课件：非发酵菌实习.ppt

非发酵菌及检验,华中科技大学同济医学院 附属协和医院检验科 曾 吉,2019,-,1,非发酵菌(nonfermenters)是指一群不利用或仅以氧化形式利用糖类的革兰阴性无芽胞杆菌, 需氧或兼性厌氧. 基本特点: 1. 大多数为机会致病菌; 2. 存在于自然环境; 3. 多为正常菌群的一部分; 4. 对很多抗生素有天然的抗药性。,一. 概论,2019,-,2,近几年，从临床标本中分离的非发酵菌的比例逐年上升，目前已经约占分离的阴性菌的40%。 非发酵菌的耐药性一般情况下都比肠杆菌科细菌明显，常常表现为多重耐药性，并且耐药性发展很快。,2019,-,3,非发酵菌菌病原学分类,假单胞菌属：代表菌为铜绿假单胞菌； 不动杆菌属：代表菌为鲍曼不动杆菌； 窄食单胞菌属：嗜麦芽窄食单胞菌； 伯克霍尔德菌属：洋葱伯克霍尔德菌； 产碱杆菌属：木榶氧化 其他菌属等,2019,-,4,2019,-,5,2019,-,6,2019,-,7,2019,-,8,非发酵菌与其他细菌的区别,1. 与其他阴性杆菌的区别: 肠杆菌，弧菌科等 2. 与易脱色的革兰阳性菌区别.,2019,-,9,辨认非发酵菌的基本方法,1. 在克氏铁琼脂（KIA)上为K/K； 2. 大多数氧化酶阳性； 3. 细菌多不能在麦康凯平板上生长或生长不良.,2019,-,10,非发酵菌的初步分群,1. 葡萄糖的利用; 2. 麦康凯平板上生长能力; 3. 氧化酶; 4. 动力.,2019,-,11,非发酵菌各菌属间的鉴别,2019,-,12,常见不发酵菌的鉴定双岐索引,2019,-,13,第 一节 假单胞菌属 (Pseudomonas),一、 概述 1. 分类 2. 临床意义 3. 微生物特性 4.微生物检验 (1)检验程序 (2)鉴定 (3)药物敏感性试验(Antibacterial Susceptibility Test),2019,-,14,1.分类,假单菌属按rRNA同源性分为5群及未确定rRNA同源群有关的种 一群需氧、不发酵葡萄糖 无芽胞，有鞭毛 氧化酶阳性的革兰阴性杆菌 多为条件致病菌,2019,-,15,2.临床意义,假单胞菌属分布广泛，人类不发酵菌感染中，假单胞菌超过50，其中主要为铜绿假单胞菌.,2019,-,16,3.微生物特性,革兰阴性、无芽胞、专性需氧 有端鞭毛或丛鞭毛 生长温度范围广，最适生长温度为35 产生各种水溶性色素：绿脓素、脓玉红素、荧光素、脓褐素 对理化因素耐受性较强，对多种抗生素耐药,2019,-,17,二. 铜绿假单胞菌,生物学特征： 1：形态和染色; 革兰阴性，长短不一 单鞭毛 生长温度2542,2019,-,18,菌落形态： 常见有5种菌落形态： 典型菌落：菌落呈灰绿色，扁平湿润，边缘不规则，表面常可见金属光泽； 大肠菌样型：圆形凸起，灰白色半透明； 粘液型：菌落光滑呈粘液状 侏儒型：细小，无光泽的半透明状菌落； 粗糙型：中央凸起，边缘扁平，表面粗糙。 有生姜味 可产生多种色素： 荧光素与绿脓素,2019,-,19,2019,-,20,毒力因子,致病机制,结构成分,粘附素：粘附,荚膜多糖：抗呑噬,毒素,内毒素：LPS,外毒素：A 阻止真核细胞蛋白质合成 S 干扰吞噬杀菌作用,绿脓素：具有氧化还原活性，催化超氧化物和 过氧化氢产生有毒基团,酶类,弹性蛋白酶:丝氨酸蛋白酶（Las-A） 降解 弹性锌金属蛋白酶（Las-B）蛋白,磷脂酶C: 分解脂质和卵磷脂，损伤组织细胞,2019,-,21,（1 ）分离培养与鉴定： 标本可接种于血琼脂平板培养基和选择性培养基 鉴定根据镜下特征、菌落形态、生化反应等,3.微生物检验,2019,-,22,OF试验：O 氧化酶：+ 精氨酸水解：+ 葡萄糖酸氧化：+ 氮气：+,铜绿假单胞菌的鉴定程序,-,2019,-,23,铜绿假单胞菌的最低鉴定特征,2019,-,24,（2）抗原检测：血清学分型、噬菌体分型 （3）核酸检测：质粒指纹图分析、脉冲场凝胶电泳分析（PFGE pulsed field gel electrophoresis）、基因芯片、PCR技术、16SrDNA分型鉴定技术,2019,-,25,铜绿假单胞菌的耐药性 耐药机制： 产酶：金属酶，OXA酶 外膜蛋白的改变（Outer membrane proteins，OMP） 主动泵出机制：对喹诺酮类， MexA-MexB-OprM及MecC-MexD-Oprj 整合子：1类，3类,2019,-,26,其他假单胞菌,1.