临床常见传染病及检测方法

,临床常见传染病及检测, 为保障广大人民群众的身体健康，提高人口素质，有效控制病毒性 肝炎（HBV、HCV）艾滋病和梅毒等传染性疾病的传播，加强肝炎、 艾滋和梅毒等传染病的预防与控制工作，国家制定了中华人民共 和国传染病防治法、艾滋病防治条例及最新的中国预防与 控制梅毒规划（2010-2020年）。, 按照卫生部临床输血技术规范相关规定,要求对输血前和 手术前(包括产前)患者进行血液传播性疾病的血清指标检测， 即乙型肝炎病毒、丙型肝炎病毒抗体(抗HCV)、人类免疫缺陷 病毒(型,型)抗体(抗HIV l/2)、梅毒抗体（TP）四项传染性 指标。 我国2012年发布的中国丙型病毒性肝炎医院感染防控指南 中要求：进行外科手术及侵入性诊疗操作(所有涉及外科操作 的内科、内镜以及妇科、产科、牙科等的常规医疗操作)患者 在进行操作前筛查丙肝病毒抗体；血液透析患者首次血液透 析前应进行丙肝病毒抗体检测，丙肝病毒抗体阴性者在血透 中建议定期(半年)进行丙型病毒性肝炎的筛查 这对于避免医源性感染、预防医务人员的职业感染， 防止出 现医疗纠纷有积极意义。,乙型肝炎, 属嗜肝DNA病毒科 完整的HBV颗粒(Dane颗粒)呈 球形,有双层衣壳(抗原)和含病 毒DNA的核心,HBsAg HBcAg,乙肝病毒颗粒, HBsAg用于构建病毒子，并 以小球形或小管状的形式而 分泌入血液中 血液中，HBV颗粒：HBsAg 约为1:1,000 - 10,000,HBsAg,逆转录,肝脏细胞,血液中,前基因组的 RNA,HBcAg,p22crAg HBeAg,完整的HBV,ssRNA,不完整 dsDNA,空心粒子,HBeAg,核,HBV 复制机制,HBsAg, 临床潜伏期45-180天,平均60-90天 类型:急性,重症肝炎,慢性及病毒携带 者 30-50 % 5岁或者5岁以上感染者产生 黄疸,5岁以下的黄疸发生率少于10% 临床表现为厌食,疲劳,恶心,呕吐,腹 痛,关节肌痛,低热,皮疹和黄疸 大多数成人感染后半年内会恢复且产 生免疫力. 感染HBV后,30-90 % 的 5岁 以下儿童和 2-10 % 5岁以上会演变成慢 性感染 15-25 % 慢性感染者因为慢性肝病过 早死亡,乙肝病程发展步骤,HBV急性感染,在患者出现症状之前，HBs抗原即出现于血液中。急性感染6个月内缓解。 急性感染恢复期HBsAg 值很低，但还是有传染性，如灵敏度不够未能检 测出来，献血、输血、手术、口腔治疗、怀孕分娩等存在风险,HBV慢性感染（携带者）,抗-HBc HBs抗原,HBe 抗原,抗-HBe,抗-HBs,Years,在受到感染的1岁的婴儿或围产期的婴儿中，大约90%的发展为慢性感染。他们成为 无症状的HBV携带者，在十多岁至二十多岁的年龄期间，会发生短暂的肝炎。他们可 能发展为慢性肝炎或肝硬化或肝癌。有些病例可能发生HBsAg的清除。,HBeAg s血清 转换,HBV携带者维持高水平的抗-HBc和HBsAg,HBsAg 血清,转换,慢性乙肝：一种不断进展的疾病,急性感染,慢性携带者,缓解,3050 年,慢性肝炎,稳定,疾病进展,肝硬化,代偿性肝硬化,肝癌,死亡,非代偿性肝硬化,12,慢性乙型肝炎治疗一般流程图,慢性乙型肝炎的治疗药物,乙肝的临床治疗途径：,筛查,诊断,治疗方法的 选择,监测治疗的 反应,治疗目标,HBsAg,ALT HBeAg 抗-HBe HBV DNA HBV 基因型 CBC 肝硬化,ALT HBeAg 抗-HBe HBV DNA HBsAg, 伴有肝炎症 状的个体 妊娠妇女 手术之前 供血,生化 HBeAg 抗-HBe 抗-HBc HBV DNA HBsAg 定 量检测,HBsAg 定 量检测,ALT HBeAg 抗-HBe HBV DNA HBsAg 定 量检测,HBsAg 定 量 检测,HBsAg 水平有自然扩增放大作用, HBsAg 是急性感染第一个可检测的标记物，也是早期诊断的重要指标之一； 乙肝病毒感染时产生的表面抗原是完整病毒颗粒的100010000倍，这种自然扩增放大效应使表面抗原 检测灵敏度比核酸扩增技术（NAT） 好； 台湾：NAT检测HBV献血者时，HBV DNA滴度非常低的慢性或隐性病人，其HBV DNA有可能波动到NAT检 测低限以下。