课件：维生素类药物的分析 new.ppt

指示剂 淀粉指示液,（一）碘量法,四、含量测定,利用Vc强的还原性,H+,1. 原理,2. 方法,取本品约0.2g，精密称定，加新沸过的冷水100ml与稀醋酸10ml使溶解，加淀粉指示液1ml，立即用碘液（0.05mol/L）滴定，至溶液显蓝色，在30秒内不褪。每1ml碘液(0.05 mol/L)相当于8.806mg的C6H8O6。,（2）酸性环境,（1）新沸冷H2O,减慢VitC被O2氧化速度,（3）立即滴定,赶走水中O2,减少O2的干扰,3. 讨论,稀醋酸,4. 附加剂干扰的排除,片剂 过滤,(二) 2，6 - 二氯靛酚滴定法,1. 原理,2. 方法,（2）快速滴定 2min内,（1）酸性环境 HPO3-HAc,稳定VitC,防止其他还原性物质干扰,（3）剩余比色测定,（定量过量）,（测剩余染料）,3. 讨论,（4）缺点,需经常标定,贮存一周,专属性强，多用于含 Vc的制剂和食品的分析,（5）优点,不稳定,（三） 高效液相色谱法,血浆中维生素C的测定 标准溶液包括样品预处理过程均需加入偏磷酸，偏磷酸同时可用于血样中的蛋白沉淀；当天取血当天测定；处理好的样品亦需冰箱保存,一、结构与性质,维生素 D2(麦角骨化醇),维生素D3(胆骨化醇),第四节 维生素D的分析,（一）结构,1.性状 无色针状结晶或白色结晶性粉末；无臭，无味。 2.溶解性 宜溶于有机溶剂，在植物油中略溶，在水中不溶。 3.不稳定性 含有多个烯键，所以极不稳定，宜氧化变质，效价降低，毒性增强。,（二）性质,4旋光性 维生素D2 6个手性碳原子 维生素D3 5个手性碳原子,醋酐 硫酸,E,1cm,1%,E,1%,1cm,5显色反应 甾类化合物,6紫外吸收特性 无水乙醇 265nm 维生素D2 为460490 维生素D3 为465495,氯仿溶液,黄色,红色,紫色,绿色,二、鉴别试验,（一）显色反应,1与醋酐-浓硫酸反应,氯仿溶液 黄色 红色 紫色 绿色,醋酐 硫酸,2与三氯化锑反应,本品,1,2-二氯乙烷,三氯化锑试液,橙红色,粉红色,3其它显色反应,维生素D,三氯化铁,橙黄色,二氯丙醇 乙酰氯,绿色,（二）比旋度鉴别,无水乙醇溶液,维生素D2,比旋度为102.5至107.5,维生素D3,比旋度为105至112,（三）其它鉴别方法,薄层色谱法 HPLC法 制备衍生物测熔点 紫外、红外吸收光谱,（四）维生素D2、D3的区别反应,维生素D2,维生素D3,96%乙醇,10ml,取0.1ml,乙醇1ml 和85%硫酸5ml,红色max570nm,黄色 max495nm,三、杂质检查,（一）麦角甾醇的检查,维生素D2 90%乙醇溶液,洋地黄皂苷溶液,不得发生浑浊或沉淀,（二）前维生素D的光照产物,=280-320nm,四、含量测定,正相高效液相色谱法,（一）维生素D测定法,含量以单位表示 每单位相当于维生素D 0.025g,注意：计算的是维生素D及前维生素D经折算成维生素D的总量,测定在半暗室及避免氧化的情况下进行,第一法：无干扰杂质,第二法：有VA及其他杂质干扰,第三法：用第二法时，前 VD峰受杂质干扰 仅VD峰可分离,适用性：,内标物：邻苯二甲酸二甲酯,色谱条件及系统适用性试验：,填充剂：硅胶 流动相：正己烷-正戊醇（997：3） 检测波长：254nm,无干扰杂质,A. 第一法,维生素D3,光照,前维生素D3 反式维生素D3 维生素D3 速甾醇D3,与维生素D3的比保 留 时 间,分离度,1.0,1.0,溶液组成,先后进样5次，维生素D3 峰面积的 RSD2.0 %,0.5 0.6 1.0 1.1,校正因子测定：,维生素D的校正因子: f1=Asmi/Aims,前维生素D折算成维生素D的校正因子:,f2=（Asmr-f1msAr1）/（Ar2ms）,含量测定：计算维生素D及前维生素D折算成 维生素D的总量,mi=（f1Ai1+f2Ai2）ms/As,B. 