实验二细菌基本形态及特殊结构观察.ppt

实验二 细菌基本形态和特殊结构观察,一 目的要求,1 了解普通光学显微镜原理及构造。 2 学习并掌握普通光学显微镜油镜的正确使用方法。 3 用油镜观察细菌基本形态。 4 了解负染色原理、细菌芽孢染色基本原理，油镜观察细 菌的荚膜、芽孢形态。 5 细菌运动性观察。,二 基本原理, 普通光学显微镜的结构 普通光学显微镜的光学成象原理 3 荚膜染色 4 芽孢染色, 普通光学显微镜的结构,（1 ) 机械系统 包括镜座、镜臂、载物台、物镜转换器、镜筒及调节器等 （2 ) 光学系统 包括反光镜、聚光器、物镜、目镜等。, 普通光学显微镜的光学成象原理,（1）显微镜的放大倍数 放大倍数：目镜的放大倍数与物镜的放大倍数之乘积 。,目镜 ： 物镜,低倍镜：10X 高被镜：40X 油镜：100X,10 X 100X,目镜,物镜, 显微镜的分辨率,油镜比低倍镜、高倍镜观察物体更清晰。,原因： 油镜分辨率高于低倍镜、高倍镜 油镜汇聚光线的能力大于低倍镜、高倍镜, 分辨率是指显微镜能够分辨的最小距离即鉴别限度（R） R=（2NA） (为入射光波波长； NA为显微镜数值孔径),NA= .sin,为标本、物镜之间介质的折射率。 为光轴上物点发出的光线与物镜有效直径两端最大夹角角度的 一半。,低倍镜= 高倍镜=空气=1.0 ， 油镜香柏油=1.52 低倍镜 高倍镜 油镜 ， sin低倍镜 sin高倍镜 sin油镜 NA低倍镜 NA高倍镜 NA油镜 所以，油镜的分辨力比高倍镜、低倍镜高。,汇聚光线的能力油镜高于低倍镜、高倍镜。,3 荚膜染色,主要成分多为糖类，无色透明且不易着色常用负染色观察。负染色是将细菌细胞和背景着色，从而把无色透明、不着色的荚膜结构衬托显现出来。,菌体,荚膜,菌胶团： 多个菌体的荚膜融合为一个团状物，内有多个菌体。,4 芽孢染色,细菌芽孢壁厚而致密，透性低，难于染色，但一旦被染色又难于脱色。因此先用强着色力的染料（孔雀绿）处理，并同时加热，使菌体以及芽孢均着色，后使菌体脱色，而芽孢保留原色，经复染（蕃红），菌体与芽孢分别以不同颜色显现。,芽孢,菌体,对有芽孢的菌体进行简单染色（只用一种染料染色）。 菌体和芽孢着色情况如何？,三 实验材料,细菌基本形态标本片：大肠杆菌片 枯草杆菌片 八叠球菌片 细菌特殊形态标本片：枯草芽孢杆菌芽孢片 示范片观察：荚膜片观察 悬滴法观察活细菌的运动,四 实验内容及步骤,1 细菌基本形态观察 2 细菌特殊结构观察 3 悬滴法观察活细菌运动,1 细菌基本形态观察,学习油镜的正确使用方法。 用油镜观察 大肠杆菌 枯草杆菌 八叠球菌,2 细菌特殊结构观察,学习油镜的正确使用方法。 用油镜观察细菌特殊结构 枯草芽孢杆菌芽孢（油镜） 钾细菌荚膜（高倍镜）（示范）,3 悬滴法观察活细菌运动,悬滴片制好后，用低倍镜调焦，换高倍镜观察。 注意：视野中暗光观察。运动的菌体发亮。,观察前准备 ：显微镜的准备和调试视野明亮 低倍镜观察 高倍镜观察（此步可以省略） 油镜观察：加香柏油，油镜头浸入香柏油中后调焦 显微镜油镜头的清洗和归位（二甲苯清洗）,油镜使用主要步骤,注意 ！ 显微镜调焦方法,五 实验报告,绘 大肠杆菌 枯草杆菌 八叠球菌形态示意图 绘枯草芽孢杆菌芽孢形态示意图,菌 名：大肠杆菌 放大倍数：16100 X,细菌形态示意图绘图要求：, 选择形态典型的部分细菌细胞绘图。 仅绘出细菌细胞轮廓，但不同细菌的细胞大小比例应 适宜，且形态上应有所区分。 细菌与视野相对大小应符合实际，应将细菌细胞排布 在视野中离开中心的部位（即绘空心图）。 必须注明菌名、