NAT混合样品测试漏检了15.8% HBsAg阳性携带者； Wolfram Gerlich， 2010 EASL Abbott Symposium Presentation,丙型肝炎,丙型肝炎, 丙型肝炎（丙肝）是由丙肝病毒（HCV）引起的，以肝脏损害为 主的一组全身性传染病。其急性感染期症状不明显，易慢性化， 比例可达 50.0%-85.0%；10.0%-20.0% 的 HCV 感染者在感染20年 后发展为肝硬化，1.0%-3.0% 的人在感染30年后发展为肝癌。 在我国健康人群抗HCV阳性率约为3.2 % 以长江为界，北3.6%，南2.9% 全世界慢性HCV患者中，有24%左右生活在 中国 (Datamonitor Dec 2005), 中国的流行率是美国的十倍(Decision Resources Dec 6th 2006) 少数地区（宁夏、 河南）流行率在,9.6% 以上,2000年 (/eid 11 (1) : Jan 2005) 社会调查显示 在80年代到90年代：27.7%是由于 血液捐献引起; 只有2.6% 非血液传播. (CIPRA, 2005),HCV的结构,332nt,54nt,1,500,1000,1500 amino acids,2000,2500,3010,C E1 E 2/NS1 NS2,NS3,NS4,NS5,结构区域,非结构区域,60 nm,Glycoprotein 糖蛋白 Envelope 包膜 Viral RNA Core 核衣壳,HCV基因型, 6种主要基因型 (Genotypes 1 to 6): 每个基因型又有若干不同亚型 不同基因型对治疗效果的反应不一 分析试剂必须具有对不同基因型的检测能力 我国现状：1b，2a多见，1b为主；1a，2b，3b可见； 6型主要见于港澳地区及南方边境省份,2004 HCV audio web conference, Dr.ER Schiff, Miami University, Florida,Symptoms +/-,Time after Exposure,Titer,anti-HCV,ALT,Normal,Years,Months,HCV-RNA,HCV Core Ag,Symptoms +/-,Time after Exposure,Titer,anti-HCV,ALT,Normal,Years,Months,HCV-RNA,HCV Core Ag,Persistent Case: 70%,Cured Case: 30%,HCV 感染的典型血清学模式,急性HCV感染被完全治愈,急性HCV感染转为慢性感染,急性HCV感染的两种临床结果（血清学模式）：,HCV感染后的主要标志物,100 80 60 40 20 0,Anti- HCV,Time HCV RNA Window = approximately 1113 days HCV Ag Window = 1214 days Anti-HCV Window = 70 days(3rd Gen) = 82 days(2nd Gen),HCV- RNA HCV- Ag,抗-HCV检测的窗口期 3rd generation HCV antibody tests,82天,140-150天, （70天）,HCV,感 染,3rd gen,抗HCV的诊断流程,HCV诊断结果说明,HCV实验室检测方法,Anti-HCV IgG 检测 快速检测技术-金标法 酶联免疫吸附实验-大批量处理 化学发光技术-封闭式全自动化 补充确认实验-重组免疫印迹实验(RIBA) Anti-HCV 检测 HCV RNA的检测 HCV 分型,艾滋病,HIV (Human Immunodeficiency Virus 人类免疫缺陷病毒) AIDS (Acquired Immune Deficiency Syndrome 获得性免疫缺陷综 合症)：由人类免疫缺陷病毒（HIV）感染免疫细胞并破坏引起 后天性免疫缺乏的症状，俗称“艾滋病”,人类免疫缺陷病毒HIV,Retroviridae 逆转录病毒科 Lentivirus 慢病毒属 HIV-1/2 种 Human Immunodeficiency Virus,HIV p24 