端有相同的原子，则该点称为分子的对称中心。,(3) 对称轴 以设想直线为轴旋转360o/n， 得到与原分子相同的分子，该直线 称为n重对称轴(又称n阶对称轴)。,(4)更迭旋转轴对称因素(Sn) 围绕某轴旋转360度/n, n=2,3,4,，然后对垂直于该轴的平面作反射，若与原化合物相同，相应地称之为n重交替对称轴。,2. 对称性与手性： A 有对称面、对称中心、交替对称轴的分子均可与其镜象重叠，是非手性分子；反之，为手性分子。对称轴并不能作为分子是否具有手性的判据。 B 大多数非手性分子都有对称轴或对称中心，只有交替对称轴而无对称面或对称中心的化合物是少数。所以，既无对称面也没有对称中心的，一般可判定为是手性分子。,三、偏振光和比旋光度,光是一种电磁波，光波的振动方向与光的前进方向垂直。,如果让光通过一个象栅栏一样的 Nicol 棱镜 (起偏镜)就不是所有方向的光都能通过，而只有与棱镜晶轴方向平行的光才能通过。这样，透过棱晶的光就只能在一个方向上振动，象这种只在一个平面上振动的光，称为平面偏振光，简称偏振光或偏光。,那么，偏振光能否透过第二个Nicol 棱镜 (检偏镜) 取决于两个棱镜的晶轴是否平行，平行则可透过；否则不能通过。如果在两个棱镜之间放一个盛液管，里面装入两种不同的物质：,结论： 物质有两类：,（1）旋光性物质能使偏振光振动面旋转的性质，叫做旋光性；具有旋光性的物质，叫做旋光性物质。 （2）非旋光性物质不具有旋光性的物质，叫做 非旋光性物质。 旋光性物质使偏振光旋转的角度，称为旋光度，以“”表示。,旋光度“” 受温度、光源、浓度、管长等许多因素的影响，为了便于比较，常用比旋光度来表示：,l,t,=,c,a,a,l, 为旋光仪测得试样的旋光度； c 为试样的质量浓度，单位 g . ml1; l 为盛液管的长度，单位 dm 。 t 测样时的温度。 为旋光仪使用的光源的波长(通常用钠光，以D表示)。,比旋光度表示：盛液管为1分米长，被测物浓度为1g/ml时的旋光度。,2019/8/6,61,可编辑,对称性、手性与旋光,对称的化合物(symmetric molecules): 分子含有对称因素,其镜影就是分子自身而可以相互重叠,是非手性化合物,不呈旋光性.,非对称的化合物(dissymmetric molecules): 分子只含有二重旋转轴C2或其他Cn旋转轴的对称因素,但其镜影不是分子自身而不能相互重叠,是手性化合物, 呈旋光性.,不对称的化合物(asymmetric molecules): 分子不含任何对称因素,其镜影也不是分子自身和不能相互重叠,也是手性化合物,呈旋光性.,四、手性分子类型及构型标记,手性(Chirality) 是由物体的三维取向所引起的, 如果一个物体不能与其镜像重合，该物体具有手性; 该物体与其镜像，彼此是互为对映的，相互称为对映异构体。,1. 手性分子类型 （1）中心手性 (Central Chirality),（2）轴手性 (Axial Chirality),主要有五种类型手性轴分子：丙二烯类、亚烷基、环己烷类、螺烷类、联芳烃类、金刚烷类。含有手性轴的分子,虽无手性中心但分子整体具有手性，能以一对对映体存在。,丙二烯型的旋光异构体,（A）两个双键相连,(B) 一个双键与一个环相连（1909年拆分）,(C) 螺环形,联苯型的旋光异构体,由于位阻太大引起的旋光异构体称为阻转异构体。,反应温度：118。,X=CH3 NO2 COOH OCH3,消旋化 t1/2,1.50 1.92 1.56 1.45 179分 125分 91分 9.4分,半衰期越短，说明旋转的阻力越小。,IBrCH3ClNO2COOHNH2OCH3OHFH,阻转能力下降,阻转异构体在适当的条件下会发生消旋，如：,（3）平面手性 (Planar Chirality),分子即没有手性中心也没有手性轴，但分子整体具有手性，分子的手性与较多原子构成的平面相关联，称此手性分子具有平面手性。,柄型化合物,n=8，可拆分，光活体稳定。 n=9，可拆分， 95.5oC时，半衰期为444分。 n=10，不可拆分。,六螺并苯（有手性）,螺旋手性化合物,分子像盘旋的扶梯，从螺旋轴向观察，由上至下， 顺时针为P构型，逆时针为M构型。