乳酸菌的筛选及应用.ppt

2019/8/8,1,乳酸菌的筛选及应用,邹远强 2010年7月12日,2019/8/8,2,乳酸菌的分类 乳酸菌的筛选 乳酸菌的应用,2019/8/8,3,第一部分、乳酸菌的分类,指发酵糖类主要产物为乳酸的一类无芽孢、革兰氏染色阳性细菌； 分为18个属，共有200多种； 大部分是人体内必不可少的且具有重要生理功能的菌群，其广泛存在于人体的肠道中。,一、乳酸菌,2019/8/8,4,二、乳酸菌的分类,运动性：通常不运动，有的能 够运动,具有周生鞭毛。 营养类型：化能异氧型 需氧情况：微好氧性,1、乳杆菌属（Lactobacillus） 形态：细胞呈长或细长杆状、弯曲形短杆状,一 般成链状排列,2019/8/8,5,形态：细胞呈球形或卵圆形，成对或成链排列 运动性：一般不远动 营养类型：化能异养型 需氧情况：兼性厌氧型,2、链球菌属（Streptococcus）,2019/8/8,6,形态：细胞球形或豆状，成 对或成链排列 运行性：不运动 营养类型：化能异养型 需氧情况：兼性厌氧型,3、明串珠菌属（Leuconostoc）,2019/8/8,7,形态：细胞呈多样形态：Y字形、 V字形、弯曲状、勺形，典 形形态为分叉杆菌 运行性：不运动 营养类型：化能异养型 需氧情况：专性厌氧,4、双歧杆菌属（Bifidobacterium ）,2019/8/8,8,形态：细胞球形，成对或四联状 排列 运行性：不运动 营养类型：化能异养型 需氧情况：兼性厌氧,5、片球菌属（Pediococcus）,2019/8/8,9,第二部分、乳酸菌的筛选,乳酸菌绝大多数都是厌氧菌或兼性厌氧的化能营养菌。生长繁殖于厌氧或微好氧、矿物质和有机营养物丰富的环境中。具体如下： （1）与动物相关分布：乳汁、消化道、粪便等； （2）与植物相关分布：花蜜、树液、植物残骸、果实损伤部位等； （3）发酵食品：泡菜、酱油、发酵肉制品等； （4）乳酸饮料：酸奶等。,一、乳酸菌的分布,2019/8/8,10,（一）溶钙圈法 利用一些产酸类细菌在含CaCO3的培养基上产生CaCO3溶解圈，从而筛选出这些产酸类细菌，可用于乳酸菌的筛选。 其中培养基中加入CaCO3的作用是： 鉴别能产生酸的细菌； 中和产生的酸，以维持培养基的PH。,二、筛选方法,2019/8/8,11,1、乳酸菌筛选培养基（MRS培养基） 配方（1L）: 蛋白胨 10.0g，牛肉膏 10.0g，酵母提取物 5.0g，K2HPO4 2.0g，柠檬酸三铵 2.0g，乙酸钠 5.0g，葡萄糖 20.0g，吐温80 1.0mL，MgSO47H2O 0.5g，MnSO44H2O 0.25g,配制： 1.调PH至6.26.4； 2.称取20g CaCO3加入到100mL蒸馏水中，制成CaCO3乳浊液； 3.将MRS培养基和CaCO3乳浊液分开灭菌； 4.倒平板前，待培养基融化冷却后，平板上加入一定量的CaCO3乳浊液，晾干了以后再接种。,2019/8/8,12,样品预处理梯度稀释至10-6选择合适的稀释度涂布37培养48h挑选产生溶钙圈的菌落反复在MRS培养基上划线挑起单菌落染色，经镜检确认为纯种挑选革兰氏阳性单菌落试管穿刺4冰箱保存。,2、筛选过程,2019/8/8,13,（二）溴甲酚绿指示剂法,1、培养基：MRS培养基（含溴甲酚绿酒精溶液） 2、筛选过程：同上，不同之处是稀释涂布后长出菌落，挑取使溴甲酚绿变色的菌落。,2019/8/8,14,（三）几种乳酸菌筛选举例,样品来源：市售酸奶 培养基： M17改良培养基 培养温度：42 需氧情况：兼性厌氧 筛选方法：常规的稀释涂布 和划线分离,1、嗜热链球菌,2019/8/8,15,2、 保加利亚乳杆菌 样品来源：市售酸奶 培养基：牛肉浸膏 1.5，酵母浸膏 0.5，葡萄糖 3.0，柠檬酸三铵 0.2，七水硫酸镁 0.02，琼脂 1.5，pH 5.1。 培养温度：42 需氧情况：兼性厌氧 筛选方法：常规的稀释涂布和划线分离法,2019/8/8,16,样品来源：婴儿新鲜粪便 培养基：MRS培养基、NPNL培养基 、TYP培养基、 PTYG培养基 培养温度：37 需氧情况：严格厌氧 筛选方法：常规的稀释涂布和划线分离法,3、 双歧杆菌,2019/8/8,17,第三部分、乳酸菌的应用,一、乳酸菌的生理功能,维持肠道菌群的微生态平衡； 增强机体免疫功能； 预防和抑制肿瘤发生； 提高营养利用率、促进营养吸收； 控制内毒素、降低胆固醇； 延缓机体衰老。,2019/8/8,18,二、乳酸菌的应用,1、乳酸菌在食品、饮料中的应用 （1）酸奶；（2）乳酸饮料；（3）酿造调味品中的应用；（4）功能性食品的开发；（5）防腐、保鲜；（6）肉制品加工；（7）腌渍物等。,2019/8/8,19,2、乳酸菌在医药中的应用 （1）乳酸菌素；（2）-氨基丁酸(GABA),2019/8/8,20,3、开发可降解的聚乳酸塑料,2019/8/8,21,（1）聚乳酸（PLA）简介 聚乳酸是以微生物发酵产物乳酸为单体用化学合成方法聚合而成的一种高分子材料，它无毒、无刺激性。 聚乳酸制品废弃后在土壤或水中，30天内会在微生物、水、酸和碱的作用下彻底分解成CO2和H2O，不会对环境产生污染，因而是一种完全可生物降解的材料。,2019/8/8,22,目前聚乳酸的生产和制备主要有：,（2）聚乳酸的生产过程,直接聚合法； 间接法； 聚合法。,2019/8/8,23,（3）聚乳酸的应用,医用领域：如生产一次性输液用具、免拆型手术缝合线、骨科用固定件及手术器件、医用支架、生物导管等； 包装材料：目前，各种包装材料是聚乳酸最大、最有潜力的应用市场。适合于加工一次性饭盒以及其他食品、饮料等外包装材料等； 纤维：聚乳酸纤维是由聚乳酸经常规纺丝工艺制得的生物合成纤维，可制成复丝、单丝、短纤维、针织物、非织造布等，还可用作建筑材料、农业用材等。,2019/8/8,24,PLA作为一个新型的医用、生物可降解塑料在我国有广阔的市场发展前景。生物降解塑料大多数是天然高分子与常用塑料复合体系，或基于天然高分子(主要是淀粉、纤