荧光假单胞菌： 特点：4生长 2.恶臭假单胞菌： 特点：产荧光素，4和42不生长， 不产绿脓素 3.斯氏假单胞： 特点：42生长，精氨酸双水解酶阴性,2019,-,27,不动杆菌属,共同特征: 氧化酶阴性, 不发酵糖类, 无动力，硝酸盐试验阴性。 生物学性状: 1. 形态: 革兰阴性杆菌，多为球杆状，常见成对排列无芽胞，无鞭毛。 2. 培养特性: 专性需氧菌, 最适生长温度为35，营养要求不高，麦康凯、血平板均生长。,2019,-,28,2019,-,29,不动杆菌属主要菌种系列生化特征,2019,-,30,鲍曼不动杆菌,临床意义： 鲍曼不动杆菌分布广泛，特别是在医院环境中广泛存在，极易引起医院感染的发生，最近几年，在国内很多大型医院ICU病房，鲍曼不动杆菌的分离率已经占到第一位。,2019,-,31,抵抗力强，耐药性强 容易引起院内传播：消毒隔离、洗手 感染危险因素： 长期住院，入住ICU 高龄，伴基础疾病 移植、免疫抑制 插管、人工通气 事先用过抗生素,2019,-,32,生物学性状: 1. 形态: 革兰阴性杆菌，球杆状，无鞭毛。 2. 培养特性: 专性需氧菌, 最适生长温度为35，42 能生长，营养要求不高，麦康凯、血平板均生长。 3. 血平板：菌落圆形、灰白色、光滑、边缘整齐、直径23mm。,2019,-,33,耐药特性,对全部氨基青霉素、一代二代头孢菌素、氨曲南天然耐药。 获得性耐药： 1：产生内酰胺酶,2019,-,34,OMP通透性 外排泵 整合子、基因盒,2019,-,35,临床对策,增加药敏试验药物 Tigecycline 多粘菌素B/粘菌素 联合药敏试验,2019,-,36,嗜麦芽窄食单胞菌,生物学性状: 1. 形态：革兰阴性杆菌，有端鞭毛，无芽胞，无荚膜。 2. 培养特征：营养要求不高，最适温度35，4不生长， 在血平板上24h可形成中等偏小的湿润菌落, 48h形成中等大小，不溶血的带黄色色素的菌落。,2019,-,37,嗜麦芽窄食单胞菌,鉴定： 氧化酶 动力 + 明胶 + 42C +/- 七叶苷 + 赖氨酸 + 麦芽糖 O,2019,-,38,2019,-,39,耐药性,对亚胺培南天然耐药，主要是产金属酶； 经验用药首选磺胺类，但目前磺胺类抗生素的耐药率已经开始上升。 K-B法可选用的药物有SXT、LEV和MNO。,2019,-,40,洋葱伯克霍尔德菌,一般不引起人致病，但易从纤维囊肿病人中分离，在一些免疫力低下的患者中也可能分离到。 生物学特性：氧化酶90%阳性，赖氨酸阳性，多鞭毛。,2019,-,41,洋葱伯克霍尔德菌鉴定要点,葡萄糖O/F： O 赖氨酸： + 枸橼酸： + 硝酸盐还原： + 精氨酸水解： - 甘露醇： +（依此可以与Pma鉴别）,2019,-,42,軍团菌,生物学性状： 1.形态与染色：革兰阴性杆菌，不易着色，端生或侧生鞭毛。 2.培养特征： 需氧菌，在2.55%的 CO2环境下生长良好，营养要求苛刻，生长缓慢，生长需要L-半胱氨酸和铁离子。最适的培养基为活性炭酵母浸出液琼脂（BCYE）培养基。,2019,-,43,3生化反应：OX弱阳性或阴性，H2O2阳性，能水解明胶，不发酵糖。 4抗原结构：有O抗原和H抗原，O抗原有特异性。 5.抵抗力：抵抗力强，在水中可存活数月。对化学消毒剂敏感。,2019,-,44,致病性,可引起肺炎型（重症类型）、流感样型（轻症类型）和肺外感染三种类型； 肺炎型死亡率高 感染后对该菌有一定的抵抗力。,2019,-,45,微生物学检验,临床标本：痰、气管分泌物、胸水和血液为主。 病理组织标本：必须制成悬液，再进行涂片和分离培养。 环境污染标本：应先浓缩再接种。,2019,-,46,分离培养： 初次分离必须采用(BCYE) 35天可形成12mm直径的光泽菌落,2019,-,47,核酸检测：是快速特异的方法，采用DNA探针及PCR扩增rRNA的方法均可用于军团菌的快速诊断 抗体检测：是检测军团菌感染临床常用手段，常采用方法：IFA、MAA、TAT、ELISA法等,2019,-,48,军 团 菌 感 染 诊 断 试 验,2019,-,49,后面内容直接删除就行