第二法,第一步：皂化提取,有VA及其他杂质干扰,第二步：分离收集,供试品溶液A,RP-HPLC,维生素D 前维生素D 维生素A及其他杂质,叠峰,分离,收集,供试品溶液B,维生素D及前维生素D,第三步：按第一法进行含量测定（内标法）,挥干,内标的正己烷溶液,溶解,C. 第三法,第一步：皂化提取,同第二法得供试品溶液A,第二步：,供试品溶液A,RP-HPLC,维生素D 前维生素D 维生素A及其他杂质,叠峰,分离,供试品溶液C,收集 维D,挥干,异辛烷溶解,90、1.5h,挥干,正己烷溶解,前维生素D 维生素D,第三步：用第一法色谱条件按外标法计算含量,用第二法时，前 VD峰受杂质干扰,苯,二氢吡喃,并,醇,第四节 维生素E的分析,（一）结构,2019/8/7,27,可编辑,生育酚,维生素E,天然品 右旋体,生物效价 右旋体:消旋体 = 1.4 : 10,合成品 消旋体,生物效价 右旋体 ： 消旋体 = 1.4 ：10,（天然品）,（合成品）,维生素：dl生育酚醋酸酯,（二）性质,1、溶解性：易溶于有机溶剂，不溶于水,4、UV,2、水解性：酯键易水解,3、氧化性,橙红色,二、鉴别试验,（一）硝酸反应,（橙红色）,生育红,生育酚,HNO3,强氧化剂,（二）三氯化铁联吡啶反应,生育酚,对-生育醌,红色,Fe3+,O,max = 284nm,min = 254nm,0.01%无水乙醇中,（三）UV法,薄层板 硅胶G,展开剂 环己烷 -乙醚（4 ：1）,显色剂 硫酸（105 5）,VitE Rf = 0.7,（四）TLC法,（二）生育酚,硫酸铈滴定液（0.01mol/L） 二苯胺（亮黄灰紫）,利用游离生育酚的还原性，将硫酸铈还原成硫酸亚铈,（一）酸度,游离醋酸,三、杂质检查,2. 试剂,1. 原理,选择性好 灵敏度高 速度快 分离效能好,挥发性低、不稳定、极性强衍生化。 易受样品蒸气压限制,四、含量测定,（一）GC法,1、GC特点,载气N2 固定液硅酮（OV-17） 担体硅藻土或高分子多孔小球 柱温265 检测器氢火焰离子化检测器(FID) 内标正三十二烷 n 500 R2,内标法加校正因子定量,2. VitE测定的色谱条件,内标法,供试液（样品+内标）,内标物,对照液（对照+内标）,几种常用的固定相 非极性：OV-1、SE-30、HP-1（100%二甲基聚硅氧烷），分析：溶剂、石油产品、药物，按沸点出峰；一般使用温度60340。 非极性：SE-54、HP-5、DB-5（5%二苯基95%二甲基聚硅氧烷），分析：环境样品、香料；使用温度：-60325。,中等极性：OV-17、HP-50+（50%苯基-50%二甲基聚硅氧烷）。用途：酯类及其它极性适中的药物；一般使用温度：25340。 极性：PEG-20、Carbowax20M、INNOWAX（聚乙二醇）。用途：香料、酸类、胺类、溶剂。一般使用温度： 40280,毛细管色谱柱选择,样品容量与柱内径、膜厚及溶解度关系，记住相似相溶原理 一般厚膜柱适合分析低沸点样品；薄液膜适合分析高沸点化合物，同时固定相流失少。 检测器：主要有热导检测器（通用）、氢火焰离子化检测器、电子捕获检测器,样品 dl生育酚 固定相十八烷基硅烷键合硅胶 流动相甲醇-水（49 ：1） 检测波长292nm R2.6 RSD0.8%,（二）RP - HPLC法（外标法）,对照品 dl生育酚 在220400nm波长范围内，以发射、激发波长间隔为40nm扫描同步荧光光谱，测定同步荧光峰的荧光强度信号值。,VE=,F样品,-,F空白,F标准,-,F空白,4.0（mg/L),（三）荧光分光光度法,第六节 复方制剂中多种维生素的分析,一、离