天然药物化学研究的经典方法.ppt

,有效成分研究的一般途径,提取方法,1 溶剂提取法 2 水蒸汽蒸馏法 3 其他方法：升华法，压榨法，吸收法，酶提取法,分离方法,一、溶剂法 1 固-液溶剂分离法：部位分离 2. 两相溶剂萃取法 （1）简单萃取法 被萃取液的准备：水悬浊液密度为1.1-1.2之间 萃取剂的选择及其用量，次数 乳化及其破坏方法 （2）逆流连续萃取法 萃取效率高，溶剂用量少，不乳化，可工业化。 （3） 液滴逆流分配法 适用于分离同分异构体或同系物及多肽，蛋白质等高分子化合物，热不稳定化合物。,二.沉淀法,1、溶剂沉淀法（分级沉淀法） 2、酸碱沉淀法 3、专属试剂沉淀法：如胆固醇、明胶、雷氏铵盐 4、盐析法:如氯化钠、氯化铵、硫酸铵、硫酸钠、硫酸镁,三、分馏法,利用液体混合物中各成分的沸点的不同而分离的方法。,四、结晶与重结晶法,（1）结晶的条件 （2）重结晶溶剂的选择 （3）重结晶过程和析晶方法 （4）微量重结晶 （5）结晶纯度的判断,五、透析法与超滤法,用于纯化皂苷、蛋白质、多糖、多肽 透析膜：动物性膜，合成膜。分离量小，实验室用 超滤膜：直径110nm,小分子能滤过。多为合成膜，分离量大，适用于工厂和实验室,六、色谱分离法,一、分类 按分离过程原理不同可分为： 吸附色谱法 分配色谱法 凝胶渗透色谱法 离子交换色谱法 亲和色谱法 按流动相类型来分: 气相色谱(GC); 流相色谱(LC),按操作方式来分: 1、薄层色谱（TLC） 薄层色谱：操作、展开方式及注意事项 制备型薄层色谱（PTLC）：特点、操作过程 离心薄层色谱法（CTLC） 高效薄层色谱（HPTLC）：吸附剂粒度范围更窄（57微米）。并采用特殊的粘合剂，分离能力较普通TLC高，展矩短，斑点集中，分离效果好，高效微量快速。,2、柱色谱 高效液相色谱（HPLC） 制备型中压柱色谱（MPLC） 制备型低压柱色谱（LPLC） 制备型快速柱色谱（闪柱色谱 FC） 常压柱色谱（LC） 柱色谱操作：梯度洗脱及溶剂解混、等度洗脱干柱色谱的操作 减压柱色谱（VLC） 干柱色谱 3.纸色谱(PC) 4.毛细管色谱(CTC),检识方法和结构研究,1 理化检识 初步确定化合物类型和简单的取代情况 2 色谱检识 TLC，PC，GC或 HPLC 标品对照法，文献对照法，多谱联用法 3 波谱分析 UV，IR，NMR，MS，CD，X-ray,本节结束,吸附色谱法 （Adsorption Chromatography）,分类： 物理吸附：（物理）吸附色谱法 化学吸附 半化学吸附：聚酰胺色谱法（氢键吸附） 大孔吸附或小孔树脂色谱法（吸附性和分子筛原理相结合） 过程三要素：吸附剂（固定相） 洗脱剂/展开剂（流动相） 化学成分,吸附剂 1、极性吸附剂 2、非极性吸附剂 洗脱剂或展开剂的选择 洗脱规律 操作方式和操作技术 适用范围,A,B,C,D,洗脱剂或展开剂的选择,分配色谱法 （ Distribution Chromatography）,原理：利用混合物中各成分在固定相和流动相中分配系数的差异而达到分离的。 载体:硅胶、硅藻土、纤维素 溶剂系统 ：选择原则 关键：固定相和流动相的相互饱和。常用键合固定相材料，如RP2，RP8，RP18。 亲脂性顺序：RP18RP8RP2 适用范围,分类： 正相色谱：固定相为强极性溶剂如水、甲酰胺（HPLC中常用氰基与氨基键合相），流动相为弱极性溶剂如氯仿、正丁醇等。分离极性较大的成分。洗脱时极性小的成分先下。 反相色谱：固定相为弱极性溶剂如石蜡油（HPLC中常用ODS与C8键合相） ，流动相为强极性溶剂如水、甲醇。分离脂溶性成分，洗脱时极性大的成分先下。 操作方式：分配柱色谱(特点)、TLC、纸色谱（PC）,高速逆流色谱法（HSCCC）：依靠聚四氟乙烯的蛇形分离管的方向性和高速行星式旋转所产生的离心场作用，使无载体支持的固定相（液体）稳定地保留在分离管中，并使样品和流动相单向低速通过固定相，实现混合，分配和分离。优点：无需载体，克服不可逆吸附消耗，样品变性污染吸收峰拖尾等缺点，可定量回收样品，重现性好，分离纯度高，速度快。,凝胶过滤色谱法（Gel Filtration chromatography）,原理：分子筛的原理。 洗脱规律：Ve=K1-K2lgM 按分子由大到小顺序先后出柱。 凝胶的种类： 葡聚糖凝胶（sephadex G） 适用于水溶性大分子化合物的分离纯化。 羟丙基葡聚糖