,2、构型及其标记 1) D/L 纽曼(Newman)投影式 费歇尔(Fischer)投影式(规则?),按国际命名原则: 取主链竖向排列，以氧化态较高的碳原子置于上方，进行费歇尔投影，在所得费歇尔投影式中X在右面的称D型，X在左面的称L型。,2、构型及其标记 2) R/S CIP惯例 由Cahn、Ingold和Prelog于1951年提出，并于1956年和1966年进行了修订。,(R),Fischer,(S),Fischer,手性碳上连有的基团结构相同，仅构型不同，则以cis优先于trans，R优先于S确定优先顺序。,判断R/S：,3) cis/trans, endo/exo,endo（内型）/exo标记： 针对桥环化合物，endo（内型）指取代基离最长的桥最近，反之为exo。,4) syn/anti ： syn/anti是描述两个取代基对于环上某平面的相对构型的前缀 。 syn指同侧 ,而anti指异侧：在直链化合物中，有时也用syn或anti表示这相邻有关取代基在同侧或异侧。,(1) (2) (3) (+)-酒石酸 (4) (-)-酒石酸,(R),(R),(R),(R),(S),(S),(S),(S),1和2，3和4互为对映关系，但仔细观察会发现1和2可以重合，是同一物质。这是因为1和2分子中有一个对称面，因此分子无手性。把分子内含有平面对称性因素的没有旋光性的立体异构体称为内消旋体(meso)。可见：分子有手性中心，分子不一定有手性。 1和3或4是非对映体。等量的3和4构成外消旋体，但外消旋体是混合物，在性质上不同于内消旋化合物。,5）对映异构，外消旋；非对映异构，内消旋,五、前手性概念及其区分prochirality,非手性分子含有立体异位的配体（原子或基团）或立体异位面，经反应后失去对称性，得到对映异构体或非对映异构体的手性分子，则这种能由非手性转变为手性的特性即为前手性，该分子为前手性分子。,当用D取代H1，得（R）构型，则H1是Pro-R 当用D取代H2，得（S）构型，则H2是Pro-S,Re /Si 惯例 关于面选择性的立体化学描述：三个取代基a, b, c的CIP优先性顺序为abc，则向着观察者的以顺时针取向的面称为Re，abc以逆时针取向的面称为Si。,六、光学活性的测定,光学纯度：根据实验测定的旋光度，在两个对映异构体混合物中，一个对映体所占的百分数。 对映体过量 (e.e., enantiomeric excess) ：化合物样品的对映体组成可用术语对映体过量或者e.e.%来描述，表示一个对映体对另一个对映体的过量。,对映体过量百分数(%e.e.),er enantiomer ratio 对映比率,化合物的分子式中有一个以上的手性中心时，其非对映体组成可描述为“非对映体过量（diastereoisomeric excess, d.e.）,“%d.e.”指一个非对映体对其他非对映体的过量。,非对映体过量百分数(%e.e.),dr diasteromeric ratio 非对映比率,绝对构型？Re/Si面？dr de值？ee值？ 手性辅基？手性合成,1. Chiral GC and HPLC,2、NMR分析 将样品与手性衍生化试剂反应转化为相应的非对映体 ，然后用 NMR 谱识别。,3. 手性位移试剂法: 原理: 基于被测定的手性化合物和用于分析的手性试剂造成的手性环境间的非对映性的相互作用，使被测对映体化合物象非对映体一样在谱图上表现出来。,七、绝对构型测定,1. X-ray 分析,2. CD光谱参照（园二色光谱） 3. 化学相关法(通过化学转化，与已知构型进行对比）,第三节：手性合成,对映体的拆分,结晶法 生物拆分 色谱法,直接结晶法 利用外消旋体具有形成聚集体的性质，直接将其从溶液中结晶析出 间接结晶法 将对映异构体与光学纯的化合物形成非对映异构体，然后利用非对映异构体的溶解度差别，使其中一个异构体结晶析出,直接结晶,自发结晶 优先结晶 逆向结晶 外消旋体的不对称转化和结晶拆分,自发结晶 只有5-10%的有机物能形成聚集体,在饱和或过饱和的外消旋体溶液中加入其中一个对映异构体的晶种，使该对映异构体稍过量而造成不对称环境，旋光性与该晶种相同的异构体就会从溶液中结晶析出,优先结晶,D,L-氯霉素的母体氨基醇的结晶拆分,80浓缩,D-氨基醇，80,冷至20,冷至20,逆向结晶法,在外消旋体系中加入手性外加物S，S能立体选择地吸附在一种对映体结晶的表面使晶体生长变慢，从而使另一对映体结晶析出。,外消旋体的不对称转化和结晶拆分,(R,S)-A,RA+SA 50% 50%,初始溶液,SA,缓慢结晶,100,适合用于易消旋化类化合物： 手性碳原子上含有H 原子的羰基化合物,间接结晶法,将具有相同性质的对映体转变为具有不同性质的非对映体来进行分离,拆分剂 1）容易与外消旋体中的两个对映体结合生成非对映异构体。拆分后又容易再生出原来的对映体。如酸碱反应 2）所形成的非对映异构体溶解度有较大的差别，其中之一容易结晶。(选择合适溶剂） 3）拆分剂应光学纯，提高拆分效率。 4）拆分剂应廉价易得，或可方便回收,用于拆分酸的拆分试剂,用于拆分碱的拆分试剂,用于拆分羟基的拆分试剂,用于拆分醛和酮的拆分试剂,樟脑的半缩醛二聚体,复合拆分和包合拆分,包结拆分：利用非共价键体系的相互作用而使外消旋体与手性拆分剂发生包结,色 谱 法,TLC分离芳香醇胺对映体,用D-10-樟脑磺酸铵作为手性离子对试剂添加到流动相中，在普通的GF254薄层硅胶板(2.510cm) 24展开，拆分拉贝乐尔(Labarol)和倍他乐克(Batarock)两种芳香醇胺药物对映体。 LabarolCH2Cl2-CH3OH (67:33)，含D-樟脑磺酸铵6.8 mmol / L BatarockCH2Cl2-CH3OH(60:40)，含D-樟脑磺酸铵6.8 mmol / L,液相色谱的制备拆分,一、不对称合成的发展,不对称合成是近代有机合成十分活跃的一个领域。近30年来，有机化学领域中最重要的突破之一是不对称催化的发明和应用。,Morrison和Mosher的定义，不对称合成是“一个有机反应，其中底物分子整体中的非手性单元由反应剂以不等量地生成立体异构产物的途径转化为手性单元”。前手性单元转化为手性单元。 IUPAC定义，不对称合成（Asymmetric synthesis），也称手性合成、立体选择性合成、对映选择性合成，是研究向反应物引入一个或多个具手性元素的化学反应的有机合成分支。,成功的不对称合成的标准: 高对映体过量（e.e.） 手性辅剂易于制备并能循环利用 可制备R和S两种构型 不对称催化合成。,化学计量的不对称反应与不对称催化反应, （1）底物控制反应，第一代不对称合成 （2）辅基控制反应，第二代不对称合成 （3）第三代不对称合成 （4）双不对称合成，对于形成两个新的手性单元尤其有价值 （5）和（6）不对称催化反应,化学计量的不对称反应,不对称催化反应,手性辅助剂的不对称反应 应用手性辅助剂是合成光学纯化合物的一个有效方法。 该法是在分子内引入一个手性辅助部分，用这个部分来控制反应中心的立体化学，生成的产物是非对映异构体，通常可用柱色谱分离，最后去掉这个手性的辅助部分。 现在最常用的辅助剂是美国哈佛大学Evans开发的噁唑啉酮（oxazolidinone）和瑞士日内瓦大学Oppolzer开发的樟脑磺内酰胺（camphorsultam）。,不对称催化,Wilkinson Catalyst (Wilkinson, JCSCC 1965, 131),First Homogenous Catalytic Asymmetric Hydrogenation,Knowles (JCSCC 1968, 1445) Horner (Angew. Chem. Int. Ed. 1968, 7, 942), 1966年报道了第一个均相不对称催化反应，Noyori等应用手性席夫碱铜配合物催化环丙烷反应。 1968年Horner和Knowles，几乎同时将手性膦的配体引入Wilkinson催化剂，成功地实现不对称氢化反应。,开创性工作,手性配体不对称催化研究的核心, 不对称催化的对映体选择性来源于催化剂不对称诱导能力， 因此催化剂本身必须具有手征。 催化剂一般是由金属和配体组成的络合物， 催化剂的手性可 由手性配体获得。 手性配体的合成是不对称催化的核心,手性配体的要求： 具有适当的配位能力； 具有手征性（手性中心、手性轴、手性面）； 具有适当的取代基，以便赋予其空间差异性和对映体识别能力,Privileged Chiral Catalysts,E. N. Jacobsen et al.