抗原单体,在体内容易诱导产生抗体 反应的部位,HIV-1:gp41（gp120）/（HIV-2：,gp36）,p24（gag）：核蛋白 感染初期以及血中病毒增加的时候作为HIV抗原可被查出 RNA p66/p51（RT）：逆转录酶 gp31（整合酶）,HIV病毒的构造,0.1m,HIV病毒的复制,Proviral DNA,前病毒DNA,HIV RNA,逆转录,Viral DNA,进入宿主基因组,逆转录酶 整合酶,病毒蛋白 蛋白酶裂解,融合的方式 进入细胞 病毒颗粒 衣壳装配， & 出芽方式到胞外,转录和加工,病毒 mRNA & 基因组 RNA 翻译 Viral precursor protein 病毒前蛋白, HIV存在 HIV-1和 HIV-2两种类 型 HIV-1在全世界范围内流行， 占全部感染者90%以上；HIV- 2主要流行于西非各国，其他 地区感染率很低 HIV-1已知有几种亚型组，其 中 M组占世界分布范围内的 大多数。 M组分 10种亚型 ， 而且相互之间还存在重组体。 亚型的分布地域性较为明显。,HIV 病毒的种类,中国HIV的流行分布, 截至2013年9月，联合 国艾滋病规划署 （ UNAIDS）公布中国HIV 感染人数850，000 中国艾滋病每天死 8000人，每天新患1.5 万,HIV的实验室检测, HIV 特异性抗体检测 酶联免疫吸附实验-大批量处理 化学发光技术-封闭式全自动化 快速检测技术-试纸条 确认实验-蛋白印迹试验(Western Blot) HIV 特异性抗原检测 Ag+Ab联合检测（同时定性检测HIV p24抗原和HIV-1或 HIV-2抗体）,0,50 40 30 20,70 60,80,100 90,IgG HIV1 病毒裂解产物,敏感性 特异性,无 IgM 无 HIV 2,1983-85,Sensitivity %,2002,P24+ IgG+IgM HIV1&HIV2 重组抗原 合成多肽 敏感性99.9% 特异性99.9%,第4 代,IgG + IgM HIV1&HIV2 重组抗原 合成多肽,1994,P24 抗原,敏感性 特异性,无 IgM,1987-90,第3代,第2 代 IgG HIV1+HIV2 重组抗原,第1代,敏感性 特异性,HIV-1 O 组,血清学检测 HIV 技术的进展,0 10,70 80 90 100,365,20 30,1代抗体检测 3代抗体检测 P24抗原检测 4代 Ag+Ab检测 17 22 31,窗口期: 3-5天,灵敏的联检,3代HIV抗体EIA,HIV p24 Ag 40 50 60,抗HIV抗体,p24 Ag EIA 1代 HIV抗体EIA,HIV Ag+Ab 联合检测缩短窗口期,Adapted from: Fiebig et al AIDS, 17:1871-1879 (2003),感染早期，在HIV抗体产生之前就可以检出HIV p24抗原。HIV抗原抗体(Ag+Ab) 联检检出HIV感染的时间比HIV抗体检测早3-5天,梅毒,梅毒Syphillis,所谓 梅毒，是指一种由螺旋体科的梅毒螺旋体（Treponema pallidum ； T.P.）菌引起的感染症，主要是由性行为或者类似行为引发感染而导致的 一种性感染症。T.P.从皮肤和粘膜的伤口侵入体内，在局部组织中增殖后 进入血中，曼延至全身,显示出各种各样的症状，是一种“全身性慢性感 染症”。 1905年，德国的细菌学者夏乌登和赫夫曼发现了梅毒的病原体（苍白螺 旋体）。TP菌不能在体外（in vitro）培养，而只能在老鼠的睾丸内培养。,梅毒螺旋体 (长6-20m 直径0.1-0.2m),Spirochaetaceae 螺旋体科 Treponema 螺旋体属 T. Pallidum种,Nichols 株, 诊察临床症状 初期硬结、硬性下疳、扁平湿疣等 病原学检查 原理：一期、二期梅毒时，取硬下疳、 扁平湿疣、黏膜斑等皮损部位组织液 或淋巴结穿刺术得到的组织液，在暗 视野显微镜下，光线从聚光器的边缘 斜射到涂片上的梅毒螺旋体而发出亮 光，从而根据其特殊形态和运动方式 进行检测。 方法： （1）暗视显微镜检查 （2）镀 银染色法 （ 3）核酸检测 血清学检查 脂质抗体检测法 梅毒螺旋体抗体（TP）检测法,梅毒